病毒學與新發疾病- Forschen

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研究文章
新生非洲綠猴的發病機製和免疫應答(的大白aethiops)接種猴免疫缺陷病毒(SIVagm)

Maria N Kiio1瓦萊裏婭·N·博塞裏1Damian Odoyo1Elephas Munene1n Kamau約瑟1Atunga Nyachieo2Nyamongo Onkoba1 *

1靈長類動物研究所熱帶傳染病科，肯尼亞卡倫-內羅畢
 2生殖生物學和衛生部，靈長類動物研究所，肯尼亞卡倫-內羅畢

*通訊作者:Nyamongo Onkoba，靈長類動物研究所，郵箱24481- 00502，肯尼亞首都內羅畢，E-mail: bwonkoba@gmail.com


總結

背景:猴免疫缺陷病毒(SIVs)是一組不同的病毒，可自然感染包括非洲綠猴(AGMs)在內的多種非洲靈長類動物。事實證明在活的有機體內SIV在恒河猴體內的傳代導致了導致猴獲得性免疫缺陷綜合征的病原病毒的選擇。然而，感染猴免疫缺陷病毒(SIV)的成年AGMs不表現出免疫缺陷的臨床症狀。

摘要目的:因此，本研究試圖確定SIVagm在體內連續傳代後新生AGMs是否具有致病性。

方法:將從自然感染的AGM的血漿中分離出來的無細胞SIVagm接種到一個新生的AGM上，然後每隔兩周將骨髓連續輸注到其他三個AGM上。采用限製性稀釋共培養法進行病毒分離和定量。抗原捕獲ELISA和聚合酶鏈反應檢測病毒存在。血清轉換用抗體ELISA法測定，用Western blot法證實。

結果:病毒分離和血清轉化證實了SIVagm在新生agm中成功傳代。1年後，所有動物均未出現與SIVagm感染相關的臨床症狀。將SIVagm感染新生兒骨髓輸注naïve新生兒誘導持續性感染和抗siv抗體反應。然而，這並沒有顯示疾病的存在，這表明AGMs具有固有的耐藥性，可以殺死SIVagm或使AGMs的免疫細胞失去功能。

結論:結果為研究AGMs中SIV疾病發病機製的缺失提供了有價值的信息。

關鍵字

非洲綠猴;猴免疫缺陷病毒;串行通道;發病機理

簡介

猿猴免疫缺陷病毒(SIVs)是一組不同的病毒，自然感染廣泛的非洲靈長類動物，包括非洲綠猴(AGMs)和黑白眉猴(SMs)。雖然自然感染在野生種群中廣泛存在，但感染一般不會導致免疫缺陷。然而，實驗接種亞洲獼猴的結果是一種與人類艾滋病非常相似的免疫缺陷綜合征[1]。

超過40種非洲非人類靈長類動物自然感染了猴免疫缺陷病毒[2-4]。其中，非洲綠猴Chlorocebus在野生[2]中，數量最多，地理分布最廣，最常感染SIV。

在自然宿主中，急性感染期間對SIV感染的快速先天免疫反應已被證明可以介導T細胞增殖，但缺乏調節SIV複製的能力[5,6]。先天免疫是通過在SMs和AGMs中誘導和上調幹擾素響應基因來激活的[7,8]。類似的現象也出現在一小部分艾滋病毒感染者身上，他們具有高度病毒毒性，但CD4維持在較高水平+T細胞計數。從這些病毒非進展者中分離出來的T細胞的遺傳特征與自然宿主相似;與進行性感染相比，幹擾素刺激的基因表達減少，但與慢性感染的自然宿主[9]相似。

為了建立agm中SIVagm感染的各種研究;(i)病毒複製活躍，設定點病毒載量(VLs)與艾滋病毒感染患者的病毒載量相似或更高[10- 13]，(ii) CD4細胞顯著減少+T細胞在急性感染期間[11,12,14,15]，隨後在外周血中迅速恢複到接近感染前的水平，並在黏膜部位延遲和不完全恢複[10,11,14,16]，(iii)由於保留了Th17細胞亞群[17]，Th17和T調節細胞之間維持平衡，(iv)急性感染期間對病毒強烈但短暫的炎症反應，隨著急性感染向慢性感染[18]的過渡而解決，(v)短命細胞[15]的生產性感染，(vi)通過對SIV的適應性免疫反應部分控製病毒複製[19-25]，(vii) CD4+急性和慢性感染過程中的T細胞凋亡[26,27]。因此，我們假設CD4+T細胞凋亡和Th17細胞保存使AGMs避免腸病、黏膜屏障的破壞和隨後的微生物易位[14]，以及慢性免疫激活和疾病進展，同時允許CD4+存在高病毒載量的T細胞恢複[15]。

