摘要

西尼羅河病毒1999年以後在拉丁美洲許多國家傳播;然而，沒有報告爆發疫情，而且在大多數國家中，病毒還沒有被分離出來。在古巴，自2005年以來記錄了該病毒的傳播，但尚未成功分離該病毒。開展了一項實地研究，以從蚊子中分離病毒，並在人和鳥類中檢測黃病毒和西尼羅河病毒抗體。這項研究是在2006年報告首例西尼羅河病毒人間病例的桑提Spíritus省拉西爾佩市的兩個地方進行的。在兩地共采集人血清標本340份、成年鳥類標本391份(32種)和蚊蟲標本234份(9種)。在人血清樣本中，60%對登革2型病毒呈陽性反應，0.65%對西尼羅河病毒呈陽性反應。在鳥類中，14.4%的陸禽和61%的水禽具有黃病毒抗體;1.4%的陸生和19.4%的水生病例特異性感染西尼羅病毒。捕獲的最具代表性的蚊子種類是這種致倦庫蚊．西尼羅河病毒沒有被分離出來，也沒有被分子方法檢測到。然而，通過RT-PCR，其中一些池對黃病毒呈陽性反應，這表明一種昆蟲黃病毒的存在。

關鍵字

黃病毒;蚊子;鳥類;抗體;古巴

簡介

蚊子傳播的病毒是世界各地公共和獸醫衛生問題的一個原因。它們大多數是通過吸血節肢動物媒介傳播的，主要分為三個屬:黃病毒(黃病毒科)、甲病毒(黃病毒科),Orthobunyavirus(病毒之一)[1]。然而，有一些黃病毒顯然是昆蟲特異性(isv)[2]。這些黃病毒包括細胞融合劑病毒卡米提河病毒庫蚊黃和廣平病毒等[3]。

西尼羅病毒(WNV)是一種通過蚊子傳播的黃病毒，其傳播周期涉及多種野生鳥類和主要是庫蚊的蚊子種類。人類和大多數其他非鳥類物種是偶然宿主，因為它們無法產生足夠程度的病毒血症來感染易感蚊子。

西尼羅河病毒1999年在紐約市出現後，從北美蔓延到加勒比海和南美洲。到目前為止，盡管西尼羅河病毒在拉丁美洲傳播，但尚未報告暴發疫情，僅在其中一些地區報告了西尼羅河病毒分離[4-7]。

在古巴，自2005年以來記錄了西尼羅河病毒的傳播[8]，但尚未分離出該病毒。在本研究中，我們進行了昆蟲學、鳥類學和血清學調查，以了解西尼羅河病毒的活性，並試圖分離該病毒在蚊子體內的基因和係統發育特征。在La Sierpe和El Jibaro兩個地方進行了實地研究;兩者都隸屬於發現首例人間病例的桑提Spíritus省的拉西爾佩市。

材料和方法

調查地區

La Sierpe有其陸地地形特征，由蜿蜒的水道和穿過該地區的道路組成。這裏沒有海灣、海灣或海角，是靠近海岸的一小片沼澤，主要是平坦的邊界。它的介質溫度約為25和27攝氏度，年降水介質南部1200毫米，北部1500毫米。這些條件吸引了雁形目、鴴形目、錐形目和格狀目的許多鳥類種類，也吸引了大量蚊子。選擇進行實地研究的地區有兩個地方:拉西爾佩和埃爾吉巴羅;都隸屬於拉西爾佩市(圖1)。從該市中選取了8個捕獲區(P5，拉西爾佩，El Jíbaro, Cementerio La Sierpe, El Almendrón, Granja Botijuela, Sur y, Granja Pitajones)。在選擇采樣地點時，要考慮到後院家禽的存在和安全的車輛通道。

圖1:La Sierpe在古巴Spíritus桑蒂省的本地化

人類的研究

從La Sierpe和El Jibaro地區分別采集了137個和167個人類樣本。將血清用PBS/抗生素從濾紙中洗脫，稀釋1/20，以便使用ELISA抑製方法(EIM和ELISA試劑盒(Focus Technologies, Cypress, CA, USA)檢測IgG Den和WNV抗體。

