摘要

真菌及其毒素的汙染被認為是威脅消費者健康的最危險的隱性汙染物之一。各種食品中都有黴菌毒素的記錄，盡管它們對人類食用顯然是安全的。目前的研究是為了評估患病率曲黴屬真菌sp種類和黃曲黴毒素產生基因分別用培養和分子方法。從埃及Gharbiya省的各種雜貨店和家禽商店隨機收集了共75個雞塊樣本，分別為雞翅、雞胸和雞腿(各25個)。培養和分離技術的結果顯示檢測到曲黴屬真菌sp．分別有36%，48%和44%的翅膀，乳房和大腿樣本。此外，分離菌株的微生物學鑒定顯示存在答:尼日爾，答:flavus，答:來自煙，答:terreus而且答:寄生在16、13.3、10.6、1.3和1.3%的被檢查樣本的總人口中。黃曲黴毒素產生調節基因OmtA、Nor1和Ver1的分子檢測曲黴屬真菌sp．分離株檢出率分別為8/10(80%)、8/10(80%)和7/10(70%)，陽性條帶分子量分別為1024、400和537 bp。根據記錄的結果，在處理和儲存過程中，在不適當的良好生產工藝和不適當的衛生條件下，雞肉切塊可能對人類具有巨大的無聲危險。

關鍵字

曲黴屬真菌sp種類；雞肉切塊;cPCR;埃及

簡介

發展中國家的雞肉及其衍生產品生產在支持糧食安全和滿足禽肉需求方麵發揮著至關重要的作用[1]。

肉製品被黴菌汙染可能發生在不同的準備階段，在不衛生的屠宰條件下，使用受汙染的水，或添加受汙染的帶有黴菌孢子的香料，或在包裝、處理、運輸和儲存[2]。

黃曲黴對肉類的汙染是最危險的微生物汙染之一，因為該部分的大多數物種能夠產生黃曲黴毒素，可導致嚴重的疾病，並具有致癌作用[3]。

急性黃曲黴毒素中毒可能導致死亡，正如2004年肯尼亞記錄的那樣[4]，而慢性中毒可能導致各種記錄的誘變原和癌症[5]。

根據它們對食物和人類健康的毒性影響，曲黴屬真菌sp．分為兩組:黃曲黴產氧物種如答:flavus而且答:寄生，以及非黃曲黴產氧菌株如答:tamarii而且答:oryzae[6]。

分子分析已被用來證實黃曲黴毒素的生產力曲黴屬真菌sp種類隔離。omtA、nor1和ver1基因來自於常用的aflP、aflD和aflM基因編碼，食品中毒素的檢測[7]能準確、快速、可靠地記錄毒素曲黴屬真菌sp種類特別是在食物鏈[8]。

因此，目前研究的主要目標是調查毒素的存在曲黴屬真菌sp種類從埃及加爾比亞省市場收集的一些雞肉切塊中發現了細菌。

材料與方法

樣本的收集

從埃及Gharbia省不同的當地家禽商店和不同的超市中收集了75份冰鮮生雞翅、雞腿和雞胸肉(各25份)的隨機樣本。樣品在無菌聚乙烯袋中取出，然後放在冰盒中轉移到實驗室進行真菌學檢查。

樣品[9]的製備

每個樣品取25克，與0.1%的無菌蛋白腖水225 ml混合成1:10的稀釋液，在盲罩中仔細無菌均質，配製10倍連續稀釋液。

的決心曲黴屬真菌sp種類

製備樣品的培養:根據ISO[10]對製備的樣品進行培養，將0.1ml之前製備的係列稀釋液通過無菌l型玻璃棒噴灑在兩個含有氯黴素(DRBC)凝固的二氯玫瑰瓊脂的培養皿上，然後在25°C下直立培養5 -7天。

分離菌株的鑒定:分離菌株的鑒別在宏觀和微觀上均按照Pitt JI, et .[11]進行，見表1。

	菌落直徑(mm)	Texure	表麵的顏色	相反的顏色	葉柄	囊泡	Serriation	分生孢子	殖民地頭/隱尾膜
答:flavus	65 - 70	絮體粉狀或顆粒狀	青黃色	淡棕色	粗糙的透明	球形的或亞球形的	Biseriate	球狀到橢球體	輻射頭
答:fumaiguts	40 - 70	vevey變成粉末	藍邊白邊	輕微的綠色	光滑的透明	棍棒狀的	單列的	球形的或亞球形的	列頭
答:nidulans	50 - 65	柔軟的	綠色	棕色（的）	光滑的棕色	梨形的	Biseriate	球狀的粗糙	輻射頭/草皮細胞
答:尼日爾	50 - 70	顆粒狀的或粉狀的	黑色的	淡黃色	平滑的黃色到棕色	輪	Biseriate	球狀的布朗	圓頭
答:terus	獎金的	粉狀	從桑迪到棕色	淡棕色	光滑的透明	圓形到梨狀	Biseriate	球狀到橢圓形	列頭

