摘要

目的:由於位於配體結合域的SF1基因突變在46,xy受試者中與廣泛的表型譜相關，因此這些變異的功能和結構表征非常有趣。本研究的目的是評價兩個非相關的46,XY性發育障礙(DSD)指數患者的臨床表型、激素模式和分子研究(遺傳、功能數據和蛋白質結構分析)。

方法:進行臨床特征、基因組DNA測序分析、蛋白質預測軟件研究和蛋白質結構分析，並對突變進行功能表征。

結果:兩個指數型DSD患者表現出相似的表型，但家族1的幾個感染成員表現出不同的表型。在家族1中發現了先前報道的雜合子錯義點突變(p.Arg313His)，而在家族2中檢測到一個新的雜合子錯義點突變(p.Ser303Arg)。這兩種突變都被預測為“可能具有破壞性”。在兩種細胞係中使用兩種不同的啟動子研究了SF1突變體p.Arg313His和p.Ser303Arg的轉錄活性，顯示出明顯的轉激活活性降低。結構分析顯示了兩種突變體之間的差異，如受體主幹的靈活性、配體周圍的三級結構和AF-2結構域的變化。

結論:SF1的其中一個配體結合域突變在家族成員間表現出表型異質性，而這兩個突變在青春期前表型、損傷預測和轉錄活性實驗降低方麵表現出相似性，但在結構後果預測方麵存在顯著差異。最後，本研究強化了46例XY型DSD患者臨床表型的廣泛變異性的概念。

關鍵字

Steroidogenic因子- 1;SF1;NR5A1基因;小黑裙突變;46, XY DSD

簡介

類固醇生成因子-1 (SF1/AD4BP/FTZF1)在調節腎上腺和生殖器官分化中起關鍵作用。SF1基因(NR5A1)是位於9q33染色體上的常染色體基因，是核受體亞家族第5亞家族A[1]群的成員1。它擴展了超過30kb的基因組DNA，由一個非編碼外顯子(I)和六個編碼外顯子(II到VII)組成。

該蛋白由461個氨基酸組成，包括包含兩個鋅指的dna結合域(DBD)、包含第一個功能激活域(AF-1)的鉸鏈區、包含第二個功能激活域(AF-2)的12個螺旋結構的配體結合域(H1-H12)和附屬區[2]。在SRY之前，它就在未分化的性腺中表達，對睾丸的測定和分化是必要的。SF1蛋白在類固醇原性組織中高度表達，如性腺、腎上腺和胎盤，並調節幾乎所有與這一過程相關的酶。它也表達在腹內側下丘腦核和垂體促性腺激素中，在中樞神經係統[3]中具有相關的生理作用。

純合子缺失小鼠(Nr5a1−/−)具有腎上腺和性腺發育不全、XY核型中持續Müllerian結構、部分促性腺功能減退、以及其他特征，如脾功能減退、腹內側下丘腦異常和晚發型肥胖[4,5]。

據報道，在人類中，NR5A1突變可導致46,XY和46,XX性腺發育不良，伴或不伴腎上腺衰竭[6-8]。SF1功能的可變損失與廣泛的表型譜相關，表明SF1劑量是關鍵。到目前為止，約有81例患者描述了NR5A1基因蛋白功能突變的損傷，其臨床表型很大程度上是可變的，包括女性生殖器、輕度陰蒂肥大、孤立性尿道下裂、無排卵甚至正常男性生殖器伴有不孕[6,9]。在46例XX患者中，NR5A1突變與不同的表型相關，包括原發性和繼發性閉經、過早絕經和卵巢儲備減少，但保留了生育能力[7,8,10]。

我們報告了兩位不相關的46,XY, DSD指數患者及其受影響的家庭成員的臨床表型、激素模式和分子研究(遺傳、功能數據和蛋白質結構分析)。發現了一種新的雜合子NR5A1基因突變c.909G>A (p.Ser303Arg)和一種之前描述過的[8,10]雜合子NR5A1基因突變c.938G>A (p.Arg313His)，它們都位於蛋白質(LBD)配體結合域高度保守的螺旋5 (H5)的第5外顯子中。功能研究和蛋白質結構分析闡明了維持突變致病性的原因。

