摘要

背景:人類免疫缺陷病毒(HIV)感染可能改變針對牙周病細菌的抗體反應，增加HIV感染者患牙齦和牙周病的易感性。我們描述接受穩定抗逆轉錄病毒治療(ART)的hiv感染個體的口腔健康，並確定其與血清抗牙周病細菌抗體水平的關係。

方法:接受ART治療至少三個月穩定的艾滋病毒感染者被納入研究，並接受常規的牙科和牙齦檢查，包括牙周、牙齦和菌斑測量以及牙齒攜帶情況評估。采用棋盤格免疫印跡法檢測血清抗牙周菌IgG或IgM抗體，測定牙周菌抗體。

結果:40例hiv感染受試者:92.5%為男性，72.5%為白種人，CD4計數中位數為437.6細胞/mL。75%的研究參與者的HIV病毒載量無法檢測到。10%(4/40)的人群被診斷為牙周炎得分在2分及以上，37.5%(15/40)的人群被診斷為牙齦炎得分在2分及以上。抗直彎曲杆菌、嗜鉻碳酸細胞haga和微量Peptostreptococcus的抗體水平與牙齦炎評分的升高顯著相關(p值均<0.05)。

結論:高牙齦評分與抗三種牙周病細菌的高水平抗體之間的關係已被發現與臨床疾病相關。我們推測hiv相關口腔菌群失衡可能導致該人群牙齦和牙齒病理發展的更高風險。

關鍵字

艾滋病毒;Periodontopathic;細菌;抗體;口服;微生物群

簡介

人類免疫缺陷病毒(HIV)感染是牙齦和牙齒疾病的一個重要危險因素。牙齦和牙周炎和感染在hiv感染者中很常見，已經觀察到的患病率為49%的牙周炎，50.6%的中度牙周炎和9.5%的重度牙周炎[1,2]。[1,2]。牙齦炎和牙周炎通常是潛伏的和無痛的，是由微生物定植在牙菌斑的生物膜引起的。未經治療的牙齦炎會導致嚴重的牙周病和牙齒脫落。牙齦炎和牙周炎可為口腔病原體進入血流提供途徑，導致全身感染和炎症[3,4]。據報道，HIV會影響宿主對牙周病原微生物的免疫反應，並影響牙周炎[5]的發展。牙周炎在炎症中的作用尚不清楚，但假設它會增加非艾滋病共病的風險，如心血管疾病和胰島素抵抗。的確，與一般人群相比，hiv感染者發生炎症相關疾病的傾向可能更高。我們假設這些共病的風險在hiv感染者中更高，特別是在係統性免疫激活和牙周炎相關係統性感染之間的相互作用。

盡管抗逆轉錄病毒療法(ART)的出現大大降低了艾滋病毒感染者的死亡率，但艾滋病毒感染者口腔和牙周病的發病率持續上升[7,8]，盡管艾滋病毒的病毒學抑製作用[8,5]，但口腔菌群被推測是全身炎症的主要原因之一。血清免疫球蛋白抗體已用於牙周狀態[9]的分類和分析。牙周病細菌和宿主對細菌的免疫反應也被認為在早發型牙周炎[10]的發病機製中起著重要作用。HIV感染會影響抗體對牙周病細菌的反應，因為血清免疫反應降低可能增加HIV感染者對牙周感染的易感性[11,12]。事實上，HIV可能正在創造一種環境，導致某些類型的牙周病細菌大量繁殖，並增加了針對牙周病細菌的循環抗體水平。此外，牙周病細菌的增加可能是慢性係統免疫激活的原因，這可能導致艾滋病毒狀況的整體惡化[11,12]。

在抗逆轉錄病毒治療時代，缺乏報告艾滋病毒感染與牙齦和牙周病之間相互作用的研究，特別是關注在穩定抗逆轉錄病毒治療下艾滋病毒感染個體對牙周病細菌的抗體應答的研究。我們試圖描述在穩定的抗逆轉錄病毒治療中hiv感染者的口腔健康狀況和牙齦和牙周病的存在，以及它們與血清抗牙周病細菌抗體的關係。

方法

研究設計:本研究是一項橫斷麵、描述性、觀察性研究，評估接受抗逆轉錄病毒治療的艾滋病毒感染者的口腔健康狀況及其與血清抗牙周病細菌抗體水平的關係。40例18歲的HIV感染成人> ELISA證實在ART治療下至少3個月處於穩定狀態。這些人是通過夏威夷大學的門診艾滋病毒診所招募的。這項研究得到了夏威夷大學人類研究委員會的批準，並獲得了我們人群中所有參與者的知情同意。懷孕的女性被排除在研究之外，因為懷孕期間的口腔微生物群基本上是未知的。收集臨床資料，進行口腔檢查和分析，收集靜脈血，分離血清並保存在-80°C的等份中，直到用於下遊檢測。

