摘要

背景/目的:甲基鈷胺鼻噴霧劑(NasoB12^®， Troikaa, India)最近被開發出來，以克服目前可用的治療途徑的缺點。本研究旨在比較甲鈷胺素鼻噴霧劑與肌肉注射的藥代動力學、安全性和耐受性。

主題/方法:這是一項隨機、單劑量、開放標簽、雙向交叉的生物利用度比較研究，研究對象為18名健康誌願者。參與者分別被給予500微克甲基鈷胺素通過鼻腔噴霧劑(250 McG /0.05 ml，每個鼻孔一次刺激)或100 McG /0.2 ml甲基鈷胺通過肌內注射。在每個研究期間收集連續的血液樣本，在給藥後測量血中B12濃度。觀察最大藥物濃度(T_馬克斯)，最大血漿濃度(C_馬克斯)和濃度-時間曲線下麵積(AUC)進行比較。

結果:與肌肉注射相比，鼻噴霧劑對維生素B12的吸收數據顯示，平均[T_馬克斯0.2小時，注射時間為1.15小時。在沒有劑量歸一化的情況下，鼻腔噴霧劑的生物利用度與肌內注射相似(AUC比為104.77%)_0-tAUC為101.85%_0-inf)．經劑量歸一化後，比較鼻內噴霧的生物利用度與肌內注射約20%。高C_馬克斯鼻內噴霧劑與未歸一劑量的肌肉注射相比(197.49%);然而，劑量歸一化後_馬克斯是39.50%。安全性評價表明，兩種治療方法均具有良好的耐受性。

結論:經鼻內使用甲基鈷胺素鼻噴霧劑可充分吸收維生素B12，可作為安全有效的替代目前的選擇。

簡介

維生素B12 (B12)也被稱為鈷胺素，是體內主要反應的輔助因子，這些反應對DNA合成、紅細胞形成和神經功能[1]至關重要。B12缺乏可能由飲食攝入不當、生物利用度問題或吸收不良等因素引起[2,3]。

B12缺乏的傳統治療方法是口服製劑，最好是反複肌肉注射鈷胺素。肌內注射疼痛、不方便且常伴有不良反應(如膿腫形成、紅斑和血腫)[4,5]。此外，注射藥物的管理需要衛生保健專業人員，這增加了衛生保健係統的經濟負擔。這可能會影響患者的依從性並導致停止治療[6,7]。每日口服維生素B12，依賴於內因子(IF)，[8]會受到年齡增長、長期伴隨二甲雙胍或抗酸治療、胃手術和惡性貧血患者的阻礙[1,9,10]。

鼻腔給藥途徑由於其易於獲取、表麵積大、血管化程度高、內皮基膜多孔、有可能繞過第一次代謝和可能較高的全身生物利用度而具有吸引力與口腔途徑[11,12]。鼻內配方克服了肌肉內配方的缺點:它無痛，自我給藥，提高了依從性，消除了衛生專業人員給藥的需要，防止注射部位並發症，並降低了治療的總成本[13]。

在不同人群中，已經研究了鼻腔給藥B12的途徑[6,14,15]。氰鈷胺鼻噴霧劑已獲得監管部門批準。然而，根據氰鈷胺鼻噴霧劑標簽上的藥代動力學數據，該藥並不用於治療惡性貧血患者的B12缺乏，而是用於治療後一個月的維持治療，並在100 mcg肌肉注射維生素B12治療後緩解，也用於其他缺乏症[16]的補充。

氰基鈷胺素必須被酶轉化為兩種代謝活性輔酶形式之一(即甲基鈷胺素和5-脫氧腺苷鈷胺素)才能在體內發揮作用。營養缺乏和酶的缺陷會降低人體合成活性形式[17]的能力。由於活性形式甲基鈷胺素繞過了形成功能性形式所需的幾種酶促反應，與氰基鈷胺素[17]相比，甲基鈷胺素更好地保留在體內，因此謹慎地考慮甲基鈷胺素代替氰基鈷胺素治療維生素B12缺乏症。