表1:形態特征曲黴屬真菌物種[11]。

部分分離曲黴菌株黃曲黴毒素產生基因的cPCR分子檢測

cPCR中使用的寡核苷酸引物:製備了3對omtA、nor1和ver1引物，引物來自德國Metabion公司。它們的特殊序列和放大某些產物如表2所示。

基因	序列(5 ' - 3 ')	放大積(bp)	參考
omtA	GGCCCGGTTCCTTGGCTCCTAAGC	1024	Norlia M等。2019 [29]
nor1	ACCGCTACGCCGGCACTCTCGGCAC	400
ver1	GCCGCAGGCCGCGGAGAAAGTGGT	537

表2:寡核苷酸引物序列。

真菌學DNA提取遵循QIAamp DNeasy植物小試劑盒目錄號。69104.

根據製造商說明(Emerald Amp GT PCR主混合物(Takara)代碼No.)進行主混合物的製備和熱剖麵的調整。RR310A)。

結果

如表3所示，曲黴屬真菌sp．共檢出32份(42.6%)。其中，乳房樣本的汙染水平最高(48%);然後分別采集大腿和翅膀樣本。

樣品	翼		乳房		大腿		總計
	不。	% *	不。	% *	不。	% *	不。	% * *
曲黴屬真菌sp。	9	36	12	48	11	44	32	42.6

表3:普遍存在的曲黴屬真菌物種在檢查的雞肉切割樣品(n= 25個)。
%*患病率與每個樣本的數量相關(25)。
%**患病率與樣本人群總數的關係(75)。

關於屬的鑒定，答:尼日爾在檢測樣品中檢出率最高(16%)(表4)。

樣品	翅膀		乳房		大腿		總計
曲黴菌。	不。	％	不。	％	不。	％	不。	％
答:尼日爾	4	16	6	24	2	8	12	16
答:flavus	2	8	4	16	4	16	10	13.3
答:來自煙	2	8	1	4	5	20.	8	10.6
答:terreus	1	4	-		-		1	1.3
答:寄生	-	-	1	4	-		1	1.3

表4:確診的患病率曲黴菌．在檢查的雞肉切(n= 25個)。

參考表5和圖1-3中記錄的部分黃曲黴毒素產生基因的分子檢測結果;omtA、nor1和ver1基因分別在8/10(80%)、8/10(80%)和7/10(70%)被檢者中檢出答:flavus分別隔離。這些基因的存在表明檢測菌株對黃曲黴毒素P、D和M的生產能力。

圖1:瓊脂糖凝膠電泳的omtA (1024 bp)基因的cPCR答:flavus．
雷恩L:100 bp的階梯作為分子大小的DNA標記。
雷恩P:積極的控製答:flavus為omtA基因．
雷恩N:控製消極。
1、3、4、5、6、7、9、10車道:積極的答:flavus為omtA基因。
2、8號車道:負答:flavus為omtA基因．

圖2:基因nor1 (400 bp)的瓊脂糖凝膠cPCR電泳答:flavus．
雷恩L:100 bp的階梯作為分子大小的DNA標記。
雷恩P:積極的控製答:flavus為nor1基因．
雷恩N:控製消極。1、3、4、5、6、7、9和10號車道:沒問題答:flavus為nor1gene．
2、8號車道:負答:flavus為nor1基因．

圖3:基因ver1 (537 bp)的瓊脂糖凝膠cPCR電泳答:flavus．
雷恩L:100 bp的階梯作為分子大小的DNA標記。
雷恩P:積極的控製答:flavus為ver1基因．
N道:控製陰性。1、3、4、5、6、9、10號車道:積極的答:flavus為ver1基因．
2、7、8號車道:負答:flavus為ver1基因．

樣本	omt一個	也不1	版本1
1	+	+	+
2	-	-	-
3.	+	+	+
4	+	+	+
5	+	+	+
6	+	+	+
7	+	+	-
8	-	-	-
9	+	+	+
10	+	+	+