口試:口腔臨床檢查包括以下程序:牙齒狀況，齲齒，口腔和血液標本的收集和儲存。記錄口腔內所有牙齒的牙齒狀態。每顆牙齒都被分類為健全的，腐爛的，填充的，缺失的，冠狀的，腐爛的牙根碎片，健全的牙根碎片和種植體。牙齒也被鑒定為恒牙或乳牙。口腔檢查、牙周測量和樣本均由一名持牌和持證牙醫完成。

牙周措施:使用人工牙周探針測量口腔內所有牙齒的牙周臨床參數。臨床參數包括;每顆牙齒上四個位點的斑塊評分(PL)使用0到3的刻度進行分配。無斑塊或染色=0，沉積覆蓋不到臨床冠麵三分之一=1，不足三分之二=2，超過三分之二=3。牙齦指數評分(GI)是一個0到3的刻度，每個麵部方麵的評分為正常=0，輕度炎症=1，中度炎症=2，或嚴重炎症=3。探測時出血(BoP)記錄在每個探測部位是否存在。每個象限在該象限探測後記錄。在每顆牙齒的6個部位(即中頜麵、麵部、雙頜麵、中舌、舌和雙舌)從遊離齦緣到溝底測量探測袋深度(PD)，並以毫米為單位記錄。在每顆牙齒的6個位置(即與PD相同的位置)，從CEJ到牙齦邊緣的整個毫米範圍內，評估了所有牙齒的水泥-牙釉質連接(CEJ)測量(衰退)。如果一個讀數落在探針上2毫米的標記之間，則記錄兩個讀數中較小的那個。如果齦緣與CEJ呈冠狀，則衰退記錄為正值。 If a reading fell between a two-millimeter marking on the probe, the lesser of the two readings was recorded. If the gingival margin was coronal to the CEJ, recession was recorded as a positive value. If the gingival margin was apical to the CEJ, recession was recorded as a negative value. CEJ measurements were taken at the same spot as the recorded sulcus depth (deepest point at each site). Finally, Clinical Attachment Level (CAL) was calculated as PD minus CEJ and will reflect the linear distance from the CEJ to the base of the sulcus at each site. CAL was calculated during data analysis.

牙周細菌血清抗體測定:分析血清以確定牙周病原體特異性抗體的水平，包括以下幾種牙周微生物:牙齦卟啉單胞菌、中間普雷沃菌、黑普雷沃菌、連翹擬杆菌、密螺旋體、成核梭菌、放線菌放線菌、直彎彎曲菌、腐蝕艾肯氏菌、嗜硒單胞菌、微胃鏈球菌、結真菌、細小細孔菌、赭酸碳酸胞菌、中間鏈球菌、口腔鏈球菌、血鏈球菌、納氏放線菌。來自金黃色葡萄球菌的蛋白A(Roche Diagnostics, Indianapolis IN)被用作免疫球蛋白結合底物。我們使用免疫分析法“棋盤格免疫印跡法”來評估列出的牙周生物的血清IgG或IgM抗體:首先，用微型blotter將蛋白A和不同的細菌懸液加載到硝化纖維素膜(Hybond EC L, Amersham Arlington Heights IL)上，並在4°C下培養一夜。然後從Miniblotter中取出膜，用TBST緩衝液中的5%脫水脫脂牛奶(Disco Laboratories, Detroit MI)阻塞非特異性結合位點兩次[10.1%吐溫20(西格瑪)在Tris鹽水緩衝液(20 mM)中，137 mM NaCl， (pH 7.6)]，然後用3% (v/v) H處理₂O₂在100%甲醇中，用500毫升TBST洗滌。稀釋純化的IgG或IgM (Sigma Immunochemicals, St Louis MO)作為標準，然後將血清樣本裝入微型吸墨紙，在室溫下孵育1小時。孵育後，吸取稀釋的血清樣品和免疫球蛋白標準品，用500ml TBST洗滌膜。

信號的檢測和量化:第二抗體是山羊抗人IgG(或IgM)過氧化物酶偶聯抗體Fab片段(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)。用稀釋後的抗體在室溫下孵育1小時，然後清洗。通過使用ECLWestern印跡檢測試劑(ECLWestern, Amersham Life Sciences)和捕獲化學發光的Lumi-Imager™工作站(Boehringer-Mannheim)完成檢測。然後使用LumiAnalyst™軟件，從純化的人類IgG或IgM製劑中獲得標準曲線，估計未知樣本(患者血清)的抗體濃度。該方法的靈敏度經過優化，可用於檢測約10 ng/ml的免疫球蛋白。

