摘要

從埃及menofia省不同地方采集120隻本地新鮮和進口冷凍肉雞胸、肝、腎和胗，采用高效液相色譜法(HPLC)測定其土黴素(OTC)和氨苄西林(Ampicillin)殘留量。

結果:國產肉雞肉、肝髒、肌胗、腎髒、進口肉雞肉和腎髒中非處方OTC殘留分別占55%、70%、50%、70%、10%和15%，平均值分別為471.4±33.8、773.9±49.5、11.6±0.9、2676.0±117.5、114.7±8.3和546.7±41.2。50%、55%、35%、50%、35%、45%的同類樣品氨苄西林殘留陽性，分別為329.2±20.7、853.3±65.1、164.5±9.8、531.6±37.4、177.9±15.4、323.8±26.6。

各種烹飪方法的應用;對10份雞肌肉樣品進行煮、煎、烤三種方法的結果表明，煮、煎、烤三種方法對氨苄西林殘留濃度的平均降低率分別為84.52%、93.62%和96.58%，煮、煎、烤三種方法對氨苄西林殘留濃度的平均降低率分別為81.22%、90.54%和94.5%。

雞屍體中抗生素殘留的存在對消費者的健康具有風險，如抗生素耐藥性、致畸性、致癌性、肝腎衰竭。獸醫控製家禽飼養場的停藥時間和屠宰後檢驗家禽的抗生素殘留，是減少禽肉中抗生素殘留的重要措施，可改善雞肉的品質，保障消費者的權益。

簡介

在家禽中，抗生素被過度用於各種目的，如預防、控製疾病和作為生長刺激劑，因此抗生素的使用促進了它們的高效生產，提高了家禽的健康和福祉[1,2]。土黴素(OTC)和氨苄西林(Ampicillin)是獸醫中最常用的常規藥物，用於預防和控製家禽[3]疾病。

不幸的是，在生產食品的動物中使用抗生素可能會在肉類等動物源性食品中留下殘留，這是因為沒有遵守每種藥物的停用期、動物的標簽外劑量、被治療動物的排泄物汙染動物飼料和/或非法使用未經許可的抗生素[4]。食用動物組織中殘留的土黴素對消費者的健康有不良影響，例如過敏反應、耐藥微生物的傳播、肝損傷、牙齒黃變、胃腸道紊亂以及可能的致突變和/或致癌影響[5]。而食用肉類中青黴素殘留最常見的不良反應是過敏反應，特別是皮疹和胃腸道紊亂，包括腹瀉、惡心和有時嘔吐[6]。禽肉中抗生素殘留的檢測是控製食品質量和安全的重要手段，目前已有多種檢測禽肉組織中抗生素殘留的方法，其中高效液相色譜法(HPLC)是最有效、最靈敏的方法。高效液相色譜技術[8]可對組織樣品中多種殘留進行較為簡單、快速的典型檢測。

為確保人類食品安全，世衛組織和糧農組織製定了食品中最大殘留限量標準。此外，歐盟(EU)也製定了自己的MRLs[9]。根據糧農組織/世衛組織食品添加劑聯合專家委員會[10-12]，肌肉中可接受的OTC殘留最大殘留限量為200微克/公斤，肝髒為600微克/公斤，腎髒為1200微克/公斤，而肌肉、肝髒和腎髒中氨苄青黴素殘留量可接受的最大殘留限量為50微克/公斤。對禽肉中抗生素殘留的控製可通過對藥敏試驗後給予準確劑量，在停藥時間[13]內防止屠宰來實現。此外，良好的烹飪和冷凍被用於去除大部分抗生素殘留;工業加工過程中使用的高熱緊接著驟冷也可以去除殘留[14]。

本研究的目的是通過高效液相色譜(HPLC)技術監測抗生素(土黴素和氨苄西林)的殘留量，並特別參考最常見的烹飪方法(煮、煎、烤)對抗生素殘留量的影響，以了解本地和進口冷凍肉雞組織和內髒的安全性。