如前所述，采用EIM檢測抗登革熱IgG[10,11]。簡單地說，用聚苯乙烯板(Costar號3591)吸附人抗登革熱IgG;阻斷後，在每個孔中加入先前稀釋1/40 PBS加0.05% Tween-20的登革2抗原。稀釋1/20至1/ 40960的血清樣品進行檢測。每個樣品添加100 μ L的體積。人抗登革過氧化物酶偶聯IgG稀釋1/3000 PBS加0.05%吐溫-20和2%胎牛血清。添加含OPD的襯底。孵育30分鍾後反應停止。測試在492納米處讀取。抑製率計算為:

抑製%=[1-(OD樣品/OD陰性對照)]× 100

每個樣品的抗體效價被認為是最高的稀釋，抑製率≥50。

根據製造商說明，使用Focus Technologies公司的IgG對人類血清進行西尼羅河病毒篩查。簡單地說，樣品在樣品稀釋液中被1:101稀釋。洗孔用1 ×緩衝液浸泡5分鍾後，換杯。加入100微升樣品和對照品60分鍾。洗板3次，每個孔中加入100µL的過氧化物酶偶聯山羊抗人IgG。重複洗滌，10分鍾內加入100µL的底物試劑。以100µL的停止試劑停止反應，在λ=450 nm處進行講座。計算是按照西尼羅病毒Dx SelectTM (FOCUS診斷，代碼EL0300G)的指示進行的。

反應性血清樣品進一步用空斑減少中和試驗(PRNT)檢測WNV (NY99，加拿大安大略省，2001分離株)、SLEV(聖路易斯腦炎病毒，Parton株，美國型培養集目錄編號:VR-1265)和登革病毒(登革2型，NG-C株)。按照前麵[8]描述的方式執行PRNT。如果該病毒的90% PRNT滴度是試驗中使用的其他病毒的中和滴度的4倍，則該樣本被認為血清陽性。終點滴定被定義為使斑塊形成減少90%的血清的最高稀釋度。

鳥類捕捉

在一周內，由早上七時三十分至下午六時三十分放置九米霧網，捕捉陸生雀鳥。頸靜脈或翼靜脈使用注射器(1cc)和針(23計)采集血清樣本，並收集在1.5 ml Sarstedt小瓶中或用Nobutu濾紙吸收(體積由體重決定)。采集了血樣後，這些鳥被放了出去。記錄了標本的年代、產地、鳥類種類、性別、相對年齡和種類等數據。每個地方用獵槍捕獲水鳥1-2天。

用阻斷酶聯免疫吸附試驗(b-ELISA)測定黃病毒抗體和西尼羅河病毒特異性。

將吸附有血清樣本的Nobutu濾紙剪開，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)和1%的抗生素按1/10稀釋稀釋，在40°C保存過夜。

使用2株單克隆抗體3.1112G WNV(亞型KUNV, Chemicon國際產品代碼MAB8152)檢測特異性WNV抗體，使用4G2檢測黃病毒抗體(CDC目錄編號:VS2378)。

b-ELISA elisa方法采用Blitchiv[12]進行了一些修改和WNV b-ELISA SOP 2008-1加拿大公共衛生局人畜共患病和特殊病原體國家微生物實驗室。

96孔微滴度板(Costar號3591)用100 μ L乳鼠腦WNV NY 99抗原按1/100稀釋包被乳鼠正常腦1/250稀釋，用碳酸氫鈉緩衝液(50mm碳酸鈉，50mm碳酸氫鈉，pH 9.6)作為對照抗原。塗層板分別密封，在40°C下孵育過夜。次日，用含0.1% Tween 20 (PBS- t)的300 μ L PBS和含5%脫脂牛奶的200 μ L阻斷緩衝液(PBS)清洗5次。b-ELISA按照Blitchiv[12]進行一些修改和WNV b-ELISA SOP 2008-1加拿大國家微生物實驗室公共衛生局(National Microbiology Laboratory Public Health Agency)執行。

