摘要

背景:雖然近年來隨著免疫抑製的進展，腎移植的預後有所改善，但免疫抑製劑的各種不良反應和慢性排斥反應仍有待解決。為了克服這些問題，誘導容忍將是最有希望和值得期待的。

方法:在抗cd80 /86單克隆抗體的存在下，將受體和輻照的供體淋巴細胞共培養誘導的供體特異性調節性T (Treg)樣細胞輸注給藥，進行了一項誘導耐受的臨床試驗。培養的細胞在12POD上靜脈注入受體。評估供體和第三方淋巴細胞混合淋巴細胞反應(MLR)、循環淋巴細胞亞群和移植物功能。

結果:培養的細胞表型為CD4+CD25+CTLA-4+FoxP3+，細胞與供體淋巴細胞呈劑量依賴性抑製MLR，而與供體淋巴細胞無抑製作用^{理查德·道金斯}淋巴細胞。這些體外-誘導的供者特異性treg樣細胞抑製受體對供者抗原的免疫反應，從而使免疫抑製劑減少到標準劑量的近一半，但不能使完全退出。

結論:體外-誘導的treg樣細胞在MLR中表現出供者特異性的低反應性，且呈劑量依賴性，在臨床腎移植中誘導受體對供者抗原的低反應性，但未實現免疫耐受。

關鍵字

寬容;調節性T細胞;CD80/86;FoxP3;腎移植

簡介

誘導免疫耐受是器官移植的最終目的。今天，器官移植的結果已經顯著改善了許多領域的最新進展，特別是在發展的強效和選擇性免疫抑製劑。然而，免疫抑製劑的許多副作用，如各種機會性感染有時可能是致命的，腎毒性可導致腎功能衰竭，惡性腫瘤和移植後淋巴增生性疾病可導致致命的結果，不僅影響移植物的存活率，而且影響生活質量。此外，高血壓、血脂異常、糖耐量降低、白內障、青光眼、骨質疏鬆和無菌性壞死等對移植患者的生活質量有不利影響。影響移植物長期存活的最大問題之一是慢性排斥反應，即使使用現代有效的選擇性免疫抑製劑也不能成功治療。

為了克服上述免疫抑製劑的不良反應和慢性排斥反應等問題，大量誘導免疫耐受的基礎實驗和臨床試驗被報道[1-12]。這些試驗分為兩類，一是通過骨髓移植或造血幹細胞輸注誘導嵌合，二是使用阿侖珠單抗和T細胞耗盡抗體或免疫抑製劑消除供者反應克隆的外周缺失。在骨髓移植中，毛細血管滲漏綜合征(植片綜合征)和移植物抗宿主病(移植物抗宿主病，GVHD)仍有待解決[5,6]，而在造血幹細胞中，雖然引入了嵌合[8]，但尚未觀察到GVHD。

為了以低創的方法誘導免疫耐受，我們嚐試通過在antid80 /86單克隆抗體存在下的供體和受體淋巴細胞共培養誘導供體特異性調節性T (Treg)樣細胞。我們報道了通過注射成功誘導免疫耐受的實驗體外在恒河猴腎移植中的-誘導的供者特異性treg樣細胞[13]。我們進行了一項旨在腎移植中誘導耐受的臨床試驗，該試驗基於修訂的臨床試驗新方案，即供體淋巴細胞兩次刺激供體特異性treg樣細胞(圖1)。

圖1:腎移植耐藥誘導臨床試驗規程。CPA:環磷酰胺，Lymph:淋巴細胞，CsA:環孢黴素，MMF:黴酚酸酯，MP:甲潑尼龍。

本研究的目的是探討，(1)是否可以用同樣的方法在體外誘導treg樣細胞，(2)是否可以在臨床腎移植中使用體外誘導的供體特異性treg樣細胞誘導耐受?

