縮寫

HLA:人白細胞抗原;造血ct:造血細胞移植;DSA:供體特異性抗hla抗體;審計局:Single-antigen珠;MFI:平均熒光強度;PRA:反應性抗體

在需要造血細胞移植(HCT)[1]的患者中，使用人類白細胞抗原(HLA)單倍相同的相關供體已變得越來越普遍。最近的研究表明，移植前受體血清中供者特異性抗hla抗體(DSA)的存在與[2]移植不良相關。由於在單倍相同的HCT (haploo -HCT)環境中存在大量未共享的HLA位點，受體攜帶已有DSA的幾率非常高。ci尿素等[3]發現，在單倍相同移植前篩選的122例患者中，18%的患者至少有一個DSA。與之前的研究一樣，盡管54.5%(12/22)的患者使用了脫敏治療方案，dsa的存在仍被發現是移植物衰竭的危險因素。因此，這些抗體的檢測在供體選擇中是至關重要的。此外，DSA檢測的準確性對於脫敏過程中監測這些抗體水平至關重要。目前，dsa還沒有標準的篩選程序。在此，我們提出證據表明，由於補體幹擾現象，未稀釋的單抗原珠(SAB)檢測不足以正確檢測DSAs。

在過去的六年中，我們使用bhammidipati等人描述的移植方案對102例單倍hct患者進行了抗hla抗體篩查。我們使用來自One Lambda的單一抗原試劑盒對這些患者的血清進行dsa篩選。在我們的機構中，基於固相免疫分析和實體器官移植環境中細胞毒性交叉匹配的相關性研究，2000年的平均熒光強度(MFI)被用作臨床相關抗體滴度的陽性截止點。使用美國衛生與公眾服務部提供的在線工具計算麵板反應抗體(PRA)。

59例(59%)患者檢出hla抗體。16例(16%)患者共有37種抗體，根據捐獻者的HLA分型，這些抗體被分類為dsa。患者人口統計數據見表1。大多數患者為女性(88%)，診斷為AML(69%)。所有患者的中位隨訪時間為140天(範圍:6-455)，存活患者的中位隨訪時間為438天(範圍:225-455)。在移植的患者中，中性粒細胞恢複的中位時間為16.5天(範圍:14-78)。PRA得分一致較高(中位數:97.5，範圍:32-100)。

表1:單倍相同造血細胞移植患者供體特異性抗體。顯示prozone效應的抗體以紅色突出顯示。縮寫:診斷(Dx)中性粒細胞移植(NE)，總生存率(OS)，麵板反應抗體(PRA)，平均熒光強度(MFI)。

隨後我們對dsa患者進行了一係列稀釋(1:25和1:50)和C1q測試。我們發現，在一個抗體子集中，由SAB測量的未稀釋(或“純”)MFI不能準確代表抗體強度。在27%(10/35)檢測到的dsa中，整齊的MFI明顯低於血清1:25稀釋時的MFI(圖1A)。在高抗體滴度的環境中，基於抗體的抑製是prozone效應的經典表現。Loiseau和他的同事最近提出了補體介導的prozone效應幹擾HCT環境中dsa檢測的可能性，但據我們所知，這在之前的文獻[6]中沒有報道過。

圖1:A)dsa患者連續稀釋的平均熒光強度(MFI)。無稀釋血清單抗原珠(SAB)檢測的線性相關B)1:25稀釋的血清和C)C1q測試。這些相關性都不顯著。C1q檢測與1:25稀釋血清SAB的相關性D)顯著且強相關(決定係數= 0.692)。

在我們的人群中，我們發現I類和II類抗原抗體之間的prozone效應頻率沒有差異(95% C.I. 0.83- 13.9)。多種dsa的存在與任何特定抗體表現出prozone效應的更高可能性無關(RR: 2.1, 95% C.I. 0.32-14.0)。表現出prozone效應的dsa患者有顯著的PRA評分(Wilcoxon Sum-Rank: p=0.04)。這些患者的PRA評分均不低於90%。通過C1q測試，所有顯示prozone效應的抗體都是補體固定。因此，我們認為在我們的隊列中，補體幹擾是導致這種現象的原因。在腎移植中有報道，這可能是補體激活產物[7]對抗hla IgG抗體和抗IgG二抗的檢測功能受損所致。

圖1B-C顯示，未稀釋的SAB試驗與1:25稀釋(R2<0.001)和C1q試驗(R2=0.019)相關性都很差。另一方麵，C1q與1:25稀釋SAB檢測之間存在高度相關性(R2=0.69)(圖1D)。同樣，1:50稀釋的SAB檢驗與1:25稀釋的SAB檢驗(R2=0.97, p<.001)和C1q檢驗(R2=0.58, p<0.001)高度相關(數據未顯示)。所有這些次級測試都提供了與未稀釋SAB測試相似的補充信息。鑒於DSA檢測的重要性和prozone效應的高流行率，我們認為單靠未稀釋的SAB檢測不足以在haploo - hct中進行移植前篩查。作為這一現象的一個例子，我們想強調的是3號患者的病例，我們發現其HLA B*57:01的DSA，由於prozone效應，最初沒有達到我們報告為陽性的閾值(MFI>2000)。由於其他dsa，患者被納入序列稀釋和C1q檢測組。這個案例表明，僅依靠未稀釋的SAB檢測不僅可能低估抗體強度，而且可能完全錯過相關的dsa。

基於這裏提出的證據，我們認為，在單倍hct環境中，未稀釋的SAB檢測不足以表征臨床相關的dsa。此外，我們的隊列抗體顯示prozone效應都是補體固定。這種補體介導的丙酮效應可以簡單地通過EDTA常規處理來固定，而無需顯著增加成本或額外的測試。值得注意的是，我們目前的研究不排除過量抗體引起的傳統非補體介導的prozone效應。在腎移植環境下，Konvalinka和同事[8]對DTT預處理的血清進行了一係列稀釋，消除了補體幹擾，然後在SAB試驗中測試血清。他們發現少數抗體在DTT治療後仍表現出prozone效應，提示其他非補體介導的可能在導致讀數錯誤下降中發揮作用。另一方麵，與非補體結合抗體相比，我們研究中顯示的具有補體介導的prozone效應的抗體可能會帶來更大的移植物失敗風險[3]。

在其他情況下，建議采用幾種不同的方法來消除SAB測試中的prozone效應。Tambour等[9]建議對所有DSA篩查進行至少兩次連續稀釋，以趨勢抗體強度。其他研究探索了使用乙二胺四乙酸(EDTA)、二硫代三糖醇(DDT)或熱失活[10,11]。其中EDTA是最有希望的，但缺乏標準濃度使得文獻難以解釋。目前，在HCT環境中還沒有足夠的證據來評價這些二次檢測方法。

當與未稀釋SAB試驗一起使用時，C1q試驗或單一稀釋試驗的篩查提供了補充信息，我們建議對所有接受單倍hct的致敏患者采用這種方法，特別是PRA評分≥90%的患者。還需要進一步研究在這種情況下個別方法的相對功效和成本效益。

的利益衝突

所有作者都沒有披露與提交的稿件中描述的研究相關的財務信息。作者聲明沒有利益衝突。

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文章類型:簡短的溝通

引用:鄒傑，Slade M, Romee R, Phelan D, Willey P，等。(2016)Prozone現象使單倍體同種造血細胞移植患者供體特異性抗體檢測複雜化。移植Res J 1(2): doi http://dx.doi。org/10.16966/2473 - 1730.108

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出版的曆史:

收到日期:2016年10月06

接受日期:2016年10月22日

發表日期:2016年10月28日