摘要

在其他散發性疾病的背景下，各種感染原的定期季節性暴發需要為政府衛生係統確認每一位患者的診斷。任何季節性暴發都以散發病例開始，發生在基礎設施極少的偏遠地區。因此，有必要采用一種更容易的臨床檢測和診斷方法。基因檢測方法需要適當的基礎設施和訓練有素的人員。然而，也有必要牢記床邊基因檢測診斷的成本，特別是在低預算的衛生係統。通常在偏遠的流行地區，向衛生係統求助往往會導致病人遲遲得不到衛生支持。在許多感染原中，在原發和繼發症狀性疾病中，感染原增殖部位的間隔時間超過一周。因此，感染因子有足夠的時間被免疫係統清除。然而，抗體反應以IgM的形式持續較長時間。低廉的成本、試劑的穩定性以及由部分受過培訓的衛生工作人員處理檢測的便便性，使其很容易發生季節性疫情，並可對其發出警報。 It is thus proposed that research on antibody methodology should be supported as a preferred method along with defined clinical symptoms. This will help public health system to contain the morbidity and possibly the spread of the outbreak.

關鍵字

病毒診斷;季節性暴發;IgM ELISA;基因檢測。

季節性病毒爆發

在世界各地，病毒性疾病的季節性暴發取決於降雨、溫度、病媒和擴增宿主的數量、水源、個人衛生意識、衛生狀況以及包括偏遠位置在內的許多其他因素。對於患者來說，即使在發達國家，進入農村或初級衛生係統並獲得準確診斷也很困難。在衛生資源較少的國家，診斷的臨床支持和基礎設施以及患者的經濟狀況影響到疫情的結果和傳播。在世界各地每年的季節性暴發中，在大多數病例中檢測到一組類似的臨床症狀模式[1]。多種病因已被檢測到[2]，在許多情況下，它們仍未被診斷[3]。此外，在少數由並發亞臨床感染引起的類似臨床症狀中也檢測到[2]。由相同或密切相關病毒的亞臨床感染引起的每個個體的背景免疫反應使臨床表現、反應和診斷複雜化。一些例子是登革熱(DEN)、日本腦炎(JE)、西尼羅(WN)、單純皰疹病毒(HSV)、腸病毒(EV)等[4-8]。不斷變化的環境條件和患者從已知的流行地區到新地區的快速往返也給快速準確診斷帶來了問題[8-11]。在嚴重的臨床情況下，如急性腦炎綜合征(AES)，這個問題會被放大或加劇，它至少有20種病原體[2,3,7,12]。 In India, various regions are known for their regular outbreaks [1]. Controlling few of these using preventive measures, along with vaccine coverage using the available vaccines [13, 14] is possible. Quick diagnosis leads to improving treatment modalities and has reduced few of them Influenza H1N1pmd09 [15]. Diagnosing multiple types of seasonable infectious agents from the sporadic infections at out-patient department (OPD) level or in admitted cases is a humongous load and task, especially on public health hospitals.

診斷方法的現狀

應當記住的是，在許多欠發達國家，包括印度的一些地區，由於缺乏對前驅症狀的了解、經濟、交通和缺乏可到達的醫療設施，特別是在農村地區，患者在急性後狀態下隻能到有設施的適當醫院接受治療。相比之下，在發達國家，印度隻有少數幾個邦和幾個主要城市;認識、方法、可獲得性和充分的臨床支持使在急性症狀(發病後2天以內)[3]期間獲得治療成為可能。作為一個基本規則，急性診斷可以通過基因檢測檢測感染源，或主要檢測IgM抗體或恢複期抗體滴度高於急性樣本滴度[16,17]。在急性後狀態下，由於難以檢測病原，使用IgM抗體存在，而且即使在類似或交叉反應的藥物中也具有較高的特異性[17-20]。事實上，在戊型肝炎病毒(HEV)、麻疹、巨細胞病毒(CMV)等病例中;在疫苗接種失敗和再次感染的病例中，許多科學家正在研究IgM/IgG抗體的渴望性[18]。