材料和方法

這項基於圖1所示方案的耐受性誘導臨床試驗得到了機構審查委員會(東京女子醫科大學倫理委員會)的批準。本研究納入9例接受透析治療的患者，均在知情同意的情況下自願申請接受該方案的腎移植。所有腎髒捐獻者都自願申請為臨床試驗捐獻腎髒。年齡、性別、原發病、透析時間、與供體的關係、HLA-A、-B和-DR抗原不匹配的數量見表1。

沒有	年齡	性別	y / m / d	原始的疾病	高清持續時間	捐贈	血型	HLA毫米
1	46	F	2009/2/5	Mt基因障礙	2 y3m	配偶	O B→	6
2	53	米	2009/4/9	CGN	1 y2m	妹妹	O→AB	1
3.	41	F	2009/5/21	IgA N	2 y7m	媽媽。	AB→AB	2
4	26	米	2009/6/18	IgA N	2 y5m	媽媽。	一個→	3.
5	36	米	2009/7/9	CGN	7 y10m	媽媽。	B→AB	3.
6	47	F	2009/8/13	IgA N	11米	妹妹	O→O	3.
7	53	米	2009/9/3	IgA N	17 y4m	配偶	一個→	3.
8	34	米	2009/10/1	CGN	7 y8m	父親	B→B	2
9	35	米	20010/2/4	未知的	9米	媽媽。	O→O	1

表1:納入臨床試驗的患者的人口統計學。

供體和受體淋巴細胞的收集和共培養

移植前兩天，供體和受體均使用Haemonetics CCS (Haemonetics Japan, Tokyo, Japan)和COBE Spectra (Terumo BCT Inc.， Tokyo, Japan，)和2 × 10進行3小時連續密度梯度淋巴細胞提取⁹每體外周血單個核細胞(PBMCs) 1 ~ 2 × 10⁸每公斤分別從捐獻者和接受者身上收集的pbmc。受體淋巴細胞(0.5 ~ 0.8 × 10¹⁰)與0.2 × 10共培養¹⁰在12 mg抗人CD80 (2D10;eBioscience Inc.，聖地亞哥，CA)和12毫克抗人CD86單克隆抗體(IT2.2;eBioscience Inc.)裝在87-301A-100N培養袋(Nipro Inc.，大阪，日本)中，內含1000毫升ALyS505N培養基(細胞科學與技術研究所，仙台，日本)，添加14毫升受者熱滅活血漿，37℃，5%的濕化CO₂的氣氛。共培養7天(5 POD)後，收集活細胞，計數，再以0.2 × 10共培養¹⁰在同樣的條件下，在37℃的5%濕潤CO中，用抗cd80 /86單克隆抗體(每個8 mg)第二次淋巴細胞分離獲得30個經gy輻照的供體淋巴細胞₂的氣氛。

共共培養14天後，收集活細胞，洗滌和離心多次，檢測細菌汙染和內毒素(內毒素單一測試Wako, Wako純化學工業有限公司，大阪，日本)，並懸浮在100毫升生理鹽水中靜脈給受體。所有這些程序都是在東京女子醫科大學的細胞處理中心完成的。用流式細胞術和混合淋巴細胞反應(MLR)對培養細胞的淋巴細胞亞群進行研究^{理查德·道金斯}聚會，派對

腎移植與培養細胞接種

腹腔鏡下供者腎切除和髂窩腎移植，同時腹腔鏡脾切除受者。免疫抑製劑方案包括8 mg/kg/天環孢素(CsA)、2000 mg/體/天黴酚酸酯(MMF)和5 ~ 10 mg/kg/天甲基強的鬆龍(MP)。避免使用巴西利昔單抗而不消耗CD25+ T細胞。CsA和MMF的劑量逐漸降低，前3個月分別在150 ~ 250 ng/ml和1.0 ~ 4.0µg/ml左右調節。MP的劑量在第7天迅速減少到20 mg/天，在第14天進一步減少到8 mg/天。

