最近，我們發現未經治療的HIV感染患者外周血中表達絲氨酸蛋白酶顆粒酶B (GrB)的調節性B細胞計數較高，且無穿孔素(穿孔素)(抓住細胞)[1]。重要的是,這些抓住細胞能直接調節T細胞的增殖和存活嗎體外而且,體內．其作用機製包括不依賴穿孔素的grb向T細胞轉移和T細胞中T細胞受體ζ-鏈的grb依賴性降解[1,2]。

已知的GrB受體不依賴於穿孔素，是甘露糖-6-磷酸受體(M6PR, CD222)，已被證明可介導GrB的攝取和M6PR表達靶細胞的調控[3,4]。最近一項研究李斯特菌-感染小鼠證明細胞毒T細胞上M6PR的差異表達與它們的生存和增殖能力[5]直接相關。因此，M6PR似乎代表了全身感染後T細胞擴張和記憶T細胞形成的重要檢查點。

在這裏，我們報告了我們目前的發現，證實了這種機製在未經治療的艾滋病毒感染的人類患者中。由於在穿孔素缺失的情況下GrB的細胞攝取可以以M6PR依賴的方式發生[3,4]，我們測試了未治療的HIV患者的T細胞上M6PR的表達，並將其與健康對照組進行比較。這些實驗表明,M6PR表達式從艾滋病患者T細胞的T細胞明顯高於健康對照組(圖1和表1)。此外,體外轉染孤立的T細胞的健康受試者與艾滋病毒直接證實艾滋病毒觸發upregulation M6PR的T細胞(圖2)。因此我們的數據表明,艾滋病患者的記憶T細胞室缺陷可能至少部分是由於M6PR的T細胞的表達升高,與這些細胞對grb介導的凋亡和生長停滯的高度敏感性有關。

表1:HIV患者和健康對照組的臨床、病毒學和免疫學特征檢測GraB細胞和表達cd222的CD4細胞⁺T細胞。
縮寫:F:女性;M:男性;伽馬線暴:Granzyme B;MFI:中位熒光強度;廈門市,不可用。

圖1:來自未經治療的HIV的T細胞⁺與健康個體的T細胞相比，患者表達了高水平的M6PR。從4例未治療的HIV患者和4例健康對照者中分離PBMC，並用CD3、CD4、CD8和M6PR (CD222)熒光標記抗體進行染色。隨後,CD4⁺（圖1一個)和CD8⁺（圖1 bT細胞用流式細胞術分析。人外周血粒細胞作為CD222表達的陽性對照。直方圖顯示了四個具有相似結果的代表性實驗中的一個M6PR表麵表達(左圖)。柱狀圖顯示了M6PR的平均百分比⁺T細胞(中間圖)和M6PR中位熒光強度(MFI)值(右邊圖)來自4個獨立實驗。誤差條為SEM， *表示p<0.05， **表示p<0.005。

圖2:轉染野生型NL4-3 HIV後，來自健康個體的T細胞上調甘露糖-6-磷酸受體(M6PR)。CD4⁺從3個健康個體中分離T細胞，用CD3/CD28 dynabead和IL-2刺激3天。用NL4-3野生型(WT)或模擬轉染的細胞在37°C下洗滌並轉染6小時。轉染3天後，細胞被熒光標記的抗M6PR (CD222)抗體或同型對照染色。然後用流式細胞術分析T細胞。用內部ELISA (Abcam)檢測培養上清的p24蛋白水平。直方圖顯示了三個具有相似結果的代表性實驗中的一個M6PR表麵表達(左圖)。柱狀圖顯示M6PR中位熒光強度(MFI)值(中間麵板)和p24水平(右麵板)。誤差條為SEM， *表示p<0.05。

總之，我們的研究結果支持當前的觀點，即在感染細胞內病原體(如病毒或細胞內細菌)後，激活的T細胞對其細胞表麵[5]上的M6PR進行了差異調節。這種不同的M6PR表達不僅可以解釋調節性T細胞如何在感染後啟動效應T細胞收縮階段，以及在沒有穿孔素的情況下表達GrB的其他免疫細胞群，如漿細胞樣樹突狀細胞或GraB細胞[2,6,7]可能會以M6PR和GrB依賴的方式直接抑製T細胞的擴張(圖3)。通過藥理學手段調節T細胞上的M6PR可能是一種有前景的新方法，可以在包括HIV感染在內的不同傳染病中調節T細胞介導的免疫。

圖3:HIV患者T細胞上的甘露糖-6-磷酸受體(M6PR, CD222)介導顆粒酶B分泌調節B細胞對其的抑製(抓住細胞)．在HIV感染過程中，CD4細胞的T細胞受體(TCR)⁺通過HIV蛋白直接刺激T細胞Nef，沒有同時共刺激CD28。與完全激活的T細胞(左圖)相反，這種未完全激活的T細胞分泌IL-21，但幾乎不表達CD40L，導致顆粒酶b分泌的誘導抓住細胞而不是漿細胞(右側麵板，版權2015。美國美國免疫學家協會)．在HIV感染過程中，通過T細胞上CD222的同時上調，T細胞對外源性顆粒酶B的細胞吸收被強烈增強，導致TCR ζ- ζ鏈(放大麵板)的斷裂增加。TCR ζ鏈水平越低，這種T細胞的增殖能力越低。通過外源性添加CD40L多聚體可以打破這一惡性循環，CD40L多聚體可以抑製HIV感染過程中B細胞/T細胞相互作用不完全後GraB細胞的生成。

參考文獻

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引用:Kaltenmeier CT, Gawanbacht A, Hotter D, Kirchhoff F, Schrezenmeier H, et al.(2016)甘露糖- 6-磷酸受體，一種新的T細胞擴增檢查點，在未經治療的HIV+患者的T細胞上高水平表達。J HIV艾滋病2(3):doi: http://dx.doi.org/10.16966/2380-5536.125

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出版的曆史:

收到日期:2015年2月05

接受日期:2016年4月27日

發表日期:2016年5月03