此外，與siv[28]的其他自然宿主相似，agm有許多不需要CD4的適應性+T細胞從病毒介導的殺傷在活的有機體內．這些特征包括CD4細胞比例較低+T細胞表達CCR5共受體[14,15]，輔助T細胞在進入記憶細胞池時下調CD4+分子[29,30]。總的來說，這些適應性支持了一個概念，即天然宿主中SIV感染的良性過程是數千年來共同進化的結果[31,32]。

然而，由於現場采集和儲存樣本的困難，以及缺乏覆蓋廣泛SIV多樣性[33]的分析試劑，迄今為止尚未在野生猴子中進行充分的SIV感染發病機製研究。少數已完成的發病機製研究支持一種古老的協同進化關係，表明SIVagm高度適應它們的宿主，感染SIVagm的agm通常不會進展到免疫缺陷[15]。目前還不清楚為什麼血清陽性的AGM母親不會將SIVagm病毒傳播給新生兒。因此，本研究利用來自血清陰性母親的naïve新生agm，來確定免疫naïve新生agm與其天然SIV的實驗感染是否會導致發病。

材料與方法
研究動物和倫理宣言

新出生的非洲綠猴的大白aethiops我們從靈長類動物研究所(IPR)獲取了SIV血清陰性的水壩，並將其用於研究。這些動物在出生24小時內被使用，每天用商業嬰兒配方(雀巢，加拿大)喂養，並補充水果和蔬菜。這些動物被安置在研究所動物收容設施的二級生物安全隔離設施中。研究方案和程序得到了國家認可的機構科學倫理和審查委員會和知識產權動物護理和使用委員會的批準。研究中使用的動物數量符合3Rs原則。

在實驗接種和取樣過程中，動物用10 mg/kg體重的氯胺酮(氯胺酮與羥嗪的比例為5:3)固定。每天檢查agm的一般健康狀況、體重，並在取樣前觸診脾髒和淺表淋巴結，以檢查病毒對生長和周圍淋巴器官的影響。

實驗設計

新生AGMs在出生24小時內靜脈接種2ml SIVagm 1532的脫殼4-克隆-8細胞分離物的無細胞上清液或以前接種過SIV的AGMs的骨髓。這些新生agm經ELISA、western blot和病毒培養均為SIV陰性。1例新生兒(AGM 1807)接種500組織培養感染劑量的SIVagm 1532，該SIVagm 1532是從自然感染的AGM 1532中分離出來的無細胞SIVagm 1532。另外三個新生agm(1811、1812和1813)接種105TCID50從先前接種的新生兒中提取細胞相關SIVagm病毒。為了研究對一種不相關抗原的免疫反應，所有4隻接種了SIVagm的動物在出生時肌肉注射0.2 ml的Havlogen破傷風類毒素，並在16歲時加強免疫th整個32周nd周齡。陰性對照動物AGM1888接種2ml磷酸鹽緩衝鹽水作為對照。

接種的準備

接種物來自自然感染SIV的AGM 1532的血漿。病毒在蛻皮的4-克隆-8細胞上培養3天，上清在SIV陰性AGM激發的PBMCs上繁殖5天。本研究使用的SIVagm接種劑的強度有其TCID50確定。簡單地說，完全RMPI中10倍連續稀釋的1ml血漿與106每稀釋2次，在24孔板中更換4-克隆-8細胞1 -105)．培養物在37°C加濕CO中培養2孵育箱，每周兩次檢查是否存在合胞體。計算血漿病毒載量，用TCID數表示50每毫升血漿。用未稀釋的培養上清接種新生agm。