研究對象和方法

臨床資料

對2個首發病例為46,XY型DSD的家庭進行評估。圖1的家族樹中描繪了家族1的四代和家族2的兩代。

在第一個家族親屬的感染成員的臨床和生化結果之前已報道過[10]。家族2之前沒有報道過。

這項研究得到了Garrahan兒科醫院倫理委員會的批準。研究的書麵知情同意來自所有成年患者或患者的父母或導師。

NR5A1基因突變分析

采用標準方法從外周血白細胞中提取基因組DNA。利用英國倫敦大學學院J. C. Achermann博士提供的特異性引物，對NR5A1基因的編碼外顯子(外顯子2-7)和兩側內含子區進行PCR擴增。PCR產物被純化(Qia快速PCR純化試劑盒，Qiagen, Buenos Aires, Argentina)，並在ABI PRISM 3130遺傳分析儀毛細管DNA測序儀(Applied Biosystems, Buenos Aires, Argentina)上使用BigDye Terminator 3.1版本循環測序試劑盒(Applied Biosystems, Buenos Aires, Argentina)進行測序。測序所用引物與PCR所用引物相同。所得核苷酸序列與NR5A1基因NG_008176.1的NCBI入口進行比較。

在網上蛋白質分析

基於序列同源性的工具SIFT(從耐受性中篩選耐受性;http://sift.jcvi.org/)，版本2.0.6和基於結構的工具polyphen2(多態性表型v2;http://genetics.bwh。harvard.edu/pph2/)使用默認設置來預測錯義變異p.Arg313His和p.Ser303Arg的致病性。蛋白的原始序列來自於ensemble和Uniprot/ Swiss-Prot數據庫。

圖1:兩族的家譜。正方形代表男性，圓圈代表女性。黑色方塊代表患病46,XY，作為男孩長大的受試者，黑色圓圈代表患病46,XX。每個科的索引情況用箭頭表示。家族1有斜線的圓圈代表一個沒有被研究過的已故女性。受試者I-1(灰色圈)在30歲時經曆了更年期，推斷受影響(不可用於研究)。

定點誘變

為了進行啟動子活性實驗，在pcDNA3載體(Invitrogen, Buenos Aires, Argentina)中構建了包含人類野生型SF1 cDNA (p-SF1wt)的表達載體。采用特異性引物SF1for_pcDNA3 (5tggtgtgagggggtttctg3 ')和SF1rev_pcDNA3 (5 ' gagaggaggaagggggatgacc3 ')進行PCR擴增生態國際扶輪和Xho1個酶切位點，來自H295R細胞係(人腎上腺皮質癌細胞係)的RT-PCR。1921-bp PCR產物使用Zymoclean凝膠DNA回收試劑盒(zyymo RESEARCH，布宜諾斯艾利斯，阿根廷)對2%瓊脂糖凝膠進行純化。這碎片被消化了EcoRI / Xho1、克隆成生態國際扶輪和XhopcDNA3載體的1個位點。測序結果證實了該結構的準確性。以p-SF1wt為模板(p-R313H和p-S303R)，通過基於pcr的位點定向突變(QuikChange site-directed mutagenesis Kit, Stratagene, Buenos Aires, Argentina)和特定引物，生成含有p.Arg313His和p.Ser303Arg變體的NR5A1表達載體。在功能研究之前，所有突變質粒的整個序列都是通過直接測序確認的。

在體外NR5A1突變的功能研究

所有用於評估NR5A1/SF1功能的瞬時基因表達研究均采用Lipofectamine 2000試劑在24孔板中進行。布宜諾斯艾利斯，阿根廷)根據製造商的協議。每個表達載體(p-SF1wt, p-R313H或p-S303R)與含有hAMH啟動子的報告質粒(PGL2, Promega，布宜諾斯艾利斯，阿根廷)共轉染到sma1細胞係(小鼠未成熟的支持細胞)或Y1細胞係(小鼠腎上腺腎上腺層腫瘤細胞)，該報告質粒由Rodolfo Rey博士(阿根廷布宜諾斯艾利斯，調查中心Endocrinológicas (CEDIE)，醫院Niños R. Gutiérrez)提供，p- phhamh或與報告質粒(PGL3, Promega，布宜諾斯艾利斯，阿根廷)含有h3BHSD2啟動子p-Ph3BHSD2。兩種啟動子都有SF1的響應元件。轉染48小時後將細胞裂解並檢測熒光素酶活性(雙熒光素酶報告檢測係統;Promega，布宜諾斯艾利斯，阿根廷)。共轉染CMV Renilla熒光素酶作為轉染效率的標記。結果顯示為三次獨立實驗的平均值±SEM，每次重複進行，並表示每個SF1和突變體的熒光素酶活性與空載體的比值。所有數據都是Renilla活動的標準化數據。 Statistical significance was examined using ANOVA test. Values of p<0.05 were considered significant.

