營養與食品技術科學

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研究文章
大腸菌群,抗生素耐藥大腸菌群和大腸杆菌埃及生乳中的血清型及一些生乳奶酪品種

Abd El Rahaman M Elbagory* 1艾哈邁德·M Hammad1Alzahraa2馬Shiha2

1埃及薩達特市獸醫大學醫學院食品衛生與控製係
2梅諾菲亞大學醫院,埃及什賓埃爾科姆

*通訊作者:Abd El Rahaman M Elbagory,埃及薩達特市獸醫大學食品衛生和控製係,E-mail: Elbagory200@yahoo.com


摘要

本研究調查了大腸菌群的患病率,抗生素耐藥大腸菌群和大腸杆菌生奶中的血清型和埃及某些品種的生奶奶酪。120個從埃及米諾菲亞省不同地區收集的生牛奶和白色軟奶酪(鹽和非鹽)和硬奶酪(Ras)樣本進行了檢測。所得結果表明大腸菌群成員包括大腸杆菌,枸櫞酸杆菌屬diversus,弗氏梭菌,產氣腸杆菌,凝塊腸杆菌,陰溝腸杆菌,肺炎克雷伯菌亞綱和k .肺炎sub. spp。肺炎從檢測樣品中分離出來的比例不同。采用Kirby-Bauer紙片擴散試驗檢測細菌對氯黴素、亞培南、舒巴坦+頭孢呱酮、氨苄西林+舒巴坦、阿莫西林+克拉維酸、頭孢噻肟、慶大黴素、阿米卡星、頭孢呱酮、四環素等10種抗菌藥物的敏感性。部分菌株表現為多藥耐藥表型。之前測試的大腸菌群菌株依次顯示出對AMC的耐藥性;山姆& amc;Amc & CFP;AMC & TE和C, AMC, CFP & TE抗生素均對其他被測抗生素敏感。孤立的大腸杆菌被證實屬於5種血清型;O111: K58(B9腸出血性大腸杆菌,阿124: K72(B17) EIEC O119: K69(B19) EPEC、阿55: k59(B5) EPEC和不可分型菌株。總之,這項研究提供了有關埃及生乳奶酪中大腸菌群發病率的有意義的數據,隻是強調了在埃及生乳奶酪製備過程中需要實施嚴格的衛生措施。在這項研究中發現的最令人擔憂的趨勢是對抗生素耐藥性和潛在毒性的測定大腸杆菌菌株。這一發現使得對大腸菌群的持續監測成為識別食品生產中新出現的有害菌株的高度優先事項。

關鍵字

大腸杆菌群;抗生素耐藥大腸杆菌群;大腸杆菌血清型;奶酪

簡介

盡管牛奶具有出色的營養質量,但它也是傳播食源性病原體的有效媒介,對人類健康構成嚴重威脅,並構成約90%的與乳製品有關的疾病[1]。大腸杆菌群特別大腸杆菌常用於食品的微生物分析中,作為衛生條件差的指標。此外,大腸菌群試驗被用來衡量乳製品中減少微生物汙染的做法的質量,並作為HACCP體係中批準的安全指標[2,3]。奶酪被大腸菌群汙染,特別是被糞便大腸菌群汙染,表明了直接或間接的糞便汙染,並被認為是在加工和銷售過程中無視許多衛生規則的一麵鏡子[4]。大腸菌群的一些成員負責發展的牛奶及其產品的不良汙染,使其質量低劣,甚至無法銷售,而且某些血清型的大腸杆菌與胃腸炎和食物中毒爆發有關[2]。

耐抗生素大腸菌群在世界範圍內不斷增加,導致人類傳染病的治療失敗,它們是人類和動物抗感染治療的主要問題。此外,它們在世界上被認為是危險的健康、社會和經濟問題,大腸菌群的抗生素耐藥性具有生物危險,增加了動物和人類的[5]疾病。因此,本研究計劃分離和鑒定大腸菌群,血清分型分離大腸杆菌以及對分離的大腸菌群的不同成員的抗生素耐藥性的測定。

材料和方法
奶酪樣品的收集和製備

一百二十份樣品;從埃及Menofia省不同地方的乳製品商店分別收集30份生牛奶、白鹽軟奶酪、白無鹽軟奶酪和拉斯奶酪,裝在幹淨的無菌聚乙烯袋中,並在最短的時間內用冰盒轉移到實驗室進行檢測。將每個奶酪樣品充分搗碎,然後從每個準備好的樣品中取25克無菌添加到225毫升的2%檸檬酸鈉中,充分混合直到完全乳化。