樣品采集和處理

血:在SIVagm給藥當天，接種後2周和4周通過靜脈穿刺從每隻動物的股靜脈抽肝素化血，此後12個月每月抽一次。用200 μ l作全血計數。使用標準自動血液學分析儀(荷蘭)對每隻動物進行全血細胞計數，並將血液學參數與IPR為非洲綠猴建立的標準參考參數進行比較。其餘血液離心15分鍾以分離血漿。然後再將血漿離心5分鍾以去除殘餘細胞。遊離血漿用於遊離病毒的定量和分離，剩餘血漿保存於-200°C，用於抗體ELISA和western blot檢測。用沉澱梯度分離法分離外周血單個核細胞(PBMCs)。100萬個PBMCs與molt-4-clone-8細胞共培養用於病毒分離和定量。其餘pbmc儲存在液氮和-70°C中，直到進一步使用。

淋巴結:在接種前和接種後，通過經皮活檢從每隻動物中提取一個腹股溝和/或一個輔助淋巴結，並在直徑60 mm的組織培養皿中無菌剝取到淋巴結單個核細胞(LNMCs)的單細胞懸液中。然後將LNMCs與molt-4-clone-8細胞共培養以恢複病毒。簡單地說，完全RPMI中10倍連續稀釋的LNMCs與molt-4-clone-8細胞在24孔板中共培養，每次稀釋2個重複(106－101)．培養物在37°C加濕CO中培養2孵育箱，每周兩次檢查合胞體是否存在。用抗原捕獲ELISA法定期檢測培養液中SIV主要核心蛋白p27的存在。陽性培養結果用於確定細胞相關病毒載量。

病毒分離、檢測和定量

通過對PBMCs和含有molt-4clone-8細胞的血漿進行極限稀釋培養試驗，確定外周血中細胞相關病毒載量和血漿中無細胞病毒載量。簡單地說，在完全RPMI和兩次重複10倍連續稀釋PBMCs1到105pmcs與10株共培養6每稀釋兩次，在24孔板中更換4-克隆-8細胞。此外，106pbmc與2x10共培養6在T25燒瓶中更換4-克隆-8細胞。所有培養物均在37℃濕化CO中培養2孵育箱，每周兩次檢查合胞體是否存在。每四天更換一次培養基，用抗原捕獲ELISA法檢測培養上清中SIV主要核心蛋白p27。molt -4-克隆-8細胞在細胞濃度下降時添加。終止前培養維持45天。計算細胞相關病毒水平並以TCID表示50每106PBMCs。可檢測到的細胞相關感染病毒的最低水平為1tcid50每106PBMCs。當分離和量化淋巴結、脾髒、肝髒、大腦和骨髓單個核細胞中的病毒時，采用相同的共培養程序。在完全RPMI中連續10倍稀釋血漿，兩次重複101－105血漿與106在24孔板中更換4-克隆-8細胞。培養方法如上所述。計算細胞遊離病毒載量並以TCID數表示50每毫升血漿或腦脊液。用ELISA試劑盒檢測組織培養基、血漿或血清中SIV核心抗原的存在性，檢測SIVagm。如果存在，抗原會與被抗體包裹的微孔結合;識別SIV的生物素化人抗體，在3 ' 3 ' 5 ' 5 '四甲基聯苯胺底物存在的情況下，與共軛鏈親和素辣根過氧化物酶和過氧化氫反應。生產了一種彩色產品，並在光度計中測量了它的光密度。培養停止試劑終止反應，產生的顏色強度與血漿、血清或組織培養基中SIV抗原的含量成正比。根據試劑盒提供的方法和分光光度計在450nm處的吸光度讀數進行測定。吸收值大於或等於截止值的樣品被認為是SIV抗原陽性。試劑盒製造商的平均陰性對照和一個預先確定的因子0.030定義臨界值。

用聚合酶鏈式反應(PCR)檢測病毒

DNA提取:用酚氯仿蛋白酶-k法從細胞球中提取DNA。細胞顆粒中加入200 μ l 10% SDS和5 μ l RNase, 37℃孵育1 h。加入250 μ l的蛋白酶-k, 55°C孵育5h。加入200 μ l的苯酚，在3000 rpm的轉速下攪拌10分鍾。將水層轉移到新的獵鷹管中，在200 μ l苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)中提取兩次DNA。水相收集到幹淨的獵鷹管和三體積無水乙醇和10% (v/v) 200µl 7.5 M醋酸鈉在-200°C孵育一夜後沉澱DNA。然後，在3000轉/分的速度下，將這些管子跨度30分鍾，將沉澱的DNA製成顆粒。然後倒出多餘的乙醇，在70%的乙醇中高速旋轉15分鍾，將DNA顆粒洗滌兩次。倒出乙醇，DNA顆粒在吸墨紙上風幹。將DNA顆粒懸浮於200 μ l的TE緩衝液中，用於PCR檢測。

