摘要

本研究首次將實時激光共聚焦顯微鏡應用於各種甲狀腺疾病的術中研究。研究對象為34名年齡在24歲到55歲之間的患者。其中20例(58.8%)為非毒性結節性甲狀腺腫，8例(23.5%)為甲狀腺腺瘤，6例(17.6%)為甲狀腺癌。

關鍵字

甲狀腺;實時共聚焦激光顯微術

簡介

目前，甲狀腺疾病(TD)的形態學診斷包括幾個階段:術前細針穿刺活檢(TAB)，術中緊急細胞學和冰凍切片檢查，術後計劃組織檢查。術前TAB的結果和手術分析中緊急調查的結果[1-3]對確定治療策略和手術幹預量的意義最大。然而，根據一些研究，從緊急調查中獲得的信息是有爭議的，不能對甲狀腺良惡性腫瘤進行可靠的鑒別診斷[4,5]。因此，探索改進各種甲狀腺疾病患者術中檢查的新方法是很有意義的。目前，由Minsky M等人[6]發明的實時共聚焦激光顯微鏡(Confocal Laser Microscopy, CLM)已經用於胃腸道、支氣管肺係統和皮膚病的診斷[7,8]。該技術允許您在組織檢查的CLM過程中直接做出準確的形態學診斷，這決定了與其他成像診斷技術相比的優勢，並對臨床應用具有毋庸置疑的興趣。使用這種方法研究甲狀腺腫瘤的經驗此前沒有記錄。

研究的目的

確定了CLM的作用在活的有機體內甲狀腺疾病術中診斷的實時組織檢查。

材料與方法

對博特金州立臨床醫院內分泌外科34例患者的研究結果進行分析，得出的數據。

根據分類學類型，患者分布為:多結節性無毒甲狀腺腫(МG)-20例(58.8%)，甲狀腺腺瘤(TA)-8例(23.5%)，乳頭狀癌-6例(17.6%)。觀察患者的平均年齡為48歲。男女的比例是1:6。所有計劃在術中進行半甲狀腺切除術的患者都進行了緊急組織學檢查。在本研究中，采用了基於共聚焦熒光顯微鏡[9]原理的實時CLM技術。

首先，我們明確了甲狀腺結構的形態特征及其在病理過程中的變化。腺實質的主要結構成分是濾泡——封閉的球形結構，內部有一個腔，直徑為20-200微米。濾泡壁厚度可達0.2微米，由單層上皮細胞-濾泡甲狀腺細胞構成。濾泡由薄層鬆散纖維結締組織分隔，大量的血液和淋巴毛細血管纏繞著濾泡，還有肥大細胞和淋巴細胞。在腫瘤過程中，其間質為腫瘤本身提供了不同於正常的結構組織、血管和間質結締組織[10-12]。在腫瘤基質中，已經存在的基底膜血管和新的毛細血管網絡的形成被積極降解。腫瘤中纖維蛋白的合成增加[14,15]，導致大量硬化[16,17]。間質性腫瘤間質結締組織的基礎是間質膠原(主要是I型和III型)、纖維蛋白、纖維連接蛋白、彈性蛋白和層粘連蛋白以及糖胺聚糖[18]。

與良性腫瘤相比，惡性過程中硬化更為明顯，結構紊亂，據此進行良惡性腫瘤的鑒別診斷。

我們嚐試使用活體的它是一束488納米激光產生一束光，並使用鏡像係統傳輸它。在工作站的出口，激光束通過一個多纖維光纖探頭，並擊中被檢查組織的表麵。一部分光被吸收，另一部分引起組織熒光，由共聚焦顯微鏡記錄並由計算機處理，從而在監視器[19]上獲得動態單色圖像。因此，有了CLM，就有可能實現那些具有自發熒光效應的結構的可視化。生物組織的內源性熒光團主要有黃素、蛋白質和卟啉。每個熒光團都有特定的吸收和發射光譜[20,21]。當使用波長為488 nm的單色光時，富含NADH、脂質素、膠原蛋白和彈性蛋白的生物物質會發光[22]。最後一種是囊泡基底膜的一部分和位於結締組織囊內的眾多微循環床的血管。後者的層被送到內部，並把身體分成葉。有了CLM，就有可能對甲狀腺組織的結締組織成分及其大塊形成的圖像進行配準。 Based on this, a study of thyroid tissue was conducted.