考慮到鼻內劑型相對於其他現有劑型的配方優勢，開發了一種新型的鼻內甲基鈷胺噴霧(500微克/0.1毫升)(Troikaa製藥有限公司)。據我們所知，目前的I期研究是第一個評估新型甲基鈷胺素鼻內噴霧劑與目前上市的甲基鈷胺素肌肉注射劑的安全性和藥代動力學的人體研究。本研究在健康受試者中進行隨機、單劑量、開放標簽、交叉研究。

方法

該研究的臨床部分在Raptim研究有限公司進行。該研究得到了獨立倫理委員會IEC的批準，並遵照ICH(國際協調會議)E6《良好臨床實踐指南》和世界醫學協會《赫爾辛基宣言》的要求進行。

選擇的主題

18名健康成年男性受試者，年齡在18至45歲之間，體重指數在18.5至24.9公斤/米之間²參與研究。所有受試者在入組前都提供了參與研究的書麵知情同意，並可在研究期間的任何時間自由退出。隻有當受試者的血清總B12水平在基線實驗室評估的200 - 900 pg/ml範圍內，並通過血液學測試、生物化學、尿液分析和心電圖與臨床結果相關的其他正常實驗室值時，才納入研究。排除鼻息肉、流鼻涕、鼻塞、變應性鼻炎、呼吸道感染和已知對甲基鈷胺過敏的受試者。所有受試者均符合研究方案中規定的納入和排除標準。

研究設計和給藥

這是一項1:1隨機、單劑量、開放標簽、雙向交叉的生物利用度比較研究。18個受試者的樣本量被認為足以確定測試產品和參考產品之間的顯著配方差異。兩種處理之間保持15天的衝洗期。該研究於2014年1月8日至29日進行。受試者在給藥前大約12點被安置。根據隨機化計劃(由SAS生成^®軟件(SAS Institute Inc.， USA)(9.2版本)，每個受試者在每段時間內禁食至少10.00小時後，接受0.1 mL (500 mcg)測試鼻噴霧劑(250 mcg/0.05 mL在每個鼻孔)或0.2 mL (100 mcg)甲基鈷胺素(日本Eisai公司生產的甲基鈷胺)參考IM注射。

安全

在研究期間，對所有受試者進行安全性和耐受性評估。這包括生命體征、健康狀況、局部耐受性、心電圖、生物化學、血液學和尿檢。

化驗B12的血液樣本:分別於-10.00、-6.00、0.00小時(基線給藥前樣本)和給藥後0.16、0.25、0.33、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.50、3.00、4.00、6.00、8.00、12.00、24.00、48.00、72.00、96.00和120.00小時在預先標記的EDTA抽真空器中采集血液樣本。血液樣本以4000轉/分離心，在8°-10°C下分離血漿10分鍾。離心後分離血漿樣品，轉移到各自預先標記的琥珀色epppendorf管中，分成兩個等分。

血漿中維生素B12的測定:血漿樣本的總維生素B12濃度測定采用經過驗證的電化學發光法，使用的儀器是APL臨床實驗室和研究有限公司的Roche Cobas e411儀器。使用羅氏診斷公司的經過驗證的校準範圍為30- 2000 pg/ml的電化學發光免疫分析試劑盒進行分析。本研究對該試劑盒進行了進一步驗證，將其分析範圍擴大到15,000 pg/ml。濃度低於定量限(BLQ)被認為是“零”的所有藥代動力學和統計評價。分析人員在完成分析之前不能訪問隨機化時間表。

藥代動力學和統計分析:主要藥代動力學參數C_馬克斯, AUC_0-t, AUC_0-inf二次PK參數t_½K_埃爾和T_馬克斯采用WinNonlin®professional(5.3版本)的非分區方法計算。B12是一種內源性化合物，因此進行了有基線校正和無基線校正的藥代動力學分析。基線校正是通過從隨後的劑量後水平減去劑量前平均水平來完成的。這是評價B-12從飲食和內源性擾動的貢獻是可取的。

