摘要

阿司匹林，乙酰水楊酸或2-乙酰氧基苯甲酸，具有羧酸官能團，因此更容易用像NaOH這樣的強堿定量。在大多數片劑形式的止痛藥物配方中，阿司匹林一般與其他酸性賦形劑或取代基結合或複配，這些賦形劑或取代基具有酸性基團，容易與NaOH發生反應，因此氫氧化鈉不是多組分阿司匹林片劑配方中定量測定阿司匹林的合適試劑。六種不同的藥片從著名的藥品生產公司含有阿司匹林作為活性物質服用。在定量中使用氫氧化鈉作為主要試劑的方法涉及大量的化學計量數學操作，如滴定法，而UV-VIS光譜通過多元校準給出的值在美國和BP藥典的下限或標簽聲明的下限之外，而聯用色譜技術，如GCMS和HPLC在藥典限值內給出了非常好的分辨率和非常精確的結果。

關鍵字

藥典的限製;氣相;高效液相色譜法;UV - VIS光譜學;滴定分析;阿斯匹林;賦形劑

簡介

藥物配方的藥理活性取決於藥物分子的化學特性，因此化學性質和定量成分的任何微小變化都可能導致治療效果的巨大變化。阿司匹林是一種抗炎藥物，具有外周和中樞神經係統鎮痛作用，通過不可逆抑製血小板環氧合酶抑製血小板聚集，抑製血栓合酶A2的產生，緩解頭痛、神經痛、風濕，是一種強大的血小板聚集和血管收縮誘導劑。

阿司匹林過量有可能導致嚴重的後果，導致嚴重的發病率和死亡(圖1)。輕度中毒的患者經常有惡心和嘔吐、腹痛、嗜睡、耳鳴和頭暈。更嚴重的中毒會出現更明顯的體征和症狀，包括體溫升高、呼吸急促、呼吸性堿中毒、代謝性酸中毒、低血鉀、低血糖、精神錯亂、癲癇、腦水腫、幻覺和昏迷。過量服用阿司匹林後最常見的死亡原因是心肺驟停，通常由肺水腫引起[1]。因此，一種正確的測定和定量技術來確定多組分藥物劑量中阿司匹林的含量及其穩定性確實是必要的、至關重要的和值得讚賞的，以避免過量。

圖1:阿司匹林的結構:(物理狀態:白色結晶粉末;Nature-Weakly酸性;分子formula-C₉H₈O₄；分子質量- 180.157 g/mol;熔點- 135°C;沸點- 140°C)。

如所述[2-7]，已經提出了幾種方法來測定商業片劑中作為單獨劑量或聯合劑量的阿司匹林含量。本文還報道了一種基於液相色譜技術的多組分藥物中阿司匹林的分析方法。基於聯用色譜技術[9,10]和通過多參數傳感器的紫外分光光度流也開發了更快速和具體的方法。使用HPTLC法測定聯合劑型中的阿司匹林和硫酸氯吡格雷的穩定性研究[12]，但沒有考慮到酸性輔料對最終測定的影響

在大多數製藥和化學實驗室中，滴定法或濕法分析經典技術和紫外分光光度分析常被首選用於阿司匹林的質量控製檢測，因為它們可獲得性廣泛、操作方便、成本效益高。大多數藥物分析技術主要針對活性成分，而不太關注藥物成分對藥物代謝活性和活性物質穩定性的其他作用。本研究比較了用於分析和定量各種藥物止痛製劑中的阿司匹林的技術，並得出結論，可以依賴的最佳方法，在公認的藥典限製內提供良好的分辨率和最佳結果。

材料和方法

用於研究的儀器和試劑

用於滴定分析的玻璃器皿，UV-VIS雙光束島津1800 (tro -0% - 400%)， FT-IR 8101 M島津分光光度計(4600-400厘米)^－1高效液相色譜Knauer[自動進樣器3900 com.，柱LI C18 (ODS)，聲波酸鹽/卡爾科特振動器，UV-VIS檢測器]。HPLC用的試劑分為HPLC級，滴定法用的試劑分為分析級(AR)和紫外-可見雙束儀用的光譜級。