散發感染和新發感染的分子檢測方法

隨著聚合酶鏈反應(PCR)和定量PCR (qPCR)等病毒檢測方法的出現和簡化，檢測和發現感染原的遺傳差異變得越來越重要[14,15,21,22]。在持續時間較長且為散發感染的病毒感染中，如呼吸道合胞病毒(RSV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HSV、CMV等，輪狀病毒遺傳方法是一種被接受和證實的方法[12]。使用散發感染，如皰疹病毒、巨細胞病毒、eb病毒、結核分枝杆菌(M.tb)基因檢測似乎是一種必要的方法，因為它們都是持續性感染的重新激活。在監測發現和分型脊髓灰質炎以及非脊髓灰質炎EV (NPEV)的情況下，從糞便樣本中分離病毒株後的RTPCR可發現和根除野生型脊髓灰質炎。然而，由於成本和專業知識的原因，直接對糞便樣本進行RTPCR並沒有作為主要的診斷方法。在SARS、大流行性流感、埃博拉、中東呼吸綜合征(MERS)和尼帕等新出現的病毒中，通過分子手段檢測其各自的基因有助於發現和診斷[14,21]。值得注意的是，在這些情況下，基因檢測係統的識別仍然是唯一的方法，從而顯示了其重要性。這是因為有明確的位置、症狀和特定的藥物差異。在這種情況下，快速檢測有助於隔離受感染者，並控製所有這些病毒的傳播，如H1N1、H5N1和SARS。然而，就成本而言，在一個大的人口受同一代理人的影響，多年來，它使它無利可圖。在基於Loop介導等溫擴增(LAMP)的現場檢測中，基因的分離也需要特定的儀器[22]。然而，通常的例行流感感染是根據臨床症狀進行診斷和管理的，特別是在印度等國家。 International network in tracking these acute viral infections with airborne capacity has been used to contain some of these seasonal infections [15]. Based on experience from Brazil during Zika virus infection, although subclinical and non-severity of Zika virus was occurring for some time, larger outbreak with altered presentation helped in detecting the emerging virus. Once subclinical infection will increase, Zika will be labeled as the seasonal outbreak like DEN.

使用基於抗體的檢測方法進行季節性診斷

上述知識指出，分子方法適用於局部新發感染，而不適用於季節性暴發。事實上，即使有RTPCR方法可用於乙腦、DEN、甲肝病毒(HAV)、CHIK、麻疹、腮腺炎等，抗體方法甚至在世界各地的初級衛生係統中被使用。如前所述，急性和亞急性期IgM抗體的存在仍然是這些感染的主要主要檢測手段。IgM具有特異性的優勢，因為它是第一種免疫反應，是一種五聚體蛋白，反應最敏感的感染表位被靶向。在許多感染中，嚴重的臨床表現疾病需要原發和繼發部位。在許多急性感染中，大約需要3-5天或更長時間才能出現臨床症狀，如麻疹、腮腺炎、AES等病例，這導致了診斷的主要檢測方法[23-25]。即使在較新的突變體和交叉反應劑中，也隻有較新的表位會產生反應，以IgM抗體反應的形式產生。用於檢測IgM抗體的M抗體捕獲(MAC) ELISA方法的出現，使其快速、簡便和適用於即使在偏遠地區，並且作為季節性疫情的第一步，是一種準確的方法[20,23]。MAC ELISA的基本方法是用預先包被的抗人IgM抗體捕獲樣品中的IgM，然後加入所需的抗原。用酶聯病毒反應抗體檢測抗原。 Specificity of MAC ELISA especially for flaviviruses by using antigen source as entire virion. This leads to accessibility of specific antigenically epitopes only to pentameric IgM antibody. Further, card antibody methods are being developed for single patient’s diagnosis. It should be noted here that although genetic tests are available for persistence of Hepatitis B virus (HBV), HCV and Human Immunodeficiency virus (HIV), antibody based virus detection is being used. In fact, in the age of polio eradication, IgM ELISA test has been thought as a better method of detection in newer regions of polio virus circulation [26].