本研究中兩種治療方法的總劑量相差5倍，且給藥途徑不同。因此，藥代動力學參數如C_馬克斯, AUC_0-t和AUC_0-inf預測在相同劑量下的相對生物利用度。

使用SAS係統(SAS institute USA，版本9.2)對基線校正後劑量歸一化和非歸一化數據進行統計分析。對對數變換後的藥代動力學參數C進行雙側方差分析_馬克斯, AUC_0-t和AUC_0-inf(α=0.05)，以確定試驗品與參考品之間的差異。非變換T的非參數分析_馬克斯使用Wilcoxon符號秩檢驗。

結果

受試者人口統計和性格

18名符合選擇標準的[18]受試者參與了研究。共有15名受試者完成了兩期研究。兩名受試者在第二階段沒有向研究機構報告，因此退出了研究，一名受試者在第二階段給藥前因個人原因退出。因此，我們考慮了15名完成研究的受試者的數據進行分析。研究人群的基線人口統計數據見表1，受試者傾向見圖1。

圖1:研究流程圖。

	年齡(年)	體重(公斤)	身高(厘米)	BMI (kg / m2)	性別	比賽
平均數±標準差	29.8±5.8	64.2±7.3	170.0±5.1	22.2±2.0	男性	亞洲
中位數	29.0	63.0	170.0	22.7

表1:受試者基線時的人口學特征(N=18)。

安全性和耐受性

兩種治療方法(鼻腔噴霧劑和IM注射)均耐受良好。在本研究中沒有報道嚴重的不良事件。

在本研究的第I期，一名受試者在使用鼻噴霧劑後報告了一個不良事件(頭暈)。問題在當天發病後10分鍾內得到解決。不良反應較輕，並判斷可能與研究藥物有關，對受試者進行監測，直到不良反應消除。

研究後兩名受試者的臨床實驗室值顯示，與研究前值相比，膽紅素水平直接升高;這些不良事件被認為是輕微的，並判斷可能與所使用的研究藥物有關。

一名受試者在研究後血清B12水平較研究前有所下降。該不良反應是輕微的，並被判斷為與所使用的研究藥物無關。對所有受試者進行隨訪，進行安全性評價。隨訪結果在可接受範圍內。

所有參與研究後安全評估的受試者的生命體征或心電圖記錄均無臨床顯著發現。研究中沒有報道嚴重不良事件(SAE)，包括任何鼻道特異性的SAE。因此，測試產品和參考產品在安全性方麵具有可比性。

藥物動力學

兩種治療的平均血漿B12濃度與時間分布如圖2所示。

圖2:在給藥(鼻噴霧劑)和參照品(IM注射)後，總維生素B12的平均血藥濃度時間曲線沒有基線校正。
插圖:總維生素B12的平均血漿濃度時間分布至試驗(鼻噴霧劑)和參照品(IM注射)後8小時，沒有基線校正。