96孔微滴度板(Costar號3591)用100 μ L乳鼠腦WNV NY 99抗原按1/100稀釋包被乳鼠正常腦1/250稀釋，用碳酸氫鈉緩衝液(50mm碳酸鈉，50mm碳酸氫鈉，pH 9.6)作為對照抗原。塗層板分別密封，在40°C下孵育過夜。第二天，用300 μ L含0.1% Tween 20 (PBS- t)的PBS和200 μ L阻塞緩衝液(每孔添加5%脫脂PBS, 37°C孵育40 min)衝洗5次。在相同條件下再洗滌5次後，加入稀釋1/10的鳥血清樣品50µL, 37°C孵育2 h。再次洗板5次，將單克隆抗體以指定稀釋倍數稀釋在阻塞緩衝液中，加入每孔(50 L)， 37°C孵育1 h。洗淨培養皿，每孔以1:20 00的稀釋倍數加入辣根過氧化物調兔抗小鼠IgG (Amersham) 50µL, 37℃孵育1 h，再孵育5次。等體積的OPD(聚苯二胺)和過氧化物酶溶液混合，每孔加入50µL。用自動讀板儀測定了波長為492 nm處的光密度。單抗結合抑製百分數[8]計算為100-[(TS-B)/(CS-B)]-100，其中TS為試驗血清的平均光密度，CS為對照血清(未感染雞)的平均光密度，B為背景光密度。

蚊子集合

在拉西爾佩市的五個區捕獲了蚊子;P5, El Jibaro, Pista Campos de Arroz, Pista de Aviones和La Sierpe鎮。在選定的地點用CDC光捕集器(512型)、紫外線捕集器和重力捕集器捕獲。每個站點都在一周內進行監測。捕獸夾在下午晚些時候放置，第二天早上取走。

從每個捕蚊器中收集的全部蚊子被冷凍殺死，然後轉移到2毫升聚丙烯冷凍管標記的小瓶中。根據蚊種、屬、地點、日期、誘蚊器數、誘蚊器類型、誘蚊器數進行集蚊。小瓶被保存在幹冰上，直到被運送到實驗室。蚊池在1000 μ l的BA-1培養基(1 × 199培養基中加入厄爾氏鹽至最終體積為100 ml 0.05 M Tris緩衝液，pH 7.6, 1%牛血清白蛋白，4.7 ml 7.5% NaHCO)中進行三分_3.溶液和100單位/毫升青黴素/鏈黴素)，使用銅珠優質BBS(克羅斯曼公司E Blomfield NY 14443 1-800-7氣槍)均質，並通過渦流攪拌。從每個研磨樣品中收集200 L的等量樣品，進行分離和生物分子分析。

免疫熒光法(IFA)病毒分離和病毒抗原篩選

利用白紋伊蚊細胞係(克隆C6/36-HT)從蚊子勻漿池中分離病毒。將100 μ L的蚊子勻漿等分加入細胞培養管中接種C6/36-HT細胞單分子膜。在33℃溫度下孵育1小時後，加入1 mL含2 mmol/L穀氨酰胺的MEM培養基，2%熱滅活胎牛血清(FBS)和抗生素(青黴素和鏈黴素)。每日監測培養，檢測細胞病變效應(CPE)。顯示CPE的細胞單分子膜隨後被收集。為了確定感染源為黃病毒感染，每個分離試管的細胞在PBS中洗滌兩次，並在10孔載玻片上幹燥;然後在丙酮上固定10分鍾，-70°C保存直到使用，使用抗黃病毒4G2單抗(anti- yellow virus 4G2 mAb)、RT-PCR對載玻片進行IFA篩選。

從蚊子的勻漿和C6/36 HT中的病毒分離中提取RNA使用Qiagen RNA簡易試劑盒和製造商的建議。根據標準操作程序:通過實時Taqman®RT-PCR檢測西尼羅病毒蚊子，章節:現場研究，SOP編號:2003-1，使用通用引物(表1)，設計了一種Taqman實時RT-PCR方法。

蟲媒病毒組	引物	分子的協議	基因組區域/大小(bp)
黃病毒	WN3”NC-forward CAGACCACGCTACGGCG WN 3 ' nc -反向CTAGGGCCGCGTGGG WN 3 ' nc探針TCTGCGGAGAGTGCAGTCTGCGAT	Taqman實時rt - pcr	10668 - 10684 10770 - 10756 10691 - 10714/103
	Flav1 AATGTACGCTGATGACACAGCTGGCTGGGACAC Flav2 TCCAGACCTTCAGCATGTCTTCTGTTGTCATCCA	rt - pcr	NS5 9273 - 9305 10102 - 0136/863
	CFD2 GTGTCCCAGCCGGTGTCATCAGC MAMD AACATGATGGGRAARAGRGARAA	rt - pcr	9006 - 9029/252 ns59232 - 9258