第5 ~ 7天靜脈給予環磷酰胺(CPA) 25 ~ 30 mg/kg/d，以消耗循環白細胞。循環白細胞計數減少到1500 /mm左右^3.在14 ~ 21天內恢複到原來的值。在12 POD上，0.8 ~ 1.5 × 10⁹將培養的細胞靜脈注射給受體(表2)。3例患者的培養細胞(0.075 ~ 0.8 × 10⁹)在12 POD(導致培養期延長)後，分別因術前持續不臥床腹膜透析(CAPD)導致腹水、術後急性小管壞死(ATN)導致排尿延遲、脾切除術後胰液滲漏而給予19、33和21 POD。後2例給予的培養細胞數量不足，為0.075 × 10⁹第33天，0.3 × 10⁹當培養時間延長到14天以上時，獲得的活菌培養細胞數量趨於減少(表2)。

沒有	注冊會計師	圓莢體	細胞的數量	圓莢體
1	30毫克/ kgx3	5、6、7	1.5×109	12
2	30毫克/ kgx3	5、6、7	1.2×109	12
3.	25毫克/ kgx3	5、6、7	0.8×109	12
4	25毫克/ kgx3	11、12、13所示	0.8×109	19
5	25毫克/ kgx3	5、6、7	1.2×109	12
6	25毫克/ kgx3	5、6、7	1.2×109	12
7	25毫克/ kgx2	26日,27日	0.075×109	33
8	25毫克/ kgx3	5、6、7	0.9×109	12
9	25毫克/ kgx2	14、15	0.3×109	21

表2:環磷酰胺的劑量和注入細胞(treg樣細胞)的數量。

隨後MP逐漸減少，CsA和MMF的劑量根據供體淋巴細胞和3^{理查德·道金斯}特別是MLR與捐贈者的比例為3^{理查德·道金斯}淋巴細胞。當CsA和MMF的劑量分別減少到25 mg/天和250 mg/天時，首先停止MMF，然後進一步減少CsA。

混合淋巴細胞反應

從供者和受者獲得外周血，在separation - l(武藤純化學株式會社，東京，日本)上離心製備pbmc。其後2 × 10⁵來自受體的淋巴細胞與同樣數量的30個經gyir輻照的供體淋巴細胞在96孔圓底板中共同培養(目錄3799;康寧公司，紐約，紐約州)。細胞培養6天，然後用10 μ Ci的[3H]胸腺嘧啶脈衝18小時。在1450 MicroBeta計數器(Perkin Elmer Japan Co.， Ltd, Yokohama, Japan)上測量合並的放射性。

流式細胞術

用於流式細胞術的抗體為CD3 PerCP (BD Biosciences, San Jose, CA)， CD4 PerCP (BD Biosciences)， CTLA-4-FITC (BECKMAN COULTER, Fullerton, CA)， CD4-APC (BECKMAN COULTER)， CD8- APC (BECKMAN COULTER)， CD25 PE (BD Biosciences)， CD25 APC (BD Biosciences)， CD45RA PE (2H4-RD1;BECKMAN COULTER)， CD45RO PE(人CD45RO R-PE共軛物;invitrogen, Camarillo, CA)， CD95 FITC (Human CD95 FITC Conjugate;CD152- PE (BECKMAN COULTER)， FoxP3 FITC (Anti-Human FoxP3 FITC;eBioscience，聖地亞哥，CA)， FoxP3 PE(抗人類FoxP3 FITC;e生物科學)，粒酶B PE (Human GranzymeB R-PE Conjugate;FITC (FITC小鼠抗人穿孔素;BD Biosciences)， IFN-γ FITC (Anti-Human IFN-γ FITC;BD Biosciences)和IFN-γ/IL-4 (Fastimmune IFN-γ/IL-4;BD生物科學)。

培養細胞取樣(1 × 10⁵)分別用1 μ g指示單克隆抗體在PBS中4℃孵育30分鍾，洗滌兩次，使用Cellquest軟件3.3版(BD)進行FAC掃描分析。細胞用2%甲醛固定後，用BD Biosciences FoxP3染色緩衝集(eBioscience, San Diego, USA)滲透細胞膜，細胞漿內染色CD152 PE和FoxP3 FITC或PE檢測CTLA-4和FoxP3的表達。