藥物樣品

本研究所使用的六種含有阿司匹林的藥物製劑樣本從市場內的不同藥店中收集，報告如下(表1)。

貿易名稱	內容	製造商	集合的地方
Aspro	阿司匹林250毫克	Pirimal ltd inc .，批號2E, 2019年10月上市	皇家製藥ZNZ
	撲熱息痛20毫克
Hedapen	阿司匹林300毫克	伊利化學。Ind. Ltd . BN.3l57號，ss11/17號	Faud製藥。ZNZ
	對乙酰氨基酚250毫克
	咖啡因30毫克
ascard - 75	阿司匹林75毫克	Atco實驗室。BN。16047年,Exp 04/19	皇家製藥。ZNZ
Micropirin	阿司匹林350毫克	皮拉馬爾印度有限公司Exp 11/19	Winam製藥。柯
	咖啡因20毫克
Disprin	阿司匹林350毫克	利潔時科曼印度有限公司2019年7月報告	Lemuma製藥。柯
	檸檬酸35毫克
	CaCO3.105毫克
Dynasprin	阿司匹林60毫克	American Prod.， India ltd . Exp. 12/18	Lemuma製藥。柯
	雙嘧達莫75毫克

表1:本研究中含有阿司匹林的藥物樣品

純阿司匹林的製備:製備定量測定用純阿司匹林，經純化、幹燥、表征[13]。

用於紫外-可見光譜的純阿司匹林原液的製備50 mg幹透(2小時，105℃，在真空幹燥器中冷卻)的純阿司匹林樣品稱重，轉入100 ml量瓶，加入70 ml 0.1N的NaOH，水浴加熱10分鍾，冷卻至室溫，過濾(Whatmann濾紙41號)，濾液用0.1N進一步稀釋到100 ml，濃度為50 mg/100 ml。

滴定分析用阿司匹林藥物樣品原液的製備:每種藥物各取10片製成粉末，在烤箱中幹燥半小時，從幹燥的樣品中準確稱取50 mg阿司匹林放入100ml的量瓶中，用標準NaOH (0.093N)稀釋，在水浴中加熱10分鍾，冷卻至室溫，過濾，濾液再用0.093N NaOH稀釋至100ml。

高效液相色譜法製備阿司匹林標準原液稱取25毫克純阿司匹林，加入一個25毫升的量瓶中，量瓶中裝有稀釋劑(乙腈和甲酸的高效液相色譜溶劑混合物[99:1]，用稀釋劑按標記量製成原液，濃度為1毫克/毫升。

HPLC樣品溶液的製備:每種藥物分別成粉20片，在105°C下幹燥2小時，在幹燥器中冷卻，將相當於50 mg阿司匹林的量轉移到100 ml的容瓶中，加入稀釋劑，超聲和使用稀釋劑使體積達到標記。

合成的純阿司匹林的定性分析

采用物理常數、氯化鐵試驗、酯化反應和紅外光譜等方法對製備的阿司匹林進行了定性表征。

紅外光譜研究:純藥物作為KBR球團的光譜在4600 cm範圍內^－1- 400厘米^－1如圖2所示^－1-2500厘米^－1代表羧酸- OH str，在1687處的峰為羧酸的特征羰基。1577和1581處的峰為芳香碳雙鍵，約1300cm^－1代表C-O str, 1380 cm^－1代表CH3對稱彎曲，峰值在755 cm處^－1代表。鄰位取代芳香環C-H。海拔1754厘米^－1表示酯的羰基鏈。根據IR數據庫的參考資料進行的峰分配證實了阿司匹林。