CLM過程使用Cellvizio進行^®儀器由莫納克亞技術公司(法國)製造(圖1)。

圖1:Cellvizio^®，莫納克亞科技(法國)。

目前還沒有專門用於甲狀腺研究的探針，因此使用“Demo”和“Gastoflex”拉刀進行研究，其分辨率分別達到50 μ m和20 μ m，有可能從400倍增加到1000倍，與甲狀腺濾泡的大小相當。研究深度0 ~ 60微米，視野240 ~ 600 μm。在進行CLM之前，根據處方調整Cellvizio®並校準拉刀。目前還沒有使用KLM研究甲狀腺的經驗，因此我們的主要任務是開發獲取、描述和分析甲狀腺組織共聚焦顯微圖像的方法。為此，在手術後，標本與病理學家一起檢查。接下來，製作宏觀不變的甲狀腺切片和腫塊形成切片，用Cellvizio共聚焦激光顯微鏡檢查(圖2)。

圖2:患者L, 63歲，甲狀腺葉切除伴乳頭狀癌。

為此，將光學微型拉刀放在切片上，並在研究所需的整個時間(2分鍾±1分鍾)內保持在感興趣的區域。每個區域掃描多次(最少3次)以獲得穩定、清晰的共焦圖像。視頻記錄和帶有文物跡象的圖像沒有被考慮在內，因此被排除在研究之外。然後，在CLM的幫助下，將延遲研究的切片製備微製劑，並由病理形態學家檢查和拍照。

在進行研究的基礎上，確定了甲狀腺組織不變、腺瘤和甲狀腺癌的特征體征。

在研究正常甲狀腺組織時，記錄一張細胞大小相同的網狀圖像，形狀為圓形或多邊形，直徑20-200 μ m，間隔厚度0.2 μ m，與正常卵泡的大小和基底膜的厚度相對應。然而，當同樣記錄結節性膠質甲狀腺腫的網格圖像時，細胞直徑超過200微米，甚至可以超過1000微米(圖3)。

圖3:患者K, 45歲，結節性膠質增生性甲狀腺腫。用實時CLM和常規組織學檢查的標準光學顯微鏡獲得的圖像。

部分區域記錄到細胞直徑為20 ~ 200 μ m(通常為30 ~ 60 μ m)的類似圖像，但分區厚度為10 ~ 30 μ m。同時有不同厚度和長度的纖維化區域(圖4)。

圖4:患者，56歲，微濾泡TA。在常規組織學檢查中，用實時CLM和標準光學顯微鏡獲得圖像。

在沒有觀察到網狀模式的癌症期間，幾乎整個視野被粗大結構較少纖維組織所取代，其中周期性地出現不同大小的不規則形狀斑塊，有時合並，以混亂的方式排列(圖5)。

圖5:患者L, 63歲，甲狀腺乳頭狀癌。用實時CLM和常規組織學檢查用標準光學顯微鏡拍攝的顯微照片。

在腫瘤外，探頭檢查中宏觀未改變的甲狀腺組織通常具有甲狀腺的特征性圖像。

結論

在CLM的幫助下對甲狀腺的術中研究可以實時區分特定定位的占位結構。然而，由於檢測到的變化缺乏特異性，獲得的數據難以解釋，目前談論該技術在臨床應用的可能性還為時尚早。CLM過程中甲狀腺視覺圖像缺乏定性和定量評價的標準，需要在分析特定類別患者大量資料的基礎上進行認真的研究。因此，CLM是一種實時研究組織的現代方法，在進一步完善的情況下，對各種甲狀腺疾病患者的術前和術中檢查以及治療策略的確定具有重要意義。