表1:黃病毒靶群檢測的引物和分子協議

采用RNeasy 96病毒分離試劑盒(Qiagen，編目#204443)提取的RNA對蚊蟲進行實時RT-PCR分離。簡單地說，Real-time RT-PCR方法如下:50℃逆轉錄20分鍾，95℃熱星Taq活化15分鍾，2個步驟循環，95℃和60℃變性1分鍾，20秒退火延伸。周期閾值<38用於識別和確定taqman陽性簡單例。

此外，從蚊子的勻漿和C6/36 HT中分離出的黃病毒引物進行了傳統的RT-PCR(表1)。簡單地說，將10µl的RNA添加到50µl的最終體積中，其中包含5µl的One - Step RT-PCR緩衝液5x, 1µl的dNTPs, 5µl的Q溶液，1µl的PCR引物和2µl的One - Step RT-PCR酶Mix。RT(50°C 30分鍾)之後是95°C變性15分鍾和45個擴增循環(94°C 30秒，60°C 1分鍾，72°C 1分鍾)，最後是72°C 10分鍾的延伸步驟。

結果

鳥的研究

共抽取351隻成年鳥的血。其中陸禽284種，水禽67種(表3和表4)。陸禽中17%對黃病毒有抗體，1.4%對西尼羅河病毒有抗體。家麻雀是常住非遷徙鳥類，對黃病毒和西尼羅河病毒抗體比例最高，分別為10.2%和1%。黃病毒抗體陽性率為56.7%，西尼羅河病毒抗體陽性率為11.9%。水禽黃病毒抗體陽性者占61%，西尼羅河病毒抗體陽性者占13.4%。

學名	普通的名字	學名	普通的名字
Dumetellacarolinensis	灰色的貓鵲	Seiurus aurocapilla	灶巢鳥
會polyglottos	北部Nockingbird	Parkesia noveboracensis	北部Waterthrush
Parula美國	北部Parula	Parkesia motacilla	路易斯安那州Waterthrush
一點木蘭	木蘭鶯	Geothlypis trichas	常見Yellowthroat
Setophagatigrina	角可能鶯	Passerdomesticus	麻雀
一點caerulescens	包括黑藍色鶯	Divesatroviolaceus＊	古巴的黑鳥
一點加冕	黃色的殘餘鶯	Molothrus bonariensis	閃亮的燕八哥
一點褪色	Praire鶯	Tiaris canorus＊	古巴Grassquit
一點palmarum	棕櫚鶯	Tiaris olivaceus	黃色臉Grassquit
Mniotiltavaria	黑白鶯	Zenaida macroura	哀鳩
Setophagaruticilla	美國紅尾鴝	Columbina passerina	鴿子的共同點
Helmitheros vermivorum	一起鶯	Charadriusvociferus	小水鳥
阿拉斯discors	Blue-winged蒂爾	Coccyzus merlini	偉大的lizard-cuckoo
Crotophaga ani	Smooth-billed Ani	Himantopus mexicanus	黑頸鶴等支撐物
Plegadis falcinellus	光滑的宜必思	Tringa melanoleuca	更大的黃足鷂
Tringaflavipes	較小的黃足鷂	Calidris minutilla	至少鷸

表2:捕獲雀鳥的種類

物種	抗體黃病毒	抗體西尼羅河病毒	居留身份
灰色的貓鵲	1 (0.35%)	1 (0.35%)	遷徙的冬天 居民
北部 隻知更鳥》	1 (0.35%)	-	非移民永久居民
麻雀	29 (10.2%)	3 (1.05%)	非移民永久居民
古巴的黑鳥＊	1 (0.35%)	-	非移民永久居民
閃亮的燕八哥	2 (0.7%)	-	非移民永久居民
黃色臉Grassquit	7 (2.46%)	-	非移民永久居民
大蜥蜴——杜鵑	1	-	非移民永久居民
Smooth-billed Ani	4	-	非移民永久居民
古巴Grassquit＊	4	-	永久居民