引物PCR擴增:反應在DNA熱循環器中進行，以擴增SIVagm原病毒。第一輪擴增使用SIVagm的引物SIVAGMAGA (5 ' AAG TAC CAA ATT AAA CAT TTA ATA TGG GCA GG 3 ')和sivagmagb (5 ' CAT TGT CTC TGA TAT GGC CAA ATT TTC CAC A 3 ')嘔吐基因。簡單地說，1 μ g從AGM PBMCs中提取的DNA被添加到調整到最終濃度為100 mM Tris-HCl (pH 8.3)的雞尾酒輪中;500mm KCl;1.5 m MgCl2；0.02%明膠;每個dATPdGTP和Dttp 200µl;0.5µl SIV特異性引物和1單位Taq DNA聚合酶，覆蓋50µl礦物油。用三倍蒸餾去離子水將反應體積調整到50 μ l。在94°C第一次變性4分鍾後，反應進行32次擴增。每個循環包括94°C的1分鍾變性，55°C的1分鍾退火和72°C的1分鍾延伸。從第一次PCR產物和第二輪PCR中取出5個µl嘔吐引物對，SIVAGMGAGC (5 ' CAC CAG GAA AAG AAA GTG AAA GAC ACA GAG GAA GC 3 ')和SIVAGMGAGD (5 ' GCA TTC TGA ATG AGC AAA GAT TCT GTC ATC CA 3 ')。第二次擴增在第一次擴增的片段內部產生了一個片段，這使得SIV檢測的靈敏度提高。最終PCR產物在含有1µl溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠中，紫外光背景下檢測。陽性對照和陰性對照以及DNA分子量標記物納入檢測。

抗siv抗體反應

用酶聯免疫吸附法檢測血漿中抗siv抗體，用western blot法檢測。采用兩種抗siv抗體ELISA檢測係統檢測血漿中抗siv抗體。一個係統使用合成的SIVmac肽作為抗原，而另一個係統是商業抗hiv /HIV-2 ELISA試劑盒。

SIV合成肽ELISA係統

所使用的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)是對先前描述的一種技術的改進。ELISA微升板包被來自SIVmac跨膜糖蛋白保守免疫顯性區域的21個氨基酸SIV合成肽。肽序列h - nawacafrqvchttvpwpnaso - oh在碳酸氫鹽緩衝液中稀釋至最終濃度0.4µg/孔。然後密封，在室溫下孵育1小時，然後在4℃下儲存一夜。隨後洗滌兩次，用阻塞緩衝液在37°C孵育1小時。洗三次後，將對照和試驗血清按1:100的比例稀釋100 ml，一份一份滴入孔中。然後封板，37°C孵育3小時。洗淨後，用1:2800稀釋的山羊抗猴1gG與過氧化物辣根偶聯物的100 μ l在37°C孵育2小時。再次洗滌，以鄰苯二胺為顯色劑，過氧化氫為底物，室溫孵育30分鍾。加入50µl的稀釋硫酸，在450nm的分光光度計上讀取光密度，參考630 nm濾光片，停止反應。 The cutoff value was defined as the sum of mean negative control and a predetermined factor of 0.100.

HIV-1/HIV-2抗體ELISA試劑盒

使用Genelavia商業試劑盒間接酶免疫法檢測血漿中HIV-1和HIV-2抗體(賽諾菲巴斯德診斷公司，馬恩內-拉-科奎特，法國)。將待測血漿樣品與對照血清用試劑盒自帶的稀釋液緩衝液按1:5稀釋，100µl滴入微板孔中。洗淨孔，然後加入過氧化物酶標記的山羊抗人IgG和IgM抗體，在過氧化氫作為底物和OPD作為顯色劑的存在下孵育，然後將多餘的共軛部分洗掉。停止反應，在酶聯免疫吸附測定儀上測定吸光度。在樣品上測量的吸光度允許存在或不存在HIV-1和或HIV-2交叉反應抗體。吸光度值等於或大於臨界值的樣品被認為是陽性的。截斷值定義為隨試劑盒提供的截斷對照血清的平均吸收率的十分之一。