大腸菌群的分離與鑒定

APHA[6]記錄的技術用於從製備的生牛奶和製備的奶酪樣品中分離大腸菌群。根據Holt等人[7]的研究,分離純化的大腸菌群從形態學和生物化學上進行了鑒定。

血清學鑒定大腸杆菌隔離[4]

用Denka Seiken株式會社生產的多價抗血清和相應的單價抗血清對分離的大腸杆菌菌株進行血清學鑒定。在那裏,將兩滴分離的無菌蒸餾水放在幹淨的載玻片上,從疑似培養物中提取一部分菌落,在載玻片上的每一滴無菌蒸餾水中使用無菌環進行乳化,以獲得光滑、相當致密的懸浮。之後,在其中一種懸液中加入一滴無菌蒸餾水混合作為陰性對照,同時在另一種懸液中加入一滴多價抗血清,前後交替,持續1分鍾。當與多價血清中的一個池發生強陽性凝集時,觀察到凝集。菌落的另一部分接種到營養瓊脂斜培養基中,培養進一步生長,以獲得用於單價血清檢測的培養物。在蒸餾水中製備各斜坡培養菌的重懸液,用O和K血清進行滑片凝集試驗,以確定O和K抗原。大腸杆菌多價2、3、4和大腸杆菌單價抗血清;采用O26: K60 (B6)、O44: K74 (B-)、O55: K59 (B5)、O78: K80 (B) O86: K (B7)、O11: K58 (B9)、O112: K66 (B1)、O114: K9、O119: K69 (B19)、O124: K72 (B17)、O125: K70 (B15)、O126: K71 (B16)、O127: K63 (B8) O128: K67 (B12)、O142: k86和O157:H7。

一些分離的大腸菌群的抗生素圖

根據臨床和實驗室標準協會[8]指南,采用圓盤擴散法檢測特征菌株對10種抗菌藥物的敏感性。抗菌藥物分別為氯黴素(30µg)、亞培南(10µg)、舒巴坦+頭孢呱酮(105µg)、氨苄西林+舒巴坦(20µg)、阿莫西林+克拉維酸(30µg)、頭孢噻肟(30µg)、慶大黴素(10µg)、阿米卡星(30µg)、頭孢呱酮(75µg)、四環素(30µg)。然後根據CLSI[8]將單個抗菌藥物的區域直徑轉化為敏感、中間和耐藥類別。

討論
孤立的大腸杆菌群

圖1中的數據顯示,分離出的大腸菌群在檢查的原料牛奶樣品中的發生率為大腸杆菌(7/30, 23.33%),枸櫞酸杆菌屬diversus(7/30, 23.33%),c . freundii(8/30, 26.67%),腸杆菌屬aerogenes(7/30, 23.33%),大腸agglomerans(3/30, 10%),大腸下水道肺炎克雷伯菌(4/ 30,13.35%)、奧薩納亞氏菌(6/ 30,20%)和肺炎克雷伯菌(4/ 30,13.35%)k .肺炎肺炎亞菌(4/30 13.33%)。而在檢測的鹽白色軟質奶酪樣品中分離出的大腸菌群大腸杆菌(4/ 30,13.3%)、分散檸檬酸杆菌(4/ 30,13.3%)、弗氏梭菌(6/ 30,20%)、產氣腸杆菌(4/ 30,13.33%)、大腸agglomerans(2/30, 6.67%),大腸下水道(6/30, 20%),肺炎克雷伯菌sub. spp。ozaenae肺炎克雷伯菌(3/ 30,10%)和肺炎克雷伯菌(6/ 30,20%)。大腸杆菌群以外的大腸杆菌Digrak & Ozcelik和Amer等[9,10]均能分離出不同比例的菌株。的發病率大腸杆菌證實了Nichols等人和El-Gamal & Abdel-Khalek[11,12]的記錄。已經證明k . pnumoniae是肺炎、敗血症、尿路及軟組織感染等院內感染的重要原因[13,14]。據報道,oxytoca是一種產腸毒素的微生物,可引起抗生素相關性出血性結腸炎[15]。腸杆菌屬的一些種大腸zakazakii與其他腸道微生物不同,可引起新生兒[16]中樞神經受累的菌血症和腦膜炎等高致死性綜合征。此外,誌賀樣毒素基因水平轉移到一些檸檬酸杆菌屬的物種,如弗氏梭菌,這是德國學校兒童中暴發疫情的原因,進一步突出了大腸菌群[17]的公共衛生重要性。圖1中的數據顯示,在檢測的無鹽軟質奶酪中分離出的大腸菌群的發生率為大腸杆菌(4/30, 13.3%);c . freundii(7/30, 23.33%), e . aerogenes (6/30, 20%), e . agglomerans (2/30, 6.67%), e .泄殖腔(2/30,6.67%),k .肺炎sub. spp。ozaenae(5/30, 16.67%);肺炎(3/30, 10%)。Moustafa, Zeinhom和Ahmed[18,19,20]記錄了大腸杆菌以外的大腸菌群。的發病率大腸杆菌在檢查的樣品中,與Hamid & El Owni[21]所記錄的一些現存的東西一致。這類奶酪的高汙染率可能是由於處理、運輸或儲存在被這類細菌汙染的地方或在奶酪加工過程中。這種類型的奶酪不含鹽,鹽的醃製過程在保存和作為風味增強劑方麵很重要,降低了奶酪[22]中的水分含量,抑製了有害微生物[23]的生長。