圖2:在4600 cm-1 - 400 cm範圍內，純藥物的光譜為KBR微丸^－1

氯化鐵測試:取0.5 g純阿司匹林放入10ml試管中，加入10ml 5N NaOH，煮沸3分鍾，冷卻，加入10ml硫酸，得到白色沉澱，過濾後溶於冷蒸餾水，加入1ml氯化鐵溶液，呈深紫色，證實阿司匹林的存在。

酯化的阿司匹林:取0.5 gm純阿司匹林放入10ml試管中，加入10ml 5N NaOH，煮沸3分鍾，冷卻後，加入10ml硫酸，得到白色沉澱，過濾。，向濾液中加入3毫升酒精和3毫升硫酸，然後加熱。從反應中聞到的乙酸乙酯氣味證實了阿司匹林的存在。

物理參數:一致性試驗:白色結晶粉末，弱酸性，溫度140°C，分子質量C₉H₈O₄exp E^{1% \ 1厘米}海裏在^{1% \ 1厘米}24.35和E^1厘米海裏在^{1% \ 1厘米}47.6.對於這項研究，E^1厘米海裏在^{1% \ 1厘米}24.35，吸光度0.487，因為它接近λ的報告值_馬克斯= 296 nm λ_馬克斯25 = 297.4。

藥物樣品中阿司匹林的鑒別:對藥物樣品進行了氯化鐵試驗和酯化試驗，結果均為陽性，證實每種藥物中都含有阿司匹林。

阿司匹林的定量測定方法

滴定分析:以酚酞為指示劑，用0.055N鹽酸滴定各藥液中多餘的堿。

紫外光譜分析:將0.1 ml, 0.2 ml, 0.9 ml從純阿司匹林原液中移到10ml容積瓶中，用0.1 n NaOH稀釋到標記值。每一溶液的吸光度在λ處標明_馬克斯= 297.4海裏。此過程重複三次，取平均值繪製校準曲線。用移液管將0.4 ml的原液放入10ml的容量瓶中，用0.1N NaOH稀釋至標記值，並在λ處記錄吸光度_馬克斯= 297.4 nm來估計每種的濃度。使用Microsoft excel將測量數據製表，並進行線性回歸分析。

高效液相色譜法測定:從HPLC純阿司匹林溶液中，取不同體積(0 ml, 1 ml, 2 ml, 6 ml)放入不同容量的10ml燒瓶中，用稀釋劑稀釋至10ml，通過0.45 m膜過濾器過濾，然後將每種稀釋劑注入HPLC。流速時間1.9 ml/min，運行時間7 min，注射量20 μ l，檢測器波長297.4 nm (UV-Visible檢測器)。流動相采用HPLC級庚烷磺酸鈉2gms溶於乙腈150 ml和去離子水850 ml的混合物中，用冰醋酸調節pH為3.4。山頂下的區域。每種藥物樣品在相同的條件下使用相同的高效液相色譜法對純阿司匹林和記錄的峰下麵積進行定量。

結果

滴定分析

藥物樣品中阿司匹林的定量測定結果如下表2所示。檸檬酸的影響也說明了，因為它也消耗NaOH溶液的化學計量比為3:1。

貿易名稱	0.093N NaOH被無水檸檬酸消耗	滴定度值(毫升)	測定阿司匹林	標簽要求	%的錯誤
Aspro	-	22.6	229.34	250	-8.26%
Hedapen	-	15.25	290.85	300	-3.05%
ascard - 75	-	41.5	71.14	75	-5.15%
Micropirin	-	5.95	368.5	350	5.20%
Disprin	5.87	5.32	324.8	350	-7.10%
Dynasprin	-	43.35	55.66	60	-7.20%

