文摘

小分子模擬的g - csf可作為潛在的藥物對神經退行性疾病,中風和腦外傷。

目的:)確定藥物與潛在與g - csf受體相互作用;b)來衡量這些藥物的綁定參數與g - csf受體表達的神經細胞和單核細胞的細胞係;c)確定這些藥物引起或阻止細胞內信號引起g - csf的。

方法:3以前研究g - csf的)計算機輔助建模模擬藥物指導化學庫的搜索附加藥物與g - csf受體結合的潛力;b) g - csf受體結合參數評估通過測量能力的藥物來取代^125年我]-G-CSF從其在單核細胞的受體和神經細胞係。c)的細胞反應是由測量Bcl2生存蛋白的表達和PKCδVIII蛋白質免疫印跡。

結果:兩種最有效的競爭對手g - csf受體觸發劑量依賴性增加Bcl2表達在神經元和單核細胞的細胞係。單核細胞的細胞係,這兩個藥物有效地阻止Bcl2表達引起g - csf的。

結論:藥物模仿g - csf的神經營養和/或immune-modulating行動將是有用的研究工具,但最終可能應用於臨床實踐。

關鍵字

g - csf受體;受體激動劑;拮抗劑;單核細胞的細胞係;神經細胞株;信號轉導;Bcl2;PKCδVIII

介紹

粒細胞集落刺激因子(g - csf)是一種常用的造血細胞因子治療嗜中性白血球減少症和增加代造血幹/祖細胞在骨髓捐贈者[1,2]。g - csf也產生直接作用於神經幹/祖細胞和表達,及其受體G-CSF-R,神經源性區域的海馬體(HC)、sub-ventricular區和嗅球[3]。g - csf受體及其配體也表達了成熟神經元在大腦的其他區域包括皮質錐體細胞層(特別是二世和V),內嗅皮層、小腦浦肯野細胞,在大鼠的小腦核[3]。g - csf受體也可以發現在細胞表麵的內皮細胞,淋巴細胞,血小板和中性粒細胞[4 - 6]。

g - csf作為神經營養因子的作用在發展和成年生活越來越認可。有缺陷的小鼠繁殖g - csf據報道有記憶方麵的問題,形成和發展運動技能的[7]。更具體地說,這些小鼠的海馬展出感應的赤字長期勢差在CA1區,減少神經元前體細胞在齒狀回(DG)和降低神經元的樹突複雜性DG和HC的CA1區[8]。在g - csf中看到的缺陷缺乏小鼠支持g - csf的名稱作為一個真正的神經營養因子,發揮了作用在神經發生和維持海馬結構的結構和功能的完整性。結合認知訓練,g - csf也可以顯著改善空間學習和新海馬的神經元存活[8]。

認識到g - csf直接作用於神經組織刺激了這些藥物的治療應用的研究對神經退行性疾病,中風和腦外傷(9 - 12)。g - csf政府報道減少澱粉樣負擔,加強神經發生、突觸發生和認知能力在一個小鼠模型的阿爾茨海默病(AD) [13]。係統性的g - csf政府老鼠已經持續創傷性腦損傷(TBI)導致運動功能恢複明顯優於對照組[14]。最近的研究報道,g - csf政府在創傷性腦損傷模型小鼠導致認知功能的強化開采hippocampal-dependent學習任務[15 - 17]。g - csf也被報道來提高生存在轉基因小鼠模型的肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS [18]。在小鼠模型的廣告(轉基因APP / PS1鼠標),g - csf治療是有效減少澱粉樣負擔,加強神經發生和提高性能在hippocampal-dependent任務[13]。

有幾個原因發展“製藥”g - csf受體激動劑或拮抗劑。g - csf是一種蛋白質所產生的DNA重組技術生產,因此非常昂貴。治療管理g - csf可產生嚴重的副作用(血小板減少、白細胞增多、貧血、脾腫大)從其周邊的行動在骨髓。因此,藥物哪些塊g - csf的外圍行為沒有阻止其中樞神經營養行動將是非常可取的血管遮擋或出血的風險。另外,g - csf模擬藥物選擇性地刺激大腦g - csf受體可能作為一種非常有用的代理促進海馬神經發生和加強阿爾茨海默氏症的認知。

三個小non-peptidergic分子曾被報導過像g - csf;這些藥物被證明刺激血液幹細胞增殖和增加循環白細胞的齧齒動物模型[19]。然而,Kusano實驗室沒有進一步追求這個領導。其他研究人員已經克隆,純化和結晶G-CSF-R生成x射線衍射模式允許重建和可視化三維計算機模型(20、21)。

坐標為g - csf綁定到其節目互動的一個關鍵點,穀氨酸受體(E20)從g - csf突出成一小口袋GCSF-R,估計是氫鍵接受地區(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/?term=1PGR)。我們假設一個分子能夠打斷這種交互可以減少與G-CSFR g - csf的綁定。

本研究的主要目標是一個)來確定化合物具有類似g - csf受體結合Kusano化合物;b)來衡量這些小分子的綁定參數與g - csf受體表達的神經細胞和單核細胞的細胞係;c)確定這些小分子可能引發或阻止抗凋亡細胞內的信號級聯引起g - csf的。