分析:牙齦和牙周評分作為分類變量進行評估。牙齦和牙周評分分為0分、1-2分和>分3組。連續變量以中位數及其四分位區間(Q1, Q3)表示，采用Kruskal-Wallis單向方差檢驗分析。用p<0.05的雙麵概率來確定統計學意義。所有統計分析均使用JMP統計程序(SAS Institute Inc.)進行。卡裏,NC)。

結果

40例受試者中，92.5%為男性，中位年齡55歲(Q1, Q3: 47.22, 61.97)。臨床和人口學研究特征見表1。研究對象的種族群體為72.5%的白人，15%的西班牙裔和12.5%的亞洲人。我們人群的CD4計數中位數為437.6細胞/毫米^3.(265, 640)。受試者接受NRTIs、NNRTIs和pi的抗逆轉錄病毒治療方案:分別為62.5%、45%和42.5%。在研究對象中發現的共病包括2型糖尿病(10%)和高血壓(25%)(表1)。在這些社會人口統計學變量之間，牙齦炎和牙周炎之間沒有統計學上的顯著關聯。

特征(n = 40)	N (%)
年齡中位數(年)。	55.235 (Min = 26.82 Max = 72.62)
性別男	37 (92.5%)
CD4細胞計數(cell /毫米3.）	437.6 (Min = 4 Max = 879)
牙齦的分數	0: 5 (12.5%) 1: 20 (50%) 2: 11 (27.5%) 3: 4 (10%)
斑塊分	0: 25 (62.5%) 1: 11 (27.5%) 2: 2 (5%) 3: 2 (5%)
並發症
高血壓	10 (25%)
糖尿病(2型)	4 (10%)
種族	白色29 (72.5%) 西班牙6 (15%) 亞洲5 (12.5%)
抗病毒治療
種轉錄	25 (62.5%)
NNRTIs	18 (45%)
π	17 (42.5%)
病毒載量
檢測不到(< 50拷貝/毫升)	30 (75%)
缺牙至少一顆(智齒除外)	27 (67.5%)
任何口腔損傷	10 (25%)
口袋深度至少4毫米	27 (67.5%)
與牙齦萎縮	40 (100%)
有出血或穿刺	40 (100%)
酒精使用	30 (90%)
煙草的使用	18 (45%)
使用毒品	23 (57.5%)

表1:臨床特點。

在口腔檢查中，37.5%的受試者有牙齦疾病，50%有牙齦菌斑(表1)。此外，隻有4例(10%)患者的疾病控製與預防中心(CDC)牙周炎評分在2分及以上，27.5%為1分，其餘62.5%為0分。除智齒外，缺牙患者占總人口的67.5%。25%的口腔病變被定義為可疑病變或情況，應該轉給牙醫。所有患者在探查牙齦時出血，並出現牙齦衰退(表1)。

在牙齦炎評分越高的受試者中，抗牙周病細菌抗體的多樣性越高(表2)直立性彎曲杆菌，赭曲碳細胞haga，而且消化鏈球菌屬微指令在牙齦評分較高的受試者中(圖1)直立性彎曲杆菌，赭曲碳細胞haga，而且消化鏈球菌屬微指令齦評分最高組明顯高於齦評分最低組(p值均<0.05)。牙周病細菌抗體水平與牙周評分高的牙周病細菌抗體水平無顯著相關性。病毒載量、CD4計數或CD4/CD8與牙齦和牙周評分之間也沒有差異。

圖1:病原體抗體的水平。圖示針對三種致病菌的不同抗體水平直立性彎曲杆菌，赭曲黴碳酸胞菌,消化鏈球菌屬微指令在不同牙齦評分的研究參與者中。牙齦評分分為0、1、>2。

細菌Spp。	免疫球蛋白水平 （％）			P
	牙齦 分數0	牙齦分數1	牙齦 分數≥2
Aggregatibacteractinomycetemcomitans	0.02	0.11	0.87	厚
Actinomycesviscosus	0.69	0.15	0.16	.14點
芽孢杆菌梭杆菌屬	0.15	0.56	0.29	點
Capnocytophaga ochracea *	0.05	0.16	0.79	.04點
彎曲杆菌腹直肌*	0.04	0.27	0.69	.04點
Enterococcuscasseliflava	0.30	0.27	0.43	票價
梭菌屬Nucleatum	0.11	0.70	0.19	23)
Helicobater幽門	0.01	0.01	0.98	0。
Porphyromonas gingivalis	0.34	0.35	0.31	.76
Peptoniphilus indolicus	0.09	0.23	0.68	點
消化鏈球菌屬微指令*	0	0.13	0.87	02
普氏菌nigrescens	0.32	0.37	0.31	總收入
Streptococcusinfantis	0	0.27	0.73	0。
月形單胞菌屬noxia	0.43	0.21	0.36	23)
鏈球菌Oralis	0	0.32	0.68	。08
唾液鏈球菌	0.64	0.32	0.04	.37點
Treponemadenticola	0.39	0.35	0.26	.68點
Variovorax脈	0.37	0.51	0.12	。8