表3:對黃病毒和西尼羅河病毒有抗體的陸生鳥類
西尼羅河病毒:西尼羅河病毒;
*特有物種

物種	鳥類與抗體對黃病毒	鳥西尼羅河病毒抗體	居留身份
Blue-winged蒂爾	10 (15%)	3 (4.47%)	冬季居民
黑頸鶴等支撐物	10 (15%)	-	雙峰
更大的黃足鷂	1 (1.49%)	-	冬季居民
光滑的宜必思	13 (19.4%)	5 (7.46%)	雙峰
較小的黃足鷂	1 (1.49%)	-	冬季居民
至少鷸	3 (4.47%)	-	冬季居民

表4:具有黃病毒和西尼羅河病毒抗體的水禽

人類的研究

在La Sierpe(137個樣本)和El Jíbaro(167個樣本)地區采集了340個人類樣本。在La Sierpe樣本中，29.1%的登革熱IgG抗體陽性，47.5%的登革熱2抗體中和。ELISA Focus技術檢測結果顯示，每個地區僅2個樣本檢出西尼羅河病毒IgG抗體，PRNT檢測結果顯示其特異性中和抗體效價為1:80。在El Jíbaro地區，28.7%的樣本對登革熱IgG抗體呈陽性反應，20.8%的樣本對Den 2產生中和抗體。兩個地方的樣品PRNT - SLEV均為陰性。

收集了234個蚊池，共9種蚊子(一個。albimanus,。鯽魚,Oc。sollicitans, Oc。肩胛肌;致倦庫蚊(Cx致倦庫蚊))．的殘雪。quinquefasciatus是兩地感染流行率最高的最具代表性的物種(表5)。

位置	蚊蟲流行率(無陽性池/無總池檢測RT-PCR/ 引物Flav1/2)	蚊子流行率(無陽性池/無總池檢測。rt - pcr / 引物MAMD / CFD2)
La Sierpe	15.7% (3/19)	10.5% (2/19)
El鄉下佬	0% (0/19)	21% (4/19)

表5:勻漿中黃病毒RNA陽性樣品的頻率這種致倦庫蚊池

從Cx中分離出66個病毒。quinquefasciatus,殘雪。nigripalpus,。albimanus, Oc。索利塔斯和M. titillans均表現出檸檬酸作用，並對黃病毒呈陽性反應。提取的rna經Real-time RT-PCR檢測西尼羅河病毒均為陰性。然而，CPE的存在和IFA陽性提示C6/36引物中存在黃病毒。這一結果導致我們使用黃病毒特異性引物(Flav 1 Flav 2和CFD2和MAMD引物)對RNA的NS5編碼區進行傳統的RT-PCR[13-15]。

從C6/36中提取的rna和分離物與2組引物一起使用。分離物中的所有樣本和均漿中的3個樣本對黃酮-1和黃酮-2引物均呈陽性，並呈現與NS5等量的條帶，分子量為863 bp，對應黃病毒屬(圖2A-2D)。另一方麵，7個樣品來自勻漿，8個樣品來自分離物，CFD2和MAMD引物呈陽性(圖3和圖4)。

圖2:用黃病毒引物Flavi 1和Flavi 2一步RT-PCR分離C6/36
兆瓦:分子量;NC:負控製;C6/36細胞RNA提取;PC:積極的控製;西尼羅河病毒RNA

圖3:用MAMD/CFD2引物一步RT-PCR檢測蚊子的勻漿
兆瓦:分子量;NC:陰性對照(非模板);C +:積極控製

圖4:使用CFD2和MAMD引物對分離株進行一步RT-PCR。陽性樣本2、3、4、17(弱)、36、40、43和60;252 MW pb
兆瓦:分子量;NC: C6/36細胞陰性對照RNA提取;PC:積極的控製;西尼羅河病毒RNA

討論

西尼羅河病毒與其他黃病毒如SLEV、西部馬腦脊髓炎和東部馬腦脊髓炎一樣，在鳥類和主要是庫蚊[16]的蚊子之間循環。候鳥被認為是西尼羅河病毒最重要的擴增宿主，有助於在北美城市地區傳播該病毒和SLEV病毒[17,18]。