表2:藥物樣品中阿司匹林的定量測定

紫外可見光譜分析

下麵的(表3)顯示了λ處收集的吸光度數據_馬克斯* Ycal -平均吸光度，Ycorr -校正後的平均吸光度*

存貨量Sol.Piptd (ml)	總量(毫升)	濃縮的×103毫克/毫升	吸光度1	吸光度2	吸光度3	Ycal	Y corr	偏差
0．1	10	5	0.095	0.156	0.139	0.13	0.129193	0.000807
0.2	10	10	0.235	0.254	0.250	0.252488	0.252488	-0.00015
0.3	10	15	0.38	0.382	0.378	0.38	0.375783	0.004217
0.4	10	20.	0.475	0.472	0.481	0.476	0.499078	-0.02308
0．5	10	25	0.629	0.625	0.634	0.62933	0.622373	0.00696
0.6	10	30.	0.757	0.759	0.754	0.756667	0.745668	0.010999
0.7	10	35	0.886	0.872	0.891	0.883	0.868963	0.014037
0.8	10	40	0.988	0.978	0.998	0.988	0.992258	-0.00426
0.9	10	45	1.105	1.109	1.104	1.106	1.115553	-0.00955

表3:純阿司匹林的吸光度數據

每種藥物的幹粉狀樣品的不同數量從15毫克到35毫克精確稱重在表玻璃上，轉移到100ml的量瓶中加入0.1N NaOH的標記，在水浴中煮沸10分鍾，過濾，濾液稀釋到100ml使用NaOH。取0.4 ml的溶液放入10ml的容量瓶中，用0.1 N的NaOH稀釋至標記，然後在λ處記錄吸光度_馬克斯= 297.4海裏。得到的結果如下表4所示。

取溶膠量(ml)	加入稀釋劑的體積	總卷。	濃縮的。(毫克/毫升)軸	峰值y軸下麵積
0	0	10	0	0
1	9	10	0．1	55428.7
2	9	10	0.2.	119041.9
3.	7	10	0.3	145870.5
4	6	10	0.4	197056
5	5	10	0．5	241416
6	4	10	0.6	306515.2

表4:使用校準曲線估計阿司匹林的量(圖3)

圖3:純阿司匹林校準曲線

從樣品中估計阿司匹林(所取樣品的重量:X克;溶液中阿司匹林濃度:Y mg/ml;阿司匹林的吸光度:Z mg/ml;百分比誤差:[(Y - z)/Y] × 100)。

基於HPLC儀器的估計

下圖(圖4)為0.5 mg/ml的純阿司匹林溶液色譜圖，如下圖所示，流速1.9 ml/min。

下麵(表5)顯示了使用不同濃度的純阿司匹林原液稀釋峰下麵積得到的結果。通過繪製阿司匹林濃度與峰值下麵積(Aup)的比值，標定曲線如圖5所示。對注射到HPLC機中的每個樣品溶液及其反映藥物中阿司匹林含量的峰下麵積進行了標定，並借助標定曲線(圖5)測定了製劑中阿司匹林含量的濃度。用於計算估計權重、百分比誤差和回收率的一般方法如下表6所示:

圖4:純阿司匹林色譜圖

圖5:阿司匹林濃度與峰下麵積的比值(Aup)

取溶膠量(ml)	加入稀釋劑的體積	總卷。	濃縮的。(毫克/毫升)軸	峰值y軸下麵積
0	0	10	0	0
1	9	10	0．1	55428.7
2	9	10	0.2.	119041.9
3.	7	10	0.3	145870.5
4	6	10	0.4	197056
5	5	10	0．5	241416
6	4	10	0.6	306515.2

表5:不同濃度的純阿司匹林原液稀釋峰下麵積

藥物的名字	區域峰下色譜圖	濃縮的。(毫克/毫升)	Wt。 計算(毫克)	複蘇 ％	錯誤 ％
Aspro	685056	1．25	249	99.6	0.4
Hedapen	719859.4	1.48	295	98.3	1.7
ascard - 75	169876.6	0.37	74.2	98.9	1．1
Micropirin	766038	1.7	340	97.1	2.9
Disprin	7824011	1.71	342	97.7	2．3
Dynasprin	145870.5	0.3	59.2	98.6	1．4