表2:抗牙周病細菌的IgG抗體水平。

討論

這項口腔健康概況的橫斷麵研究表明，牙齦炎在抗逆轉錄病毒治療穩定的艾滋病毒感染者中很常見。在我們的人群中，牙齦炎的發生率高於早期或未接受ART[13]治療的艾滋病毒患者。相反，牙周炎的發病率低於先前報道的[14]。這種從牙周炎到較輕牙齦炎的轉變可能反映了抗逆轉錄病毒治療對口腔菌群和免疫反應的影響。宿主細胞和體液免疫反應可能在牙周病進展中發揮重要作用[2,7,8,15]。先前的研究報道，以低CD4計數為標誌的hiv相關免疫中斷與嚴重牙周炎[16]的發展相關。我們研究的大多數參與者都是穩定的抗逆轉錄病毒治療和病毒抑製，這表明抗逆轉錄病毒治療在減少艾滋病毒感染者嚴重牙周病的發展中發揮了重要作用。這一結果與加拿大Nobre ÁVV等[17]的研究一致，該研究顯示，長期使用抗逆轉錄病毒治療可減輕艾滋病毒感染者慢性牙周炎的臨床嚴重程度。從牙周炎到牙齦炎的轉變可能表明需要更積極的管理和更早的口腔健康管理。

我們利用免疫棋盤格試驗來評估血清抗體對牙周菌群[18]的反應。從血清抗牙周病細菌抗體水平分析中，我們發現牙齦評分越高的受試者抗牙周病細菌抗體的多樣性越高。不同牙齦評分受試者的多樣性差異提示，隨著牙齦疾病的發展，某些致病菌的流行程度越來越高[8,17]。我們發現較高的牙齦評分與較高的抗齲水平有顯著的相關性直彎杆菌，微胃鏈球菌，而且Capnocytophaga ochracea抗體。彎曲杆菌腹直肌是一種常與慢性牙周炎有關的病原體[9,12]。抗這些細菌抗體的存在及其與牙齦評分的相關性可能表明，這種細菌的豐度增加，導致這些受試者牙齦炎的發展。而Capnocytophaga ochracea這種革蘭氏陰性厭氧菌在牙周炎中不常作為病原體出現，它常存在於人的口腔中，有助於牙菌斑的形成[8,9]。這種細菌抗體水平的升高與高牙齦評分之間的相關性可能暗示抗體對Capnocytophaga ochracea可能是牙周病的早期跡象，可能需要更積極的口腔護理，以防止更嚴重的牙周病的發展。消化鏈球菌屬微指令也是成人牙周炎的公認病原體。該菌的高水平抗體的存在及其與高牙齦評分的相關性表明該菌是我們研究中可能引起牙周疾病的潛在病原體之一[10,16,19]。

我們的研究存在一些局限性:這是一項橫斷麵研究，沒有HIV陰性對照組，研究參與者數量有限。此外，本研究純粹基於細菌抗體水平，可能不能反映真實的細菌區係微環境。盡管存在這些局限性，我們的研究結果表明，在接受抗逆轉錄病毒治療的hiv感染者中，存在對牙周病細菌的抗體應答，可能限製牙齦炎向牙周炎的演變。

高牙齦炎評分與抗三種牙周病細菌的高水平抗體之間的關係已被發現與臨床疾病相關。我們推測HIV相關口腔菌群失衡可能導致該人群牙齦和牙齒病理發展的更高風險。

確認

我們感謝已故的Lynette E. Kagihara博士的幫助，他幫助起草了研究方案，並為研究進行了牙科測量和評估。該研究由艾瑪女王基金會和美國國立衛生研究院資助的R01HL095135、RMATRIX (U54MD007584)和U54MD007601提供資金和臨床研究支持。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:SahBandar I, Terakubo J, Pattison RJ, Park E, Oishi MK，等(2020)慢性HIV感染中的抗牙周病抗體應答。J HIV艾滋病6(2):dx.doi.org/10.16966/2380-5536.178

版權:©2020 SahBandar I等人。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2020年10月20日,

接受日期:2020年11月24日,

發表日期:2020年11月30日