受者的外周血樣本用同樣的方法處理並進行流式細胞術檢測。

腎移植活檢標本的免疫組化染色

活檢標本固定在10%緩衝福爾馬林和石蠟包埋。組織學檢查行H&E和PAS染色。在Ventana BenchMark GX自動染色係統(Roche Diagnostics Japan Ventana, Tokyo, Japan)上使用iView DAB檢測試劑盒(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana, Tokyo, Japan)對抗cd4、-CD8、-CD20、-CD25、-FoxP3和-granzyme B抗體進行免疫組化染色，以調查移植腎浸潤細胞的特征。

簡單地說，組織切片在75℃用EZ Prep (Roche tissue Diagnostics Japan Ventana)脫蠟，在細胞調理1 (CC1;使用“標準細胞調理”在100℃下提取抗原，然後與抗cd4和-CD8兔單克隆抗體(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)、抗cd20一抗(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)、抗cd25小鼠單克隆抗體(NICHIREI Bioscience Inc.， Tokyo, Japan)、抗人Foxp3抗體(BioLegend Japan, Tokyo，日本)和抗顆粒酶B多克隆抗體(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)作為一抗，在內源性過氧化物酶用過氧化氫滅活4分鍾後，分別在37℃下作用32分鍾。然後用內源性生物素阻斷試劑盒(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)阻斷，與生物素化Ig二抗孵育8分鍾，與鏈親和素- hrp偶聯物孵育8分鍾，在37℃下孵育8分鍾。用銅增強DAB反應觀察免疫定位的CD4、CD8、CD20、CD25、FoxP3和顆粒酶B。切片用蘇木精II (Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)複染4分鍾，用藍染試劑(Roche Tissue Diagnostics Japan Ventana)複染4分鍾，用自動複染器(Tissue- tek Film automated coverslipper;Sakura Finetek Japan，東京，日本)。

結果

在抗cd80 /86單克隆抗體存在下，受體和輻照供體淋巴細胞共培養得到的活細胞數為0.8 ~ 1.5 × 10¹⁰當培養周期在14天內時，存活細胞數量隨著培養時間的延長而減少(表2)。培養細胞表達CD4、CD25、CTLA-4和FoxP3(圖2)。培養細胞中CD4+CD25+CTLA-4+FoxP3+細胞的平均發生率為13.03±6.89%。培養細胞與供體淋巴細胞呈劑量依賴性降低MLR，而與供體淋巴細胞與3^{理查德·道金斯}組淋巴細胞(圖3)。

圖2:培養的活細胞表型，表達CD4, CD25, CTLA-4和Foxp3的treg樣細胞。

圖3:在培養細胞存在的情況下，供體和第三方淋巴細胞的混合淋巴細胞反應(MLR)以劑量依賴的方式降低供體淋巴細胞的MLR，而3^{理查德·道金斯}淋巴細胞。

培養細胞(0.8 ~ 1.5×10⁹)在連續靜脈注射20 ~ 30 mg/kg CPA 2 ~ 3天後，於12次POD給藥。3例患者分別於19、33和21 POD (0.8×10⁹, 0.075×10⁹, 0.3×10⁹)，因為術後並發症的發生，如4號患者的術前CAPD, 7號患者的術後ATN導致排尿延遲，9號患者的脾切除術後胰瘺(表2)。

所有患者對CPA耐受良好，但觀察到CPA給藥後白細胞減少和脫發。在所有患者靜脈灌注培養細胞時，未觀察到任何歸因於靜脈灌注培養細胞的不良反應，如發熱、低血壓和皮疹。

輸注treg樣細胞後受體循環淋巴細胞表型如圖4所示。循環淋巴細胞中CD4+CD25+CTLA4+FoxP3+細胞的數量隨時間增加而增加，在注入培養細胞4周左右達到峰值。