在網上wt蛋白及其變異體的結構分析

將人SF1 wt LBD的x射線晶體結構1ZDT(鏈B)作為支架，與一個共調節肽(NCoA-2, KENALLRYLLDKD)和一個磷脂配體(二棕櫚酰-3- sn -磷脂酰乙醇胺，PEF)結合，製備溶液中的蛋白質複合物。Ser303Arg和Arg313His點突變使用Discovery Studio Visualizer 3.5[11]在矽片中引入。在加入2.10 Å分辨率晶體結構中缺失的H原子後，通過目視檢查確定了可電離殘基在pH值7.4時的質子化態。每個結構都由TIP3P水的截斷八麵體盒子溶劑化，每個絡合物周圍延伸至12 Å，添加K+離子到電中性(wt, p.Ser303Arg和p.Arg313His分別為7、6或8個反離子)。一個標準的經典最小化協議(2500步放鬆溶劑+離子，同時保持絡合物限製在500千卡/摩爾。Å，隨後對整個係統進行20000步的無約束優化)，使用AMBER12套件的磨砂機模塊[12]在周期性邊界條件下應用，將ff03力場分配給SF1和共調節肽，將GAFF參數分配給磷脂配體。用Gaussian09 rev. A.02[13]也得到了RESP原子電荷。使用粒子網格Ewald (PME)方法[14]處理遠程靜電，並使用10 Å cut-of進行直接空間相互作用。分子動力學模擬(MD)在相同條件下，在300 K的顯式水中對每個配合物進行了模擬，使用2 fs的積分步驟，並用SHAKE算法[15]對H原子進行限製。在使用朗之萬熱態的NVT係綜中進行100 ps平衡後，產生了5 ns的NPT模擬pmemd從AMBER12程序套件[12]。對MD軌跡進行後處理ptrajAmberTools 12[12]模塊和每個複數對應的最密集的聚類(用平均鏈接算法生成的五個聚類中)的代表性結構。

結果

臨床特征

指標病例家族1[10]，患者IV-2出生時生殖器模糊(陰莖長2厘米，陰唇皺褶，嚴重尿道下裂，腹股溝性腺小)。激素檢測顯示血清卵泡刺激素水平升高，抗抗激素水平降低，對hCG刺激的激素生成反應正常(表1)。在10月齡時進行腹腔鏡檢查和雙側蘭花固定術。Müllerian觀察到結構和右側性腺活檢顯示睾丸發育不良，Leydig細胞和非典型異色生殖細胞的缺失。未見原位癌病變。該家庭中另外三個46位XY個體(受試者II-1、III-2和III-3)在出生時出現嚴重的尿道下裂，所有人都發展為自發的男性青春期，其中一人(受試者II-1)已生育5個孩子。在家庭成員中，一個46,XX個體(受試者I-1)出現了早期絕經(該受試者無法用於生化和遺傳評估)，另外3個46,XX家庭成員(受試者III-4, III-5和IV-3)出現了高FSH和低AMH水平。

家庭2的索引病例(患者II-1)為非血親父母的第一個孩子。嬰兒出生時生殖器模糊，出生時最初被指定為女性。患者在3個月大時被轉介作進一步評估。體格檢查顯示，嬰兒陰莖長2.5 cm，下體組織發育良好，唇陰融合完全，陰囊尿道下裂;兩腹股溝生殖腺均可觸及。激素檢測顯示血清卵泡刺激素水平升高，抗抗激素水平降低，以及對hCG刺激的正常激素生成反應(表1)。性別重新分配為男性。Müllerian結構存在超聲和腹腔鏡證實。10月齡右側性腺活檢顯示輕度睾丸發育不良，Leydig細胞和少量生殖細胞的存在。他的母親報告懷孕困難，表現為低AMH和高基礎卵泡刺激素血清水平。他父親指的是正常的性發育和生育能力。 All affected individuals studied presented normal adrenal function.