在爆發後，背景循環隻能通過免疫測試，如病毒中和測試[27]。這是通過比較抗體反應在急性和恢複期的血清學反應。T和B記憶細胞形式的免疫反應提供了過去感染的全部曆史。同時，可以檢測病毒背景循環水平的記錄，包括對亞臨床感染等許多相關病毒感染的反應。

問題與未來需求

分子檢測方法的重要性是巨大的，它在控製和控製幾種傳染因子方麵發揮了主導作用，例如嚴重急性呼吸係統綜合症(薩斯)、甲型H1N1流感、禽流感、埃博拉病毒和脊髓灰質炎病毒。這對初步確定新發感染也很重要。然而，它對大規模季節性病媒傳播感染的影響，如DEN、基孔肯雅熱(CHIK)、乙腦、WN、水媒Rota、NPEV和Salmonellatyphiis最小的。

在基層衛生支持最少的國家，分子方法作為一種基本診斷是不可能的，因為在源頭一級缺乏儀器設施和訓練有素的技術人員[20]。此外，由於成本的原因，地方政府支持的區級醫院不可能對每一種循環生物進行檢測，以達到最終診斷。酶聯免疫吸附法(ELISA)抗體檢測，特別是MAC酶聯免疫吸附法(MAC ELISA)在當地得到了廣泛的認可。因此，抗體水平檢測、ELISA試劑盒或床邊調查仍是唯一可取的方法。即使在印度這樣的國家也是如此。

未來的研究目標

在分子檢測和抗體檢測方法兩種情況下，需要使用使用目前流行病毒的本地試劑盒。針對乙腦、WN、DEN、寨卡、聖路易斯腦炎(SLE)、黃熱病(YF)等黃病毒的MAC ELISA，這些病毒在同一區域的交叉反應和共循環給鑒別診斷帶來了問題。經中和試驗[8]證實，乙腦和WN之間的MAC ELISA交叉反應可證實WN為新發腦炎。需要開發具有不同表位的新抗原以迅速到達適當的試劑。根據交叉反應和亞臨床感染的背景循環負荷，每個試劑盒應在每個地區的季節前後對臨床、亞臨床和正常人進行血清調查分析，以達到每個試劑盒的效用。在陰性對照中，由於合並感染，截止時間可能發生變化。需要建立一個監管係統來批準在不同領域使用這些工具包。研究需要通過多種抗體的抗原方法開發更新的檢測流程。同樣地，用同樣的方法檢測急性感染中分泌的抗原，如用於DEN的NS-1，也可以用於其他黃病毒。同樣，基於針對流感A、B、C抗原表位的特異性單抗，而不是基於qPCR診斷，可以開發各種流感診斷的檢測。 Tests to differentiate secondary infection, emerging of latent viruses like CMV, Rubella are being worked actively. This is more important for DEN serotype infections and DEN-Zika, WNSLE, JE-WN co-infection. It will lead to mapping of ground level data all over the world, to alert various newer areas and etiological agents.

鳴謝

這份文件中提出的個人觀點是在印度浦那國家病毒學研究所不同層次工作多年的結果。多年來，他得到了印度醫學研究委員會、衛生研究司、衛生和家庭福利部、印度政府的支持。

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條信息

Aritcle類型:觀點文章

引用:Gore MM(2017)觀點:在診斷季節性病毒爆發時，有價值的是使用基於抗體的技術，而不是基於分子的技術。J新興疾病病毒3(3):doi http://dx.doi。org/10.16966/2473 - 1846.136

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出版的曆史:

收到日期:9月22日

接受日期:2017年11月22日

發表日期:2017年11月30日