圖4:輸注treg樣細胞後受體循環淋巴細胞的表型。

MLR與供體之比為3^{理查德·道金斯}8例患者的側淋巴細胞在靜脈輸注培養細胞後隨時間的推移而下降到0.006 ~ 0.22，而在移植後1 ~ 12個月期間，其餘1例患者(病例No.9，表3)未下降到1.0或以下。在3例患者(患者1、4、7)中，MLR與供體的比值為3^{理查德·道金斯}組淋巴細胞增加到0.49 ~ 0.720(表3)。

沒有	HLA	高鈣D / 3理查德·道金斯P比值		antiHLAAb	免疫抑製劑			拒絕			治療
	毫米	最小值	最新的		CsA	MMF	國會議員	班夫	T特點	圓莢體
1	6	0.22	0.490	二類	25	250	0	IIB	混合類型	302	議員脈衝
2	1	0.07	0.090	二類	25	250	0	邊緣			沒有一個
3.	2	0.02	0.060	-	25	0	0	IA	細胞	330	議員脈衝
4	3.	0．1	0.600	-	125	500	2	IA	細胞	220	議員脈衝
5	3.	0.006	0.040	二類*	20.	125	0	IIB	混合類型	378	議員脈衝+ OKT3
6	3.	0.08	0.110	-	35	250	0	IA	細胞	335	議員minipulse
7	3.	0.03	0.720	-	75	500	4	邊緣			沒有一個
8	2	0.06	0.100	-	10	0	0	IA	細胞	307	議員脈衝
9	1	1.040	1.04	課上我	175	750	4	邊緣			沒有一個

表3:HLA失配抗原的數量，MLR與供體的比值為3^{理查德·道金斯}患者淋巴細胞、抗hla抗體、免疫抑製劑、Banff分級、排斥類型、排斥時間及治療。
*:供體特異性抗體

表3列出了不匹配抗原的數量、CsA、MMF、MP的劑量、Banff分級、排異反應的類型、時間和治療情況，以及MLR與供體的比值^{理查德·道金斯}淋巴細胞。9例患者中有6例出現了220 ~ 378 POD之間的排斥反應，4例(患者3、4、6、8)出現細胞性排斥反應(IA)， 2例(患者1、5)出現混合型排斥反應(IIB)。

圖5顯示了2號患者的術後過程，停用類固醇後，CsA和MMF的劑量分別減少到25 mg/day和250 mg/day。在病例3中，停用類固醇和MMF後，將CsA劑量減少到25 mg/天，330 POD發生細胞排斥反應。治療恢複後，我們再次開始低劑量CsA和MMF治療(圖6)。圖7為8號患者術後病程。停用類固醇和MMF後，減少CsA劑量至10 mg/天，307 POD發生細胞排斥反應。治療緩解後，我們再次開始低劑量三聯療法。另外2例患者(患者1和5)在停用類固醇後減少CsA和MMF的劑量時，分別在302 POD和378POD發生排斥反應。所有的排斥反應均在使用或不使用mumonab CD3的類固醇脈衝治療後緩解，並開始低劑量三聯治療。

圖5:2號患者臨床病程(53歲，男性，1例與供體hla抗原不匹配)。MLR與供體的最小比值為3^{理查德·道金斯}黨是0.07。免疫抑製劑被減少並維持在25mg /天的CsA和250mg /天的MMF，沒有任何排斥反應發生。

將研究組在術後時間內的CsA和MMF的平均日劑量與對照組進行比較(圖8)。對照組包括在移植時給予巴利昔單抗的同期進行的活體相關abo相容腎移植。研究組移植後12個月CsA和MMF平均日劑量分別為研究組的40.3%和45.6%，18個月時CsA和MMF平均日劑量分別為研究組的51.2%和51.0%。