據報告，在動物和人體內存在黃病毒傳播。從國家血清學調查[19]或在黃病毒監測[8]中發現了黃病毒人抗體，這使我們了解了其中一些病毒的傳播情況，如東部馬腦炎病毒(EEEV)、登革熱、SLEV、西尼羅河病毒、基孔肯雅病毒(CHIK)和寨卡病毒[20]。血清學研究表明，西尼羅河病毒在古巴的循環及其在人類中的持久性直到2011年[9,21]。

正如這些結果所指出的，在拉西爾佩市，登革熱人抗體的總流行率(57.8%)高於其他黃病毒(西尼羅河病毒0.65%，斯萊夫病毒0%)。西尼羅河病毒疾病在拉丁美洲國家的低發病率一直被許多觀點所爭論。其中，異型黃病毒抗體的預先存在可以影響以前感染DENV的人群，使他們對西尼羅河病毒產生耐藥性或不那麼敏感[6,22]。就我們的情況而言，這一斷言可能是一種解釋，因為自從古巴建立登革熱實驗室監測以來，已經報告了幾次登革熱暴發和流行病[20]。

此前對鳥類的研究表明，在1988年、1989年和1994年期間出現了黃病毒抗體，特別是SLEV和EEE病毒[23]，在2011年馴養的Gallus Gallus[24]中出現了西尼羅河病毒抗體。

西尼羅河病毒在美國擴大後，古巴建立了對鳥類的監測，並於2005年在出現第一例西尼羅河病毒人間病例後結束。在這些年中，沒有觀察到顯著的鳥類死亡率。對全國被動監測的1828隻死鳥進行PCR檢測，結果均為陰性。采樣的鳥類主要屬於卡拉形目、雀形目、雁形目、哥倫比亞形目、格魯伊形目、條紋形目、佩萊尼形目和錐形目，其中200餘種(來源古巴哈瓦那熱帶醫學研究所國家監測實驗室)。

西尼羅河病毒在古巴的傳入情況未知[8]。考慮到西尼羅河病毒可能通過候鳥傳播的猜測，以及後來證明候鳥是西尼羅河病毒[25]的潛在傳播媒介，考慮到我們的結果和涉及的鳥類種類，我們假設該病毒是通過這種方式傳入該國的

據報道，顯示黃病毒抗體的大多數物種是古巴島[26]南部靠近S. Spiritus省的Jardines de la Reina群島珊瑚島的永久或冬季居民。一些鳥，如北方嘲笑鳥，此前已報道有黃病毒抗體，包括西尼羅河病毒[27-29]。具有西尼羅河病毒特異性抗體的鳥類中，2種為水棲和陸棲冬季候鳥(藍翅藍鴨和灰貓鳥)，2種為常住鳥類(家麻雀和朱鹮)。

Sancti Spíritus省，特別是La Sierpe市的Sur del Jibaro稻田一直是研究水稻種植地區之一，因為稻田對古巴鳥類的重要性[30- 32]。這些研究表明，大部分記錄的鳥類全部或部分來自於北美，代表為podicipedformes、peelecaniformes、Ciconiiformes、Anseriformes、Gruiformes和Charadriiformes[32]目。

灰貓鳥是一種經常在古巴越冬的候鳥，藍翅藍鴨[33]。灰貓鳥與蟲媒病毒的關係已被深入研究，證明了其作為EEV宿主的能力，並在西尼羅河病毒[34]的維持和傳播中發揮了重要作用。

藍翅藍鴨是一種遷徙水鳥，在古巴記錄最多，數量也很多，對控製稻田中各種令人討厭的雜草有很大影響[35]。到目前為止，我們還沒有在藍翅藍鴨中發現西尼羅河病毒的記錄，但有人認為它與鴨科其他物種一起可能是禽流感病毒的宿主[35,36]。眾所周知，藍翅藍鴨會長途遷徙到中美洲、加勒比和南美洲的一些地區。它是最早向南遷移的物種之一，也是最後返回北方的物種之一[36,37]，這些特征有助於地理傳播，並使它們在遷移地點成為病毒感染的可用宿主。