抗siv抗體反應的確認

為了確認SIVagm感染的新生兒agm血漿中存在抗siv特異性抗體，根據製造商的說明進行新的Lav Blot II western Blot。該檢測基於間接ELISA的原理，采用含有構成HIV-2/SIV病毒的所有蛋白質的硝化纖維素載體。將滅活的HIV-2病毒蛋白按分子量在遊離還原介質中用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然後轉移到硝化纖維素膜片上。硝化纖維素膜片被切成幾條，每條用於運行單個測試樣品/對照。這些條帶被再水化，並與測試樣品和對照血清孵育。如果存在抗hiv -2抗體或交叉反應抗體，它們將與識別的特定病毒蛋白質結合。在洗掉多餘的和未結合的抗體後，這些條帶被堿性磷酸酶標記的抗人IgG抗體孵育。結合物與滑蓋支架上捕獲的抗hiv -2或交叉反應SIV抗體結合。洗掉未結合和多餘的共軛物後，加入顯色液使結合到硝化纖維素條上的複合化合物的酶活性發生變化。特殊的彩色條帶的出現使血清中抗siv抗體的存在得以檢測。 The bands were classified asenv(gp 140、gp 105及gp 36)嘔吐(p56,p26, p16)和波爾(2)。根據製造商的說明，如果測試樣品在所有三個區域中至少出現一個波段，即陽性樣品env，嘔吐而且波爾．SIVagm糖蛋白抗體與HIV-2蛋白gp140、gp105和gp36發生交叉反應。如果沒有條帶形成或出現的條帶不能被歸為環境，則樣本被定義為陰性，嘔吐或波爾．

淋巴結病理

福爾馬林固定，石蠟包埋的淋巴結組織切片去石蠟和水複水。然後將組織切片置於顯微鏡載玻片上，在無塵烤箱中60°C幹燥，並用蘇木精和伊紅染色。顯微鏡下觀察染色組織，觀察SIVagm感染後淋巴結的病理特征。

結果
病毒血症

我們估計了SIVagm連續傳代接種物誘導naïve新生兒AGMs病毒血症的能力，並將其表示為TCID50每106pbmc(表1)。

表1:TCID50% SIVagm接種用於naïve新生兒agm

抗siv抗體反應

sivagm接種兩周後，所有接種siv的新生agm血漿中均檢測到抗siv特異性抗體。在16歲時觀察到兩個抗siv抗體峰值th接種後一周，40歲時th接種SIVagm後一周。在agm1811的血漿中，抗體水平除在40處有明顯的峰值外，無明顯升高th接種SIVagm後一周。結果顯示，與隨後接種的其他3例新生兒相比，AGM 1811抗體應答較低。24日觀察到明顯的低抗體應答th所有動物一周，32號ndagm1812和AGM1811以及安樂死。從24頁開始th與AGM 1807和AGM 1811相比，AGM 1812和AGM1813的抗體應答較低(圖1)。

圖1:接種SIVagm的新生agm抗siv抗體應答

血液學的參數

在所有四個接種siv的新生兒中，與未感染的對照組相比，SIVagm接種後血液參數檢查沒有顯示出任何核苷酸變化。所有測定值都在年齡組內未感染的agm的正常範圍內。除一隻動物AGM 1811外，該動物的白細胞總數保持在4-15 × 10的正常確定範圍以下3.在整個研究期間，未觀察到其他接種siv的AGMs血液係統異常(表2)。

表2:接種SIVagm的新生兒agm的血液學價值

在活的有機體內病毒檢測

SIV病毒擴增前病毒序列嘔吐在整個研究過程中，在AGM PBMC顆粒中檢測到。PCR擴增產物大小約為100個堿基對，與分子量相對應嘔吐為SIV的核心蛋白(圖2和圖3)。

圖2:western blot顯微照片顯示SIVagm在接種了SIVagm的AGMs中存在

圖3:接種SIVagm的新生兒AGMs SIVgag原病毒序列的顯微照片

抗破傷風抗體反應

4隻SIVagm新生兒agm在出生時接種破傷風類毒素後，均在接種SIVagm 2周後產生抗破傷風IgG抗體應答，16周時抗體下降，32周時抗體最低nd第一次SIVagm接種後一周持續到安樂死。初級反應不如次級反應強烈(圖4)。