突變分析

NR5A1基因分子研究發現，第一個家族存在c.938G>A (p.Arg313His)雜合子突變，第二個家族存在c.909G>A (p.Ser303Arg)雜合子突變。這兩個突變都位於LBD高度保守的H5的外顯子5。為了確定這些變異是否在一般人群中以高頻率出現(單核苷酸多態性數據庫)，我們在NCBI數據庫和集成基因組瀏覽器中尋找這些變異，但我們沒有找到它們，這表明這兩種變異不會是常見的多態性。此外，我們對100名健康受試者(200個等位基因)進行了DNA測序，沒有檢測到攜帶該突變的等位基因。

NR5A1基因突變預測模型

為了評估氨基酸變化的潛在有害影響，我們使用了兩個軟件程序，SIFT和polyphen2。SIFT預測是基於來自密切相關序列的序列比對中氨基酸殘基的保守程度。313位的精氨酸殘基和303位的絲氨酸殘基在種間高度保守。這些突變被評估為選項"影響蛋白質功能的高度有害的耐受指數分別為0.00和0.02。polyphen2也進行了同樣的評估。該軟件使用直接的物理和比較考慮，預測氨基酸替代對人類蛋白質的結構和功能的可能影響。這兩種突變被預測為可能損害，得分分別為1.000和0.999。

結構分析

將含有點突變p.Ser303Arg和p.Arg313His的兩個變體與人類SF1 wt進行比較。這兩個氨基酸變化都位於LBD的H5螺旋上。特別地，p.Ser303Arg位於與輔調節肽(主要由H12、H3和H4劃分)相互作用區域附近，p.Arg313His突變是鹽橋H2…H5的一部分，它緊實了受體的LBD結構並穩定了其活性形式[2,16]。

通過對溶液中三個SF1複合物的蛋白質骨架的動力學行為的比較發現，盡管p.Ser303Arg顯示出與SF1 wt相似的結構演化，但對於p.Arg313His變體來說，它需要更長的時間(接近4納秒(ns))來穩定3D結構，由於失去鹽橋相互作用，它與其他兩個變體在全局上不同(圖2A)。

由於已有報道稱，限製NR5A1受體的靈活性會降低它們的激活[17,18]，我們使用在每個5ns模擬的穩定部分計算的蛋白質殘基均方根波動(RMSF)在三個變體之間比較了這一問題(圖2B)。可以立即看出，與wt相比，p.Ser303Arg突變使蛋白質在整個結構上明顯變得更加靈活(特別是在H2-H3環和H12螺旋中)，相反，p.Arg313His突變使受體在幾個區域變得更加僵硬。

通過對三種變體LBD的螺旋和環的三維排列的總體比較(圖2C和2D)，突出表明兩個點突變都誘導了配體周圍受體的三級結構(H2-H3/H6-H7環、β發夾和H6/H7螺旋)和AF-2結構域(H4、H11和H12)的變化，導致後者在輔激活肽的不同位置。

表1:受影響個體的血清激素水平可用於研究。
粗體數字表示參考範圍以外的值;正常值顯示在括號中。SI轉換因子:睾酮(納摩爾/
升),3.47;雌二醇(每升皮摩爾)，3.671;皮質醇(納摩爾/升)，27.59。
實際年齡。ND =不確定
1例，年齡0.83歲
(*) Ciaccio et al. [10]

對每個突變周圍氫鍵網絡的進一步觀察立即表明，盡管p.Ser303Arg與Lys434的相互作用受到的影響最大(與SF1 wt相比)，但當p.Arg313His中由His313取代後，與wt中Glu237和Asp309建立氫鍵的Arg313能力完全喪失(表2)。

表2:每個點突變周圍氫鍵相互作用的結構分析

最後，更仔細地比較不同變體在LBD上與配體的相互作用表明，由於p.Ser303Arg突變主要通過改變Lys440定位和由H2-H3和H6-H7環定義的通道入口的打開(這導致PEF的極頭更多地暴露在溶劑中)影響SF1與磷脂的相互作用，p.Arg313His突變不會對配體-受體識別產生顯著變化(圖2E和2F)。

NR5A1突變活性的功能研究

為了檢測SF1突變體(p-R313H和p-S303R)和野生型SF1 (p-SF1wt)的轉錄活性，我們在類固醇生成細胞係(SMAT1和Y1)中與不同SF1靶基因啟動子(p- phhamh和p-Ph3BHSD2)進行了瞬時共轉染試驗。