材料與方法

樣本的收集

從埃及menoufia省不同地方的家禽商店收集120隻肉雞的胸、肝、腎和胗作為冷凍的本地和進口樣品，用於測定其土黴素和氨苄西林的殘留)。這些樣本被收集在幹淨的無菌聚乙烯袋中，並在冰盒中毫不拖延地直接轉移到實驗室。

檢驗樣本中抗生素殘留量的測定

采用高效液相色譜法(HPLC)測定樣品中土黴素和氨苄西林殘留量。

樣品中土黴素殘留量的測定

所有標本在切除外脂肪和筋膜後，用剪刀切成細碎的小塊。每個待分析器官取2g用數字天平稱量，然後切成非常小的塊，用切肉機磨成細粉，在攪拌器中均質2min，然後加入0.1 gm檸檬酸。在混合物中分別加入硝酸1 ml(30%)、甲醇4 ml和去離子水1 ml。將含有固體顆粒的懸浮液放入渦流中充分混合，在超聲浴中保持15分鍾，然後以5300 rpm的轉速離心10分鍾。根據Senyuva等人的[15]，在通過0.45 um尼龍過濾器過濾後，將20 ul的溶液注入HPLC進行分析。

氨苄青黴素殘留量的測定

每個樣品都準備好，用特定的溶劑提取藥物

提取:準確地，每個樣品5±0.01 g放入50 ml蓋蓋聚丙烯離心管中，加入15 ml乙腈/水(15:2)。樣品完全均質1分鍾，以4000轉/分離心。取上清液重複均質和離心一次。此外，將組合上清液放入圓底燒瓶中，乙腈在37°C下蒸發。至少，在燒瓶中應該找到大約6毫升的剩餘上清。使用磷酸鹽緩衝液(pH值8.5)時，上清液的總容積應達到20毫升。上清通過再生纖維素，25mm, 45um注射器過濾器(Agilent引腳5185-5831)過濾。實際上，10毫升的提取物被裝載到安捷倫Sampli Q OPT 6 ml /150 mg的藥筒[16]上。

淨化:用0.1%的甲酸在水中洗滌，然後用pH值為8.5的磷酸鉀緩衝液洗滌。最後，用3ml乙腈洗脫樣品。樣品用13mm, 45ml聚四氟乙烯(PTFE)注射器過濾器過濾(Agilent引腳518-5836)。淋洗液在氮氣下室溫幹燥。殘渣在流動相中重新懸浮至1.0 ml。樣品旋轉2分鍾，然後轉移到2ml的自動進樣瓶(Agilent pin 5182-0864)[17]。

固相萃取和最終樣品製備:固相萃取管置於真空歧管係統中，固相萃取管流出液進入溶劑阱。準確地說，先加入25毫升甲醇，然後加入25毫升水，再加入40毫升0.01 M氫氧化鈣。流速對於這些步驟來說並不重要。此外，3ml的樣品以不超過2滴/秒的流速應用於墨盒。在這一步，藥筒不允許幹燥，然後用40毫升蒸餾水和10毫升乙腈衝洗藥筒。用40 ml含50%甲醇的2.5%醋酸洗脫。收集的洗脫液在45°C旋轉蒸發器蒸發，直到完全幹燥。幹燥後的殘渣在3ml流動相中被重組。樣品經0.2 μ m過濾器混合過濾後注入LC體係。

色譜條件

氧四環素:包括甲醇和0.1%的甲酸流動相，采用梯度法，流速為1.5 ml/min。在25°C。分離在Hypersil金C18 (10 um, 100 × 4.6 mm)色譜柱上進行，流動相如上所述。PDA檢測器設置在350 nm波長處進行檢測。通過軟件(Chromo Quest 5)自動外推曲線下的麵積，得到並計算樣品中殘留物的定量。