測試品(鼻內)和參考品(肌內)的平均±SD基線血漿B12水平分別為396.14±98.66 pg/ml和368.01±55.83 pg/ml

鼻內甲基鈷胺噴霧可使濃度峰值提前，平均濃度為T_馬克斯在IM注射甲基鈷胺後0.2小時，而在1.15小時。

表2總結了基線校正和劑量歸一化兩種治療方法的藥代動力學參數。

藥代動力學參數	沒有基線校正		與基線校正
	測試產品平均值±SD	參考產品均值±SD	測試產品平均值±SD	參考產品均值±SD
C馬克斯(pg / ml)	19779.47±6726.28	10263.53±3818.40	19383.32±6766.21	9895.52±3816.05
CmaxDN(pg / ml)	39.56±13.45	102.64±38.18	38.77±13.53	98.96±38.16
AUC0-t(pg *人力資源/毫升)	123399.31±31342.86	114320.43±20921.10	75533.03±29739.19	70905.39±18740.95
AUC0-tDN(pg *人力資源/毫升)	246.80±62.69	1143.20±209.21	151.07±59.48	709.05±187.41
AUC0-inf (pg *人力資源/毫升)	243363.97±120348.80	262529.22±77288.93	84243.44±29729.80	86604.67±31352.09
AUC0-inf DN(pg *人力資源/毫升)	486.73±240.70	2625.29±772.89	168.49±59.46	866.05±313.52
T馬克斯(人力資源)	0.20±0.06 0.16#	1.15±0.69 1.00#	0.20±0.06 0.16#	1.15±0.69 1.00#
t1／2(人力資源)	164.11±162.6	209.13±98.57	49.54±37.88	65.19±37.02
K埃爾(人力資源1)	0.0118±0.0111	0.0048±0.0053	0.0235±0.0151	0.0206±0.0251

表2:比較500 μ g試驗(鼻噴霧劑)和100 μ g參比(IM注射液)的藥代動力學參數。
AUC:血漿濃度-時間曲線下麵積;AUC_0-inf-血漿濃度下麵積與從時間0到∞的時間曲線;C_馬克斯-最大血漿濃度;T_馬克斯，時間到血漿中觀察到的最大藥物濃度_1／2消除半衰期;K_e-消除速率常數;歸一化至甲基鈷胺1微克劑量。^＃中位數

表3總結了劑量歸一化和非歸一化數據的幾何最小二乘均值(%)、90% CI和受試者變異性內的比值。

藥代動力學參數	幾何最小二乘均值比(%)	90%可信區間	Intrasubject簡曆(%)
沒有劑量歸一化
C馬克斯	197.49	160.48 - -243.05	32.24
AUC0-t	104.77	87.56 - -125.37	27.70
AUC0-inf	101.85	82.42 - -125.86	32.91
與劑量歸一化
C馬克斯	39.50	32.09 - -48.61	32.24
AUC0-t	20.95	17.51 - -25.07	27.70
AUC0-inf	20.37	16.48 - -25.17	32.91

表3:統計分析總結(n=15)。The ratio of geometric least square means (%), 90 % CI and within subject variability for both dosenormalized and non-normalized data.

劑量歸一化前，鼻腔噴霧劑和IM給藥的B12總暴露量相似，AUC的幾何最小二乘檢驗/參考比分別為104.77%和101.85%_0-t和AUC_0-inf,分別。然而，經幾何最小二乘檢驗/參考比為197.49%的C_馬克斯．

經劑量歸一化處理後，鼻噴霧劑的生物利用度較IM注射液約為20%，其AUC的幾何最小二乘檢驗/參考比分別為20.95%和20.37%_0-t和AUC_0-inf,分別。此外，與IM注射相比，鼻噴霧劑給藥後血漿中B12的平均最大濃度約為40%，幾何最小二乘檢驗/參考比為39.50%_馬克斯．

討論

這是一項隨機、單劑量、開放標簽、交叉生物利用度比較研究，旨在確定新型甲基鈷胺素鼻內噴霧劑與甲基鈷胺素IM注射液的安全性和生物利用度比較。我們的研究代表了甲基鈷胺素通過鼻腔途徑在健康誌願者體內的首次人體實驗結果。

本研究中甲基鈷胺鼻噴霧劑的B12劑量為500 mcg, IM注射液為100 mcg，這與Nascobal®鼻噴霧劑的研究一致，鼻劑型使用500 mcg, IM注射劑[16]使用100 mcg，因此可以很容易地比較兩種鼻劑型的結果。考慮基線校正數據，因為它能更準確地比較配方的性能。

本研究發現甲基鈷胺鼻噴霧劑的生物利用度與肌肉注射相當;但劑量歸一化後發現為~20%。據報道，商業口服B12片的生物利用度較低(~2%)。由於目前的甲基鈷胺素鼻腔製劑具有較高的生物利用度，與口服治療相比，它可能導致更快和可靠的B12缺乏症治療。此外，與肌肉注射相比，它很方便，不需要衛生保健專業人員進行管理。因此，新型甲基鈷胺胺鼻噴霧劑可作為口服和IM製劑的替代品，用於治療維生素B12缺乏。