在兩種類固醇生成細胞係中，p- sf1wt顯著(p<0.05)增加了由人類AMH或3BHSD2啟動子驅動的報告基因表達。與p-SF1wt相比，轉染p-R313H或p-S303R這兩種錯義突變均顯示轉激活活性受損(圖3)。

具體而言，在SMAT1細胞係中，p- phhamh和p- sf1wt共轉染顯著提高了熒光素酶活性(3.00±0.09 AU，平均值±SEM, p<0.05方差分析)，而突變體p- r313h和p- s303r顯著降低了熒光素酶活性(分別為1.32 AU±0.05和1.09 AU±0.01，平均值±SEM, p<0.05方差分析)(圖3A)。在與p-Ph3BHSD2共轉染的SMAT1細胞係中也得到了類似的結果;在p- sf1wt存在時，熒光素酶活性顯著增加(6.92 AU±0.25，平均±SEM, p<0.05方差分析)，而當檢測突變體p- r313h和p- s303r的影響時，與p- sf1wt相比，可觀察到轉激活能力顯著降低(分別為1.91 AU±0.07和2.00 AU±0.08，平均±SEM, p<0.05方差分析)(圖3B)。

圖2:SF1突變的結構分析。麵板A -以初始結構為參考的模擬過程中各SF1變體Cα RMSD的結構演化。麵板B -蛋白質殘留的靈活性計算為RMS波動從時間平均Cα位置沿每次模擬的穩定部分。麵板C和D -通過蛋白質變體對重疊，證明了LBD中α-螺旋、β-發夾和環的3D配置的主要差異。紫色的是SF1 wt蛋白，黃色的是R313H突變蛋白，綠色的是S303R突變蛋白。AF-2是依賴於配體的激活功能，PEF是磷脂配體。紅色圈出的是輔激活肽。圖E和F -配體周圍區域的細節，由一對蛋白質變體進行比較。紫色的是SF1 wt蛋白，黃色的是R313H突變蛋白，綠色的是S303R突變蛋白。

在Y1細胞係中，p- ph3bhsd2和p-SF1wt (9.27 AU±0.54，平均±SEM, p<0.05方差分析)和p- r313h和p- s303r(分別為4.55 AU±0.32和4.08 AU±0.17，平均±SEM, p<0.05對比SF1wt，方差分析)觀察到與SMAT1細胞係相似的反應(圖3C)。由於p-SF1wt沒有增加熒光素酶活性，所以不可能對Y1細胞係中的p- phhamh突變體進行轉激活研究。

討論

我們在兩名非相關的46,XY型DSD患者中報告了SF1基因LBD中兩種錯義突變(p.Arg313His和p.Ser303Arg)的分子特征，這兩種突變均處於雜合狀態。

這兩例46,XY指數患者的臨床和生化表型相似。激素檢測顯示正常的基礎睾酮和峰值睾酮，高血清卵泡刺激素和低血清抗蛋氨酸水平的孩子的年齡。睾丸發育不良和Müllerian結構的存在表明，胚胎胎兒支持細胞在敏感的產前期未能分泌AMH，這與嬰兒時期檢測到的低水平AMH一致。第二個家庭的嬰兒，在小青春期評估，也出現低血清抑製素B水平和升高的FSH。正如在芳香化酶缺乏的男孩中提出的，抑製素B可能是調節正常男嬰[19]血清FSH分泌的主要貢獻者。兩名患者在出生時最初被分配為女性，但經過仔細評估後，基於基礎T分泌充足的年齡，包括對hCG刺激的正常反應，以及成年後成功性交的潛力，建議重新分配為男性，並被父母接受。這一決定也得到了對第一個家庭中其他46名發展為自發性男性青春期的XY DSD成員的隨訪的支持，其中一名保持了生育能力[10]，在46名XY NR5A1發育不良的睾丸中缺乏睾丸腫瘤發展的報道。

圖3:R313H和S303R突變SMAT1和Y1的功能分析。利用SMAT1細胞係中的Ph3BHSD2和Ph3BHSD2啟動子和Y1細胞係中的Ph3BHSD2啟動子研究野生型SF1 (p-SF1wt)和突變體p.Arg313His和p.Ser303Arg (p-R313H和p-S303R)的轉錄活性。兩種細胞係的突變體和兩種啟動子的突變體均表現出轉激活活性的降低。結果表明，與空載體相比，熒光素酶活性增加了一倍(平均±SD)。所有的值代表三個獨立轉染實驗的均值±SEM，每個實驗進行三次重複。* vs.空向量;** vs. SF1, p<0.05，方差分析。