氨苄青黴素:用於抗生素測定的高效液相色譜(HPLC)是在德國Waldbronn Agilen Technologies的Dokki動物衛生研究所的Agilent 1100高效液相色譜係統，配備第四泵型號G 1311A，紫外檢測器(型號G 1314A)設置在254 nm波長，自動進樣器(型號G1329A v - ods)和Shim包裝(150 × 4.6 mm)柱(日本京都島津)。

結果與討論

從表(表1)和圖(圖1和圖2)報告的結果可以看出，在國產肉雞肉、肝髒、胗、腎髒、進口肉雞肉和腎髒的檢測樣品中，土黴素殘留量分別為55%、70%、50%、70%、10%和15%，平均值分別為471.4±33.8、773.9±49.5、11.6±0.9、2676.0±117.5、114.7±8.3和546.7±41.2。目前的結果與Salehzadeh等人[18]的報道一致，他們檢測到雞肝髒和腎髒中土黴素(OTC)殘留的平均濃度分別為576.657±201.908和517.56±186.64 ug/kg。所得結果高於Cetinkaya等人[19]測定雞組織中土黴素殘留量為17.2 ug/kg的結果。目前的結果低於Salama等人[20]報告的新鮮雞胸肉、大腿和肝髒樣品中土黴素殘留的最大濃度分別為5812、6010和8148 μg/ kg。

表1:本地和進口冷凍肉雞肉和雞雜樣品中土黴素和氨苄西林殘留量(Ug/Kg)的統計分析結果(n=20)。
*東南部- mean ++-t檢驗標準誤差差異極顯著(P<0.01)。

圖1:本地及進口凍肉仔雞及雞雜樣品中土黴素濃度平均值(ug/kg)

圖2:本地和進口雞肉和雞雜樣品中氨苄青黴素濃度平均值(ug/kg)。

圖3:根據本地及進口凍肉仔雞及雜肉的土黴素殘留量，檢驗樣本的可接受性。
(*根據美國聯邦法規，2003年，FAO/WHO, EOSQC, 2008年，食品法典委員會，2012年，**根據EC, 2010年，MRL)

國產肉雞、肝髒、胗、腎髒、進口肉雞和腎髒中氨苄青黴素殘留量分別為50%、55%、35%、50%、35%和45%，分別為329.2±20.7、853.3±65.1、164.5±9.8、531.6±37.4、177.9±15.4和323.8±26.6。檢測樣品中氨苄西林殘留的發生率證實了Verdon等人[21]用高效液相色譜法測定腎髒、肝髒和肌肉組織中氨苄西林殘留的記錄，檢出限約為3-11 ug/kg，定量限評價為25ug/kg。

根據本地及進口肉雞肉及雜碎的土黴素殘留量，檢驗樣本的可接受程度見圖3。準確地說，本地肉雞肉、肝髒、腎髒和胗的檢驗樣品合格率分別為65%、50%、50%和100%。所有經檢驗的進口肉類和腎髒樣本均未超過允許的限量。這是根據美國聯邦法規[22]法典、糧農組織/世衛組織[23]法典、埃及標準化和質量控製組織“EOSQC”第3692號[10]法典和食品法典委員會[12]法典規定的土黴素的最大推薦劑量(肌肉200微克/公斤，肝髒和胃600微克/公斤，腎髒1200微克/公斤)。此外，根據糧農組織/世界衛生組織(1998)[24]和歐洲共同體(EC)[25]所估計的土黴素殘留量最高限量(肌肉為100 ug/kg，肝髒和砂囊為300 ug/kg，腎髒為600 ug/kg)，根據土黴素殘留量，接受的本地肉雞肉、肝髒、腎髒和砂囊樣品分別為45%、45%、40%和100%。進口肉雞肉和雞腎的土黴素殘留量檢測樣本分別為90%和95%，見圖3。AlGhamdi et al.[26]可以在雞組織樣品中檢測到不同比例的土黴素(OTC)殘留，分別檢測到87%的家禽肌肉和100%的家禽肝髒樣品有OTC殘留。