圖1:不同奶酪樣品中大腸菌群的發生率

圖1中的數據顯示,在檢測的硬奶酪(Ras或Roomy奶酪)中分離出的大腸菌群的發生率為大腸杆菌(3/30,10%),枸櫞酸杆菌屬diversus(2/ 30,6.67%),弗氏梭菌(3/ 30,10%),腸杆菌屬產氣菌(4/ 30,13.34%)、凝聚菌(1/ 30,3.33%)、大腸下水道(3/30, 10%),肺炎克雷伯氏菌亞種(4/30, 13.33%);肺炎sub. spp。肺炎(2/30, 6.67%)。Elessawy[24]在檢查樣本中記錄了類似的大腸杆菌發生率。類似的大腸菌群大腸杆菌可由Mohamed, Hassan和Sadek等人記錄[25-27]。拉斯奶酪的加工階段可能會將汙染風險降到最低,導致汙染水平較低,但可能是在運輸、儲存或由不清潔的處理人員處理的後期處理階段[28]。

抗生素耐藥大腸杆菌群:

圖(2-6)中得到的結果解釋了大腸菌群的抗生素耐藥性,包括大腸杆菌從牛奶和奶酪樣本中分離出來的。測試大腸菌群菌株,按順序排列c . diversus弗氏梭菌,陰溝腸杆菌,肺炎克雷伯菌sub. spp。肺炎而且大腸杆菌O111對AMC表現出抗性;山姆和AMC;AMC & CFP;AMC&TE和C、AMC、CFP&TE抗生素,對其他被測抗生素均表現出敏感和中等耐藥。汪等人[29]指出,檢查最多c . freundii分離株對慶大黴素、妥布黴素和氨曲南耐藥。結果表明,該菌株的易感率較低c . freundii氨基糖苷類和環丙沙星的含量明顯下降。Yagoub等人[30]宣稱腸杆菌屬從原料牛奶樣品中分離出的分離菌對青黴素、克林黴素、阿莫西林和氨苄西林具有廣泛的耐藥,而Farzana等人[31]則表明所測腸杆菌分離菌對萘啶酸、四環素敏感,對氯黴素幾乎無耐藥。克雷伯氏菌如Farzana et al.[31]所示,分離出的克雷伯菌對納利迪西酸耐藥,對氯黴素很少,而Chauhan et al.[32]表明,所測克雷伯菌分離株對亞胺培南、環丙沙星、呱拉西林/他唑巴坦聯合用藥和ciftazidime敏感。亞胺培南抗生素克雷伯氏菌sp是一種高度敏感的藥物。Nam等人[33]記錄了這一點弗氏梭菌,陰溝梭菌而且肺炎克雷伯菌分離株對阿米卡星、慶大黴素和呱拉西林有很強的抗菌活性,而利福平、頭孢黴素、頭孢唑林和氨苄西林對大多數被測細菌無效。Paneto等人調查了從生牛奶奶酪樣品中分離出的產毒素大腸杆菌的發生情況,並測試了其對某些抗菌藥物的敏感性,發現最常見的耐藥性是對頭孢黴素、萘啶酸、多西環素、四環素和氨苄西林,但都進行了測試大腸杆菌根據Aftab Uddin等人的記錄,從原料牛奶樣品中分離出的菌株對利福平和四環素的耐藥性為100%,對納利啶酸的耐藥性為50%,但對亞胺培南的敏感性為100%。[35]。薩拉姆[36]記錄了這一切大腸杆菌檢測分離株對11種抗生素的敏感性;氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、土黴素、四環素、多西環素、環丙沙星、恩諾沙星、新黴素、慶大黴素、紅黴素。對這類抗生素的耐藥性分別為50%、50%、7%、67%、67%、40%、23%、23%、23%、13%和100%。從過去幾年的情況可以明顯看出,一些菌株克雷伯氏菌腸杆菌屬而且枸櫞酸杆菌屬在幾項關於急性和慢性疾病的流行病學研究中,從兒童和成人的糞便和腸道內容物中分離出了鏈球菌。此外,某些成員枸櫞酸杆菌屬該菌曾被懷疑引起腸道感染。c . freundii在人類泌尿係和其他化膿性感染中發現了[37]。此外,大腸杆菌和可能的腸道病原體[10]之間有鬆散的聯係。肺炎克雷伯菌在上呼吸道和腸道中作為共生菌發生,可能與呼吸道卡他性疾病、鼻竇炎、結膜炎和人[38]肺炎有關。