圖4:新生兒AGM接種SIVagm後抗破傷風抗體應答的研究

SIVagm感染的淋巴結病理

組織病理學檢查顯示，接種siv的新生AGMs的淋巴結竇內有多核巨細胞和輕微腫脹。淋巴結中的原病毒載量並不顯著高於PBMCs(圖5)或血漿(圖6)。淋巴結表現出反應性變化，主要影響t細胞區域，侵蝕生發中心，從而使生發中心出現損失或減少的外觀。改變包括彌漫浸潤的蒼白染色淋巴細胞和大的活化組織細胞。T細胞和b細胞均有明顯的核仁，染色切片上偶見有絲分裂象。在某些情況下，觀察到淋巴細胞漸進式轉變為免疫母細胞。淋巴結包含不規則形狀的大發育不良生發中心，經常合並，從而扭曲淋巴組織的結構。組織學診斷顯示在安樂死時非化膿性淋巴結炎伴皮層旁淋巴樣增生。淋巴結SIVagm感染分級:agm1811為重度感染，agm1812和agm1813為中度感染，agm1807為輕度感染。未感染對照組新生兒AGM 1888的淋巴結有明確的生發中心、皮層旁和皮層。淋巴樣結構未見明顯改變(圖7)。

圖5:接種SIVagm的新生AGMs的PBMC病毒載量

圖6:注射SIVagm的新生兒agm血漿病毒載量

圖7:淋巴結組織病理學特征的顯微照片

實驗動物的臨床狀況

在整個研究過程中，盡管存在持續性感染、病毒分離能力和淋巴結病變，但這些動物仍保持臨床健康。與年齡匹配的對照組相比，SIVagm接種的新生兒agm在整個研究期間體重都增加了(圖8)。

圖8:接種SIVagm的新生兒agm體重增加

討論

我們的研究結果表明，SIVagm能夠在連續傳代後誘導新生agm病毒血症，這與在自然SIVagm感染的成人、HIV-1感染的人類和sivmac感染的恒河猴中觀察到的結果一致[34-36]。病毒在組織中的表達表明，病毒局限於淋巴細胞和巨噬細胞，與猴子SIVmac和SIVagm感染中觀察到的分布相似[35,37,38]。早期研究表明，新生兒AGM的CD4+ t淋巴細胞池明顯高於成人AGM，因此，預計AGM新生兒更容易感染SIVagm，從而導致發病。然而，事實並非如此，因為pbmc和血漿中的病毒載量與自然感染的成年AGMs相似或更低。低病毒載量可能歸因於病毒的免疫複合物或病毒感染細胞的免疫抑製。這與另一項研究的觀察結果相配合，該研究顯示新生兒的病毒載量低於成年AGMs[39]的病毒載量。與感染HIV-1的人類相比，成人和新生兒agm均表現出持續感染，且病毒血症較低[40,41]。這一結果支持了我們的研究結果，即新生兒AGMs在感染初期具有較低的病毒載量並持續感染，表明SIVagm在新生兒AGMs中與成人相似。我們推斷，SIVagm病毒在人體內的控製程度並不高於HIV病毒或獼猴體內的SIVmac病毒。

對“自然宿主”非人類靈長類動物，如短齒猴和山魈(Mandrillus sphinx, MND)中SIV感染的研究表明，這些動物也會發展成高病毒載量的慢性感染[42,43]。然而，與致病性HIV/SIV感染形成鮮明對比的是，天然SIV宿主保持健康的CD4+ T細胞水平，並避免免疫缺陷[44,45]。這種特別良性的感染過程被認為反映了一種非致病性的病毒-宿主平衡，這種平衡是在長期的共同進化中建立起來的。然而，尚不清楚這是由於病毒的變化，還是由於宿主反應的變化，還是由於兩者的變化。可以解釋天然SIV宿主的非致病性感染的一個病毒特征是，病毒已經進化出一種細胞內複製模式，對受感染的細胞沒有細胞病變。然而，最近的研究表明在活的有機體內在這些自然宿主中感染細胞的壽命與在致病性感染[46]中觀察到的壽命相當。在致病性感染和非致病性感染[47]之間還觀察到一些重要的差異:自然宿主在慢性感染[48]期間顯示較低的免疫細胞激活水平，CD4+ T細胞[49]上的CCR5表達較低。