圖6:3號患者(41歲，女性，2例供體hla抗原不匹配)的臨床過程。MLR與供體的最小比值為3^{理查德·道金斯}黨是0.02。當停用MP和MMF後將CsA減少到25 mg/d時，330 POD發生細胞排斥反應(IA)，通過類固醇脈衝療法解決，並維持低劑量CsA和MMF。

圖9顯示了腎移植活檢標本(病例2,100 POD)的免疫組化結果，顯示CD4+、CD25+和FoxP3+細胞浸潤。盡管有CD8+細胞浸潤，但未觀察到顆粒酶+細胞。

圖7:8號患者臨床病程(34歲，男性，2例供體hla抗原不匹配)。MLR與供體的最小比值為3^{理查德·道金斯}黨是0.06。當停用MP和MMF後將CsA減少到10 mg/天時，307 POD發生細胞排斥反應(IA)，通過類固醇脈衝療法解決，並以小劑量三聯方案維持。

討論

已知在沒有共刺激信號的情況下抗原識別會導致T細胞無能量。抗CD80/86抗體抑製CD28信號，促進CD80/86的CTLA-4連接，從而表達treg特異性轉錄因子叉頭盒P3 (FoxP3)， FoxP3通過與AML-1/Runx1(亮氨酸拉鏈域)、組蛋白去乙酰化酶(氨基末端阻阻劑域)和NF-AT(叉頭域)相互作用抑製IL-2的轉錄[14,15]。

我們報道了在antid80 /86抗體存在下，受體淋巴細胞與輻照供體淋巴細胞共培養誘導的無能T細胞表達CD4、CD25、CTLA-4和FoxP3，並在MLR中以劑量依賴的方式表現出供體特異性低反應性，命名為體外在恒河猴腎移植中，通過靜脈注射體外誘導的treg樣細胞到受體[13]，成功地實現了耐受誘導。

我們在腎移植中進行了耐受誘導的臨床試驗，以研究(1)同樣的方法是否也能在人體內產生treg樣細胞(2)在臨床腎移植中是否也能誘導耐受體外-誘導的，供體特異性的treg樣細胞?

在抗人CD80/86抗體的存在下，受體淋巴細胞與輻照供體淋巴細胞共培養獲得的活細胞表達CD4、CD25、CTLA-4和FoxP3，並與供體淋巴細胞呈劑量依賴性，MLR與供體淋巴細胞呈劑量依賴性，而與供體淋巴細胞共培養的MLR不降低^{理查德·道金斯}這表明供體特異性treg樣細胞也可以引入人體(圖2,3)。

受體與供體淋巴細胞的MLR與供體淋巴細胞的MLR之比為3^{理查德·道金斯}黨的淋巴細胞被認為是指示treg樣細胞抑製作用的特異性。在進行臨床試驗時，我們考慮到MLR與供體淋巴細胞的比值降低到3^{理查德·道金斯}一方淋巴細胞是受體對供體抗原免疫反應性的關鍵指標，因此可能是減少免疫抑製劑的指標。

在減少免疫抑製劑的過程中，參照MLR與供體的比例為3^{理查德·道金斯}病例3中，在停用類固醇和MMF後，將CsA劑量減少到25 mg/天，在330 POD發生細胞排斥反應(IA)(圖6)，盡管供體MLR與3^{理查德·道金斯}Party被抑製到0.02。同樣在病例8中，停用類固醇和MMF後，將CsA劑量減少到10 mg/天，307 POD發生細胞排斥反應(IA)，盡管供體MLR比3^{理查德·道金斯}此外，在第5例患者中，停用類固醇後，將CsA和MMF分別減少到25 mg/天和250 mg/天後，378 POD發生混合型排斥反應，即使MLR與供體的比值為3^{理查德·道金斯}Party降到0.006。