表5:黃曲黴毒素產生基因的流行率答:flavus分離物來自檢測樣品(n= 10)。

討論

雞肉和肉製品是世界各地人類蛋白質補充的重要來源，因為它們提供了可消化的蛋白質、低膽固醇脂肪、必需氨基酸、礦物質和不同類型的維生素的良好來源。

在埃及，隨著人口的增加，對動物蛋白質的需求也在增加，這是一個嚴重的挑戰，而禽業作為快速和更經濟的蛋白質來源，在填補營養缺口方麵發揮著重要作用[12]。

肉類和肉製品的黴菌汙染一直被認為是食品腐敗的一個嚴重來源，導致風味、顏色、質地、氣味的不同感官變化，主要是指真菌惡化，特別是在貧窮的發展中國家，由於在加工和處理[13]期間缺乏衛生措施。

食品中黴菌的存在可能是指真菌孢子的快速、易擴散和廣泛傳播，它們大量存在於通過灰塵、水、工人和設備引入食物鏈的環境中。它們在食物樣本中的存在是一個嚴重的公共衛生問題，因為這些真菌可能與真菌毒素[14]的產生有關。

曲黴屬真菌sp種類作為一種人類病原體和產生毒素的食品汙染物，是引起公共衛生關注的一種重要真菌感染。它會釋放大量的孢子，這些孢子可以在空氣、水、土壤、植物殘骸、糞便和動物飼料中找到。隨著真菌孢子的生長，它會分泌消化酶和真菌毒素，導致食物腐敗和人類真菌中毒[15]。

參照表3的記錄結果，曲黴屬真菌sp．除翅膀和大腿樣本外，在乳房樣本中顯著檢測到真菌感染，這與Darwish W等人(2016)[16]和Shaltout F等人(2019)[17]之前記錄的結果一致，他們發現檢查的乳房樣本比翅膀和大腿樣本受真菌感染的汙染更嚴重。而目前流行的曲黴屬真菌sp種類在檢查樣本中的含量低於Hassan W等人(2019)[18]發現的曲黴屬真菌sp．在從埃及蓋爾比亞省收集的所有檢測樣本中(100%)。此外，還檢測到[19]答:flavus而且答:尼日爾分別在40%和80%的雞源香腸樣品中

參考已獲得的微生物鑒定結果曲黴屬真菌sp．如表4所示，它們與Darwish W等人(2016)[16]之前報道的結果一致，他們發現答:尼日爾檢測到的主要菌株是答:flavus而且答:寄生從埃及紮加齊格市采集的雞肉切塊的檢驗樣本中。

某些黴菌種類可引起呼吸道感染，這對免疫係統[20]嚴重減弱的個體具有重大風險。黴菌高發說明在處理、製備和加工[21]過程中衛生措施不佳。

真菌毒素已被定義為自然發生的次生真菌代謝物，產生於肉類和肉製品直接生長的產毒黴菌，如曲黴屬真菌sp種類它們產生黃曲黴毒素和赭曲黴毒素，對人類和動物具有致癌、肝毒性、腎毒性、致畸和誘變作用，威脅公眾健康[22]。

黃曲黴毒素是通過聚酮途徑產生的，該途徑經過約27個酶促反應，這些酶促反應受到一係列基因的調控，包括nor1, ver-1和omtA，已被證明參與了這一過程。aflD (NOR -1)編碼降solorinic acid (NOR)的10-酮基轉化為Versicolorin a (VERA)[23]的10-羥基所需的降solorinic acid酮還原酶，aflM (ver-1)被預測編碼酮還原酶，參與VERA轉化為Sterigmatocystin (ST) [24];aflP (omtA)編碼o -甲基轉移酶，該酶是負責將ST轉化為o -甲基sterigmatocystin (OMST)的主要基因之一，OMST是黃曲黴毒素生成[25]的前體。

許多其他的研究記錄了用各種PCR技術在食物來源的曲黴菌分離株中檢測到這些基因[26-29]，他們進行了幾項研究，調查了黃曲黴致氧性曲黴屬真菌sp．可以在他們的曲黴菌分離株中檢測到不同的基因。

結論

可以得出結論，乳房樣本顯示出最高的汙染水平曲黴屬真菌sp；此外,答:尼日爾是最顯著的檢測菌株。PCR技術是檢測和鑒定產黃曲黴毒素曲黴菌株的一種獨特的診斷工具，特別是在食品安全領域。因此，建議采取嚴格的衛生措施，正確使用水源和來源良好的食品添加劑。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Shaltout F, Heikal GI, Ghanem AM(2022)黃曲黴毒素產生的分子檢測曲黴屬真菌sp種類在埃及加爾比亞省的一些雞肉切割中分離出的病毒。Nutr Food technology開放訪問8(1):dx.doi.org/10.16966/2470-6086.178

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出版的曆史:

收到日期:2021年12月1日

接受日期:2022年2月02日

發表日期:2022年2月14日