圖2:磁化率的c . diversus某些種類的抗生素

圖3:磁化率的c . freundii對某些類型的抗生素

圖4:磁化率的大腸下水道對某些類型的抗生素

圖5:磁化率的k .肺炎sub. spp。肺炎某些種類的抗生素

圖6:磁化率的大腸杆菌O111: K58某些種類的抗生素

分離株的血清學分型大腸杆菌特性:

從表1中記錄的結果可以明顯看出,一些分離大腸杆菌菌株可以在血清學上分為O血清型111(3株),O119(2株),O55(一株)和O124(應變)。這些發現證實了Saudi和Moawad、Ahmed和salam和ElShinawy等人的發現[39-41]。大腸杆菌已被確定為引起腸炎和幾種胃腸外疾病的病原之一。此外,該生物被認為是人類和反芻動物[42]的病原體。近年來,人們非常關注大腸杆菌因為它作為一種真正糞便起源的生物體的重要性,可能存在相關的腸道病原體。此外,腸道致病性的公共衛生危害大腸杆菌被許多調查人員強調,因為它們涉及人類腸胃炎、嬰兒流行性腹瀉、兒童散發腹瀉以及食物中毒病例[43]。然而6種主要的致瀉劑大腸杆菌與食源性疾病有關;產腸毒素的大腸杆菌(ETEC),它負責產生熱不穩定毒素(霍亂樣毒素)和熱穩定毒素(腹瀉毒素)導致水樣腹瀉(旅行者腹瀉)。致腸病的大腸杆菌(EPEC)與嬰兒腹瀉、腸出血有關大腸杆菌這可能導致血性腹瀉,出血性結腸炎,溶血性尿毒症綜合征和血小板減少性紫癜。Enteroaggregative大腸杆菌(EaggEC),它們在組織細胞或玻璃上排成平行的一行,被描述為“堆疊的磚狀”,然後製作熱不穩定毒素,與溶血素和一種編碼的質粒有關,這種質粒可以穩定毒素,導致持續的水樣腹瀉,特別是在兒童中。Enteroinvasive大腸杆菌(EIEC),可能導致發燒和大量的水樣腹瀉,包括粘液和血痕。廣泛地附著大腸杆菌(DAEC),在一些研究中與腹瀉有關,但並不一致。

表1:分離株的血清學鑒定大腸杆菌檢查樣品。

總之,這項研究提供了有關埃及生乳奶酪中大腸菌群發病率的有意義的數據,隻是強調了在埃及生乳奶酪製備過程中需要實施嚴格的衛生措施。在這項研究中發現的最令人擔憂的趨勢是對抗生素耐藥性和潛在毒性的測定大腸杆菌菌株。這一發現使得對大腸菌群的持續監測成為識別食品生產中新出現的有害菌株的高度優先事項。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Elbagory AM, Hammad AM, Alzahraa, Shiha MA(2016)大腸菌群、抗生素耐藥大腸菌群和大腸杆菌埃及生乳中的血清型及一些生乳奶酪品種。堅果食品技術2(1):doi http://dx.doi。org/10.16966/2470 - 6086.114

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出版的曆史:

  • 收到日期:2016年1月13日

  • 接受日期:2016年2月02

  • 發表日期:08年2月2016年