現有文獻表明，氰基鈷胺素和羥鈷胺素鼻腔製劑(相對於肌注)的相對生物利用度分別估計為2-6.1%[16,19]和2-5%[15]。因此，這種新型甲基鈷胺素鼻噴霧劑的相對生物利用度比以前報道的高。

T_馬克斯本研究觀察到12±3.6 min(0.20±0.06小時)比氰鈷胺鼻噴霧劑(1.25±1.9小時)、[16]和羥鈷胺鼻配方[15](35±13分鍾)快。

進一步，對應的參數C_馬克斯反映了我們研究中觀察到的吸收程度為19,383 pg/mL，而氰鈷胺素和羥鈷胺素鼻腔製劑分別為758 pg/mL[16]和1,716 pg/mL(來源於1900 pmol/L, 750 mcg劑量)[15]。這表明甲基鈷胺素鼻用新配方的吸收率高於已有記錄的B12的其他鼻用配方。

肌肉注射100微克劑量的氰鈷胺用於治療B12缺乏。基線修正C_馬克斯我們在IM注射100 mcg甲基鈷胺後觀察到的AUC值與文獻[20]中使用100 mcg IM注射氰基鈷胺觀察到的AUC值相當。由於甲基鈷胺素鼻噴霧劑(500微克)的生物利用度與治療劑量(100微克)IM注射的生物利用度相似，它可能是治療維生素B12缺乏的另一種選擇。此外，在使用500 mcg甲基鈷胺素鼻噴霧劑48小時後觀察到的基線校正平均濃度為211.14±76.69 pg/mL(對應於B12水平從396.14±98.66上升到624.85±145.50 pg/mL)。這表明，隔日給藥方案可能足以糾正B12水平低。給藥5天後觀察到的基線校正平均濃度為114.42±51.58 pg/mL(對應B12水平從396.14±98.66上升到508.08±96.50 pg/mL)。這表明每周服用一劑可以在校正後保持足夠的B12水平。這些劑量隨後在103名維生素B12缺乏患者的臨床試驗中進行了評估(臨床試驗注冊:CTRI/2015/06/005952)。

甲基鈷胺素的安全性已得到證實，在世界許多地區，500微克的IM/IV注射劑量已得到批準。這在我們的生物利用度研究中也得到了支持，單劑量鼻腔噴霧劑和IM注射都被發現具有良好的耐受性。

結論

新型甲基鈷胺500 mcg/0.1 ml鼻腔噴霧劑無痛、自我給藥、耐受性好、安全，鼻吸收快，生物利用度與100 mcg IM注射液相似。因此，它可以為目前維生素B12缺乏的口服和注射治療方案提供一種有吸引力的替代方案

宣言

資金

本研究由Troikaa製藥有限公司資助。

臨床試驗注冊，CTRI號CTRI / 2015/04/005687。

的利益衝突

作者聲明沒有利益衝突。資助者在研究的設計中沒有任何作用;在數據的收集、分析或解釋中;在撰寫稿件時，或在決定發表結果時。

倫理批準

同意參加

資料來源:請聯係通訊作者。

代碼的可用性

不適用

同意發表和作者投稿

作者的貢獻

概念化，方法論，研究行為，形式分析，所有數據的獲取，數據的驗證和解釋:Dave H.所有作者都已閱讀並同意手稿的出版版本。

鳴謝

三佳製藥有限公司的研究產品和支持。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Dave H, Agarwal V, Maseeh A, Patel KR(2021)新型甲基鈷胺素鼻噴霧劑與肌肉注射:一項隨機、交叉比較生物利用度研究。內分泌代謝紊亂雜誌7(1):dx.doi.org/10.16966/2380-548X.171

版權:©2021 Dave H，等人。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2020年12月15日

接受日期:2021年1月11日

發表日期:2021年1月19日