在我們的研究中，我們確定病毒有活躍的複製，這與在sivmac感染的獼猴和自然SIV感染的成年agm中記錄的情況類似。此外，我們還發現了淋巴樣結構的破壞，這與成年agm不同。因此，成年AGMs中SIVagm無親和力的原因似乎不是由於淋巴結中的低病毒負擔或由於完整的淋巴樣結構。因此，感染或隨後的淋巴結破壞都不是艾滋病毒感染者或sivmac猴免疫缺陷的唯一原因。

在感染的早期有檢測到的抗siv IgG抗體應答水平，並在整個研究過程中持續存在。因此，新生兒AGMs血清轉化為SIVagm感染，持續的抗體反應證明了這一點。這表明SIVagm對naïve新生兒AGMs具有免疫原性，與成年SIVagm感染的AGMs[50]類似。新生兒AGMs在接種SIVagm後也能產生對破傷風抗原的抗體。這一發現表明SIVagm感染不會導致免疫抑製，也沒有改變免疫係統以正常方式對SIV或破傷風抗原做出反應的能力。決定免疫能力成熟的與年齡相關的宿主因子似乎在疾病進展率中沒有發揮作用。我們能夠從pbmc、血漿和其他組織中分離出病毒，這表明新生的AGMs確實產生了有效的免疫反應，可以消除活性和潛伏的病毒感染。鼻竇淋巴結內可見多核巨細胞，反應性改變影響t淋巴細胞依賴區並侵入生發中心。這些觀察結果與長期感染SIVagm的成年agm、siv感染的獼猴和感染HIV-1的人類[24]的觀察結果形成對比。我們的研究結果表明，淋巴樣結構及其功能的破壞並不一定是由於觀察到的大規模病毒感染。 Further studies on the lymph nodes of SIVagm-inoculated newborn AGMs need to be explored and thoroughly investigated. In addition, experimentally infected neonatal AGMs should be observed over a long period so as to monitor not only lymphoid changes but also other immunologic parameters. The uninfected controls had no noticeable alteration of the lymphoid architecture and germinal centres and para follicular zones were clearly defined. Therefore, an intact lymphoid architecture does not seem to be the reason for SIVagm apathogenicity in adult AGM, since naïve newborn AGMs inoculated with SIVagm remained healthy despite massive lymphoid destruction. SIV inoculated newborn AGMs gained weight throughout the study period despite persistent infection and slight lymphadenopathy. This is consistent with long-term SIVagm infection of adult AGMs [51,52]. On the contrary, involuntary weight loss has been recognized as a major factor contributing to morbidity and mortality of patients presenting with HIV infection. Rhesus macaques infected with SIVmac lose up to 80% of their body weight for which no known cause has been implicated [40]. Whether this is the reason for SIVagm apathogenicity and hence its lack of morbidity and mortality in SIVagm infected AGMs, remains to be determined.

結論

將自然感染siv的非洲綠猴骨髓輸注給naïve例新生agm可誘導持續性感染，並引起抗siv特異性IgG抗體反應，伴有淋巴組織病理和體重減輕。此外，感染不會引起新生兒免疫係統的免疫抑製。然而，這還不能令人信服地解釋新生兒agm和成年agm一樣對疾病具有明顯的抵抗力。似乎很明顯，出生後不久缺乏完全發育的免疫係統通常被認為是其他物種更高的疾病易感性的可能原因，但這並不影響AGMs對SIVagm誘導的疾病的自然抵抗力。因此，需要進一步研究SIVagm與天然宿主AGM的相互作用。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Kiio MN, Bosire VN, Odoyo D, Munene E, Kamau J，等(2016)新生非洲綠猴的發病機製和免疫應答(的大白aethiops)接種猴免疫缺陷病毒(SIVagm)。J新興病毒2(2):doi http://dx.doi.org/10.16966/2473-1846.116

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出版的曆史:

  • 收到日期:2016年3月03日

  • 接受日期:2016年3月09日

  • 發表日期:2016年3月15日