參考文獻

1. blvshteyn AA, Grekov VV(2012)甲狀腺疾病形態學診斷的複雜性。外科新聞20:18-23。
2. Dolidze DD(2005年):甲狀腺疾病患者的外科治療(具體情況、方法、治療結果的優化)。博士學位。說,莫斯科。
3. Orlinskaya NJ, Sarantsev BV(2011)甲狀腺體疾病的形態學診斷特征。醫學年鑒2:172-174。
4. Ivanova NV, Polyakov VG, Shishkov RV, Pavlovskaya AI, Koshechkina NА，等(2014)濾泡性甲狀腺腫瘤的診斷。《中華腫瘤雜誌》1:11 -15。［Ref。］
5. Mikhailichenko VY, Shtoda DE, Reznichenko AM, Drevetnyak AA, Kislyakov VV等(2017)甲狀腺良惡性腫瘤鑒別診斷的比較評價(回顧性研究)。現代科學與教育問題［Ref。］
6. 明斯基M(1961)顯微鏡儀器。美國專利3013467。［Ref。］
7. Meining A(2009)共聚焦內窺鏡。北美胃腸內窺鏡診所19:629-635。［Ref。］
8. Neumann H, Kiesslich R, Wallace MB, Neurath MF(2010)共聚焦激光內鏡:技術進展和臨床應用。消化病學139:388-392。
9. Cameron AJ(1997)柱狀線型食管腺癌的流行病學研究。美國北部胃腸科診所26:487-494。［Ref。］
10. 王曉燕，王曉燕(1991)腫瘤相關血管生成的初步研究。實驗室投資65:334-346。［Ref。］
11. Folkman J(1995)癌症、血管疾病、類風濕和其他疾病中的血管生成。Nat Med 1: 27-31。［Ref。］
12. Danø K, Andreasen PA, Grøndahl-Hansen J, Kristensen P, Nielsen LS，等(1985)纖溶酶原激活物、組織降解和癌症。Adv Cancer Res 44: 139-266。［Ref。］
13. Dvorak HF, Harvey VS, McDonagh J(1984) 1號線和10號線豚鼠癌中纖維蛋白原流入和纖維蛋白沉積和翻轉的定量。巨蟹座Res 44: 3348-3354。［Ref。］
14. Rosai J, Carcangui ML, DeLellis RA(1992)腫瘤病理圖譜:甲狀腺腫瘤。美國華盛頓武裝部隊病理學研究所。［Ref。］
15. Baloch Z, LiVolsi VA(2002)甲狀腺在內分泌病理學中的病理。紐約隊:丘吉爾·利文斯頓61:88。
16. 王曉燕，張曉燕，王曉燕，等(1985)甲狀腺乳頭狀癌的臨床診斷。意大利佛羅倫薩大學治療的241例臨床病理研究。巨蟹座55:805-828。［Ref。］
17. Dvorak HF, Nagy JA, Dvorak JT, Dvorak AM(1988)實體腫瘤血管向循環大分子滲漏的鑒定和表征。中華醫學雜誌病刊33:95-109。［Ref。］
18. Barsky SH, Rao CN, Grotendorst GR, Liotta LA(1982)人乳腺癌粘連形成中V型膠原蛋白含量增加。中華寄生蟲病雜誌108:276-283。［Ref。］
19. Thiberville L, Salaün M, Lachkar S, Dominique S, moreno - scrc S, et al.(2009)人類在活的有機體內支氣管鏡檢查時肺泡導管和肺泡囊的熒光顯微成像。歐洲呼吸係統雜誌33:974-985。［Ref。］
20. Gabrecht T, Andrejevic-Blant S, Wagnieres G(2007)福爾馬林固定後正常和癌變支氣管組織的藍-紫自發熒光光譜和成像。光化學學報83:450-458。［Ref。］
21. Zellweger M, Georges W(2000)外源、外源誘導和內源熒光團的熒光光譜用於癌症的光檢測和光動力治療。EPFL洛桑。［Ref。］
22. 孫德森伯格，布蘭廷M，格丁B，魯賓K(1997)腫瘤細胞與人結直腸腺癌。血小板衍生生長因子- ab /BB轉移到基質細胞。中華醫學雜誌病刊151:479-492。［Ref。］

在此下載臨時PDF

條信息

文章類型:研究文章

引用:Dolidze DD, Mel 'nik KV, Gazzaev DV(2019)實時共聚焦激光顯微鏡診斷甲狀腺疾病(第一次經驗)。J外科開放訪問5(6):dx.doi.org/10.16966/2470-0991.194

版權:©2019 Dolidze DD，等。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2019年9月17日

接受日期:2019年10月10日

發表日期:2019年10月18日