基於氨苄西林殘留水平的本地肉雞肉和雞雜樣品的可接受性如圖4所示。準確率分別為50%、45%、70%、50%、70%、55%，對本地肉雞肉、肝髒、胗、腎髒、進口肉雞肉和腎髒的檢測樣品進行了驗收。這是根據糧農組織/世衛組織(1998)[24]、埃及標準化和質量控製組織“EOSQC”第3692號(2008)[10]、歐洲共同體(EC)(2010)[25]和食品法典委員會(2012)[12]記錄的氨苄西林(50微克/公斤用於肌肉、肝髒、胗和腎髒)的最大殘留限量[24]。此外，Darwish等人[27]在18%的組織樣品中可以檢測到氨苄西林殘留量的不同百分比。

結果表明，肉雞肝髒中土黴素和氨苄西林殘留量最高。這些結果與Pavlov et al.[28]報道的肝髒和腎髒中殘留濃度最高，皮膚脂肪、腹部脂肪和肌肉中殘留濃度極低的結果一致。

國產和進口肉雞肉和雞雜檢測樣品中土黴素和氨苄青黴素殘留量差異極顯著(P<0.01)，見表2。

圖5的結果表明，不同的烹飪方法(煮沸、油炸和燒烤)對檢測雞肉樣品中土黴素(OTC)和氨苄青黴素殘留量的影響。煮、煎、烤前雞肉中OTC殘留濃度平均值為446.16 ug/kg。而經煮、煎、烤處理後，OTC殘留濃度降低率分別為84.52%、93.62%、96.58%。

雞肉在煮、炸、烤前氨苄青黴素殘留量平均值為253.7 ug/kg。蒸煮、煎炸和燒烤後氨苄青黴素殘留量平均下降%分別為81.22%、90.54%和94.5%。由此可見，蒸煮、煎炸和燒烤對土黴素和氨苄青黴素殘留量和部分降解均有積極作用。因此，使用加熱處理，如煮沸，焙燒，油炸和高壓滅菌可能導致破壞所有藥物殘留[29]。因此，使用較高溫度和較長時間的適當烹飪過程可以最大限度地減少食品中的抗生素殘留，並為消費者提供額外的安全邊際[30]。因此，良好的烹飪方法可以去除大量抗生素殘留，如土黴素和氨苄西林[14]。

結論和建議

結果表明，經檢驗的本地和冷凍進口肉雞內髒和組織被土黴素和氨苄西林殘留汙染，尤其是肝髒，其次是腎髒、肌肉和砂囊，可能對動物和人的健康構成危害。此外，應用不同的烹飪方法(煮、炸和烤)對土黴素和氨苄西林的殘留濃度有積極的降低作用。

因此，為提高禽肉的衛生質量，防止消費者因禽肉中的抗生素殘留而受到不良影響，屠宰場應進行宰前檢驗，排除病禽，並采用高效液相色譜法等簡便、簡便、靈敏、快速的方法對可疑樣品進行殘留檢測。應建立積極的監測程序，以監測食品中的藥物殘留;應對肉類進行熱處理，以滅活飼料中的抗生素汙染物。

圖4:根據經檢驗的本地及進口凍肉仔雞及雜肉樣本中氨苄青黴素殘留量的可接受性。
(* MRL根據美國聯邦法規，2003年，FAO/WHO, EOSQC, 2008年，EC, 2010年和食品法典委員會，2012年)

表2:本地肉雞肉和雞雜樣品中土黴素和氨苄西林殘留量的方差分析。
++-t檢驗差異極顯著(P<0.01)。

圖5:不同烹調方法(煮、炸、烤)對雞肉中土黴素、氨苄青黴素殘留量的影響(還原%)。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Elbagory AM, Yasin NA, Algazar EA(2016)不同烹飪方法對埃及進口和本地冷凍肉雞及其雞雜中抗菌殘留的影響。堅果食品技術2(3):doi http://dx.doi。org/10.16966/2470 - 6086.127

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出版的曆史:

收到日期:2016年4月20日

接受日期:2016年6月03

發表日期:2016年6月08