表6:顯示峰下麵積，Conc (mg/ml)，百分比誤差和回收率

計算樣品重量(Wt):

Wt꓿[(conc of the sample x 100)/50] × 100

錯誤%꓿[(Wt-Stdnt Wt)/Stdnt Wt] × 100

回收率%꓿(Ws/Stdnt Wt) × 100

Stdnt。指標準重量*

討論

從獲得的數據來看，如表7所示，滴定分析的估計誤差比UVVIS光譜或HPLC技術都要高。滴定法的估計誤差比紫外可見光譜法和高效液相色譜法都要高。在藥物製劑基質中，除有效成分外，還有粘合劑、稀釋劑、崩解劑、穩定劑、潤滑劑、著色劑和調味劑、載藥劑和堿等化學添加劑，主要幫助藥物在人體內的溶解機製、穩定性和藥物的鑒別。其中一些化學添加劑和輔料具有酸性和官能團(-COOH)，這會幹擾估計，特別是在定量操作中使用像NaOH這樣的強堿時。在化學計量學計算中，需要它們的結構配方和與估計試劑(堿，如NaOH等)的平衡方程，以反檢查它們在估計阿司匹林時的幹擾或影響，如滴定法的情況下，會導致定量誤差。這確實是一項艱苦的工作，因為它涉及到化學計量估計和數學操作，並導致不可避免的錯誤。因此，在濕法經典分析技術中涉及中和過程的這種方法應避免和不鼓勵使用，特別是在有酸性輔料的情況下。

在UV- vis光譜技術中，幹擾主要發生在藥物基質中有吸收電子與分析物吸收紫外線輻射的同一區域附近，從而產生顯著誤差，如藥物基質中含有羧基發色團的Disprin片。盡管使用校準曲線進行定量估計，誤差是不可避免的，因為它與吸光度讀數混合在一起。這種估計誤差可以避免，如果實現，通過分離活性分析物和量化。根據所獲得的數據，高效液相色譜技術已被證明是最好的，回收率非常好。在應力條件下測定阿司匹林的峰值純度，結果表明該方法具有穩定性、指示性和特異性。在阿司匹林的保留時間沒有發現其他峰值，這表明在配方中使用的輔料，甚至其降解產物，無論它是否存在，都不會幹擾其估計。MS/GC被證明可與高效液相色譜相比較，但由於提取和分離過程相當費力和耗時。

貿易名稱	高效液相色譜法誤差百分比	紫外可見規範。%的錯誤	滴定分析誤差百分比
Aspro	-0.4	2	-8.26
Hedapen	-1.7	6	-3.05
ascard - 75	-1.1	-2.5	-5.15
Micropirin	-2.9	-2.7	5.2
Disprin	-2.3	-32.8	-7.1
Dynasprin	-1.4	4.8	-7.2

表7:顯示HPLC, UV-VIS，滴定法的百分比誤差

建議

然而，使用所有這些技術，如果在進行量化檢查以抵消任何幹擾之前，對3個重複的安慰劑進行檢測，則可以獲得良好的恢複。多變量校準曲線聯合色譜技術已被證明是最可靠的藥物定量研究，應予以鼓勵。研究發現，無論是酸性的還是非酸性的輔料，製造商都有必要標明輔料的性質，並且在文獻說明書中應有藥物基質的定量分析數據。

參考文獻

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Anthony O, Moh 'd HS, Mataka MA, Juma A, Odalo OJ，等。(2017)使用滴定法、光譜和結合色譜技術對不同鎮痛製劑中的阿司匹林進行比較分析。J pharmaceutical Anal Insights 2(1): doi http://dx.doi.org/10.16966/2471-8122.113

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出版的曆史:

收到日期:2017年8月21日

接受日期:05年9月2017年

發表日期:2017年9月11日