圖8:研究組在給定時間(術後數月)的CsA (A)和MMF (B)的平均每日劑量與對照組(在誘導時給予巴利昔單抗的同一時期進行的活體相關abo相容腎移植)相比。

圖9:2號患者(100POD)免疫組化示CD4⁺CD25⁺和具體⁺細胞浸潤。盡管CD8的浸潤⁺細胞，顆粒酶+細胞未見。

9例患者中有6例在減少和/或停用類固醇和MMF後，在減少CsA和/或MMF的過程中，220 ~ 378 POD發生排斥反應，即使MLR與供體的比值為3^{理查德·道金斯}組淋巴細胞降至0.006 ~ 0.22。而在病例4中，盡管維持了三聯方案(CsA: 125 mg/天，MMF: 500 mg/天，MPS: 2 mg)，但220 POD發生了細胞排斥反應(IA)(表3)。

從上述事實中產生了幾個需要解決的問題。MLR與供體的比值能達到3嗎^{理查德·道金斯}方淋巴細胞是受體對供體抗原免疫反應性的關鍵指標嗎?它能成為減少免疫抑製劑的指標嗎?輸注供體特異性treg樣細胞能抑製嗎在活的有機體內受體對供體抗原的免疫反應是否足以減少和/或停用人類受試者的免疫抑製劑，與恒河猴相同?[13]可以體外-誘導的，供體特異性的treg樣細胞在體內繼續發揮作用並在受體體內長時間膨脹?

關於爭論點，“在多大程度上可以減少免疫抑製劑的劑量?”將取決於“與3。供體的MLR相比，供體的MLR可以降低到什麼程度”^{理查德·道金斯}聚會嗎?，這個問題在本次研究中無法解決。靜脈注射體外在臨床腎移植中，誘導的供者特異性treg樣細胞可抑製受體對供者抗原的免疫應答性，使免疫抑製劑在一定程度上減少，但不足以完全消除。

據報道，CD4+CD25+Treg細胞的抑製活性通過細胞間直接接觸(感染耐受[16])轉移到CD4+CD25-T細胞上，而人類CD25+Treg細胞與CD25- CD4+T細胞的共培養也被報道導致額外的CD4+T抑製細胞群(CD4+Treg細胞)的發展，從CD4+CD25-T細胞群中產生，抑製新分離的常規CD4+T細胞[17]的增殖。

排斥反應的發生可能與treg樣細胞輸注前遇到供體抗原而產生的記憶細胞有關。最初的免疫抑製，包括CsA、MMF和MP的三聯方案，可能不足以抑製對供體抗原產生記憶T和/或B細胞。我們正在重新考慮一種新的方案，包括在0 POD上給予小劑量的胸腺球蛋白和利妥昔單抗，以抑製T和B記憶細胞的產生，這是基於在之前的方案中添加胸腺球蛋白的初步研究的結果在體外用胸腺球蛋白和含有補充物的人血漿培養Treglike細胞。

結論

在抗cd80 /86單克隆抗體的存在下，供者和受體淋巴細胞共培養體外誘導的treg樣細胞顯示MLR的供者特異性低反應性，且呈劑量依賴性。在臨床腎移植中，向受體輸注treg樣細胞可誘導受體的低反應性，從而使免疫抑製劑減少約50%，但未實現免疫耐受。為了誘導免疫耐受，還需要進一步的研究。

確認

作者感謝Kenji Takai博士(基因和染色體分析中心，SRL Inc.)對流式細胞術的分析。作者感謝Shigeru Horita先生(東京女子醫科大學腎髒中心病理科)對腎移植活檢標本的免疫組化染色。

資金

由厚生勞動省科學研究補助金支持的免疫、過敏和器官移植研究補助金。

作者披露

作者聲明沒有可能影響本研究的利益衝突。

參考文獻

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Teraoka S, Koyama I, Bashuda H, Uchida K, Tonsho M，等。(2017)體外誘導供體特異性treg樣細胞過繼移植在臨床腎移植中誘導耐受的臨床試驗。移植Res J 2(1): doi http://dx.doi.org/10.16966/2473-1730.115

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出版的曆史:

收到日期:2017年10月15日

接受日期:2017年12月11日

發表日期:2017年12月18日