對古巴稻田水鳥中朱鹮雙峰種進行了深入研究;它與東部馬腦炎(EEE)病毒[38]有關，具有高滴度病毒血症和[39]高死亡率。關於西尼羅河病毒，在英國和西班牙發現了這種鳥類的中和抗體，盡管是低滴度[40]。

家麻雀對西尼羅河病毒抗體的鳥類數量較多。這種行為是可能的，因為它的世界性行為，所以它可以在城市、郊區和農村景觀中找到[41]，這支持了它在SLEV和WEEV傳播周期中的含義。與西尼羅河病毒相關，西尼羅河病毒爆發期間和之後的實地研究證實家麻雀是重要的放大宿主。同時考慮到病毒血症值，大多數雀形目鳥類被認為非常適合感染西尼羅河病毒的蚊子[42-44]，它們也是專門喂養庫蚊種[45]的血食來源。在我們的研究中，這個物種是收集最多的(91%)和殘雪。quimquefasciatus是最主要的。

經RTPCR檢測，所有蚊池均為黃病毒陽性。以前的昆蟲學和生態學研究美國醑劑已經證明了殘雪。quinquefasciatus是該地區頻度和彌散度較高的物種[46,47]。按蚊屬(Anopheles)和Ochlerotatus屬(Ochlerotatus)也有較高的[47]頻次和相對豐度。對該蚊種的研究表明，它的偏好主要是雀形目鳥類，包括家麻雀、家雀、灰貓鳥和美洲知更鳥[48,49]。基於這一特征，在美國、巴西、澳大利亞和夏威夷等不同地區都發現了這種行為殘雪。quinquefasciatus使得西尼羅河病毒有可能傳播給附帶宿主，包括馬和人。

盡管我們擁有“感染”西尼羅河病毒的幾乎所有因素(該地區以前的西尼羅河病毒病例、能夠傳播西尼羅河病毒的庫蚊動物群和作為病毒的主要或放大宿主的易感宿主)，但沒有發生這種情況。所有分離的西尼羅河病毒實時PCR均為陰性。

用黃病毒特異性引物(Flav 1、Flav 2和CFD 2、MAMD) RT-PCR擴增得到的條帶分子量分別為832 bp和252 bp，屬於黃病毒屬。從C6/36病毒分離物和蚊子勻漿中提取的樣本表明存在該屬病毒，排除了任何isv汙染的C6/36 HT細胞的可能性。

isv和西尼羅河病毒的生態在古巴是完全不為人知的。這些結果是填補黃病毒在該島生態學空白的第一步。一扇巨大的門被打開來回答許多問題:古巴鳥類對西尼羅河病毒有抵抗力嗎?這是在這個國家流行的一種無毒毒株嗎?哪種古巴蚊子更能傳播黃病毒?isv是否在不同種類的蚊子中傳播?這種潛在的感染是否會阻礙其他黃病毒的傳播?為了確定這種可能的ISV並回答所有這些問題，進一步的研究正在進行中。

免責聲明

向本刊投稿的作者所表達的觀點不一定反映“Pedro Kouri”熱帶醫學研究所或作者所屬機構的觀點。

鳴謝

首先，我們要感謝加拿大公共衛生署國家微生物實驗室人畜共患疾病和特殊病原體的Michael Drebot、robin Lindsay、Harvey Artsob和Antonia Di Bernardo團隊的所有支持。生態與係統研究所鳥類學家、省政府主席、省衛生廳廳長、省獸醫廳廳長、省邊防獸醫廳廳長、省動植物廳長、省邊防廳長、省民防廳長、漁司廳長、省流行病學廳長、省病媒控製廳長、聖斯皮圖斯省和佩德羅熱帶醫學研究所Kourí。我們深深感謝盧爾德·穆吉卡和馬丁·阿科斯塔的批判性審查和建議。

參考文獻

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條信息

Aritcle類型:研究文章

引用:Pupo-Antúnez M, Vázquez Y, Andonova M, Vázquez S, Morier L等(2018)古巴西尼羅病毒的現場研究。J新興病毒4(1):dx.doi.org/10.16966/2473-1846.142

版權:©2018 Pupo-Antúnez M，等。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2017年6月14日

接受日期:7月17日,2018年

發表日期:2018年7月24日,