在第一家庭中受影響的親屬之間有顯著的差異，從嚴重的生殖器模糊到正常的男性外生殖器和保持生育能力，正如我們[10]先前報道的那樣。雜合子NR5A1突變患者的表型譜廣泛，包括突變位於LBD(表3)[5,6,9,20-32]。NR5A1突變的表型變異性使得基因型-表型相關性非常困難。46,XX個攜帶雜合子NR5A1突變的個體，也被描述為可變的性腺表型[7,8,10,20,33-36]。在本報告中，4例46,XX例患者血清FSH水平高，抗抗激素水平低。研究中三名年輕成年女性月經規律，兩名成功分娩，反映了代償性卵巢功能障礙。這些婦女在出現卵巢衰竭的臨床體征或症狀之前可能會經曆一個卵巢儲備減少的階段，據報道[20]。

指標患者及其攜帶NR5A1基因突變的親屬腎上腺功能正常。到目前為止，隻有3例攜帶NR5A1突變的患者報告了腎上腺功能不全[37-39]。

兩種錯義突變(p.Arg313His和p.Ser303Arg)的氨基酸替換都發生在一個高度保守的位點在網上分析。

結構分析表明，由於它變成了一個不那麼剛性的蛋白質，相互作用對p.Ser303Arg突變體來說更不穩定。另一方麵，p.Arg313His突變導致的靈活性喪失發生在與結構填充(H2-E238和H5-R313)和激活功能域AF-2共激活子招募(H3-R281和H12-E454)相關的幾個相互作用區域。在配體通道入口磷脂極性頭結合的H11 c term區域也受到高度影響。與此一致的是，對SF1配體結合域的晶體學研究顯示，在其激素結合袋中結合了不同的磷脂[2,16-18,40-42]。

在體外用於評估這兩種突變在h3BHSD2和hAMH啟動子以及兩種不同的類固醇生成細胞係(SMAT1和Y1)上的功能影響的分析顯示，轉激活活性受損。在這條線上，除了已知的與磷脂的相互作用外，其LBD可能與一些未知的共激活因子相互作用，引發腎上腺和性腺發育[43]。盡管在體外在一些研究報告中，位於LBD的NR5A1基因突變證實了有害的影響(表3)，但在報告的受影響患者中觀察到的臨床表型變異性仍然知之甚少。

盡管已知SF1參與了與多個類固醇生成酶啟動子區域的眾多共激活子的相互作用，以及參與生殖、類固醇生成和性別分化的因子[1,6,39]，但雜合突變的分子機製仍有待闡明。

之前描述的大多數患者，包括本報告，在LBD中攜帶雜合子的NR5A1基因突變，支持SF1作用的劑量依賴性的概念(表3)。

總之，我們報告了兩例非相關的46,XY型DSD患者的臨床表型、激素研究、分子表征和蛋白質結構分析，其中NR5A1基因的一個錯義突變(p.Arg313His)之前描述過，沒有進行任何功能研究，以及一個新的錯義突變(p.Ser303Arg)，均處於雜合狀態，位於LBD。在體外而且在網上實驗證明了它們對功能的影響，也為SF1蛋白的結構-功能關係提供了見解。最後，本研究強化了46例XY型DSD患者臨床表型的廣泛變異性的概念。

表3:46,XY患者SF-1配體結合域的錯義突變
*進行矽結構分析;
**使用SIFT和/或polyphen2工具進行分析。
sFSH:血清FSH。
EMS:外部男性化評分(最低:1，最高:12)[32]

確認

由阿根廷國家調查協會Científicas y Técnicas (CONICET)、阿根廷技術協會Investigación Científica y技術協會(FONCYT)資助。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Pérez Garrido N, Saraco N, Marino R, Ramírez P, Ciaccio M，等(2015)SF1中位於配體結合域的兩個突變的功能特性。國際內分泌代謝紊亂雜誌1(4):doi http://dx.doi.org/10.16966/2380- 548X.117

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出版的曆史:

收到日期:2015年11月4日

接受日期:2015年11月19日

發表日期:2015年11月24日