材料和方法

細胞培養

兩個人類細胞係被選為這些細胞培養研究。一個代表的是一種人類單核細胞細胞係外圍免疫係統,THP-1,生長在懸架。其他細胞係是人類神經母細胞瘤細胞係(SH-SY5Y)這是一個混合細胞係雖然隻有附著細胞利用[22]。已知兩個細胞係表達G - CSFR (23、24)。兩個細胞係都寫明ATCC(馬納薩斯,弗吉尼亞州)購買的。THP-1 rpmi - 1640年培養基培養細胞補充10%胎牛血清(的邊後衛)+ 1% penicillin-streptomycin(寫明ATCC馬納薩斯,弗吉尼亞州)在濕潤的氣氛中5%的有限公司₂在37°C。SH-SY5Y細胞係是1:1 EMEM / F12培養基培養青黴素、鏈黴素的邊後衛+ 10% 1% 5%的調濕大氣有限公司₂在37°C。

識別潛在的g - csf模仿或拮抗劑

化合物1 - 3(表1和圖1)最初是由Kusano發現,發現刺激血液幹細胞增殖和增加循環白細胞的齧齒動物模型[19]。其他藥物被確定的有限的計算分析。Schodinger三維建模軟件(https://www.schrodinger.com/smdd/)是用於導入GCSF綁定到其受體的分子模型從NCBI蛋白質數據庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/?term=1PGR)。建模後的第一個3分子之前報道作為潛在的g - csf模擬[19],其他八個分子被確定為研究蛋白質/蛋白質相互作用的潛在抑製劑g - csf受體部位的細胞培養。

圖1:十個小分子的化學結構與潛在與g - csf受體進行交互。

1	2 - (5-chloro-2 - (heptyloxy)苯基)1 - (1 h - imidazol 1-yl) propan-2-ol PubChem CID: 10020811	6	(4)- 5-methoxy-1H-indol-3-yl 3, 4 -二氫- (1、3、5)-triazino [1, 2] benzimidazol-2-amine PubChem CID: 5295059
2	2 - (5-chloro-2 - (octyloxy)苯基)1 - (1 h - imidazol 1-yl) propan-2-ol PubChem CID: 10451448	7	3 - [4 - (2-amino-3 4-dihydro - (1、3、5) triazino [1, 2 -] benzimidazol-4-yl) - 1 h-pyrazol-3-yl]苯酚PubChem CID: 5295059
3	2 - (5-chloro-2 - (nonyloxy)苯基)1 - (1 h - imidazol 1-yl) propan-2-ol PubChem CID: 9907813	8	4 - [3 - (4-methoxyphenyl) 1 h-pyrazol 4-yl) 3, 4 -二氫(1、3、5)triazino [1, 2 - a] benzimidazol-2 -胺PubChem CID: 5295058
4	1 - (5-chloro-2 -羥苯基)- 2 - (1 h - imidazol-1-yl) ethan-1-ol PubChem CID: NA	9	4 - (5-fluoro-1H-indol-3-yl) 3, 4二氫- (1、3、5)triazino [1, 2 - a] benzimidazol-2-amine PubChem CID: 5295057
5	1 - (5-chloro-2 -羥苯基)- 2 - (1 h - imidazol-1-yl) ethan-1-one PubChem CID: 12953655	10	4 - [3 - (3-nitrophenyl) 1 h-pyrazol-4 yl) 3, 4-dihydro (1、3、5) triazino (1 a) - benzimidazol二胺PubChem CID: 5294981

表1:化合物的化學名稱測試

藥物

十個化合物用於本研究(表1和圖1),化合物1 - 5是合成藥物研發中心(莫菲特癌症中心),化合物6 - 10從商業供應商購買(ChemBridge集團,聖地亞哥,CA)。

g - csf受體綁定參數評估與^125年我]-G-CSF

綁定的^125年我]-G-CSF測量使用先前描述的方法[25]與我們實驗室一些修改[26]。(^125年我]-G-CSF(具體活動46.55 TBq /更易)購買的珀金埃爾默(馬薩諸塞州沃爾瑟姆)。細胞在180年孵化µL綁定中含有0.2% BSA MgSO 5毫米₄玫瑰和50毫米,pH值7.2 1.5×10的濃度⁷細胞/毫升和適當的濃度(^125年我]-G-CSF。孵化項目進行與周期性震動在室溫下,確保連續混合細胞和放射性配體。2 h的孵化時間估計從初步實驗發現足以達到平衡。非特異性結合的^125年我]-G-CSF被孵化項目測量的無標號g - csf的100倍摩爾過剩。最後孵化、束縛和自由電台用歧視的配體分離石油根據以前公布的方法[27]。即80µL整除孵化混合物的取樣,每個整除分層300µL分離油放在500µL聚乙烯管和離心5分鍾在6000 rpm。分離油由鄰苯二甲酸二丁酯和1份bis 1.5部分鄰苯二甲酸(2 -乙基己基)酯(Aldrich-Sigma、聖路易斯、鉬)。

束縛和自由配體活動是算在兩片切管後,將提示和上衣,分別為獨立的閃爍瓶。貝克曼庫爾特LS6500閃爍計數器計數進行。冰醋酸是用來溶解顆粒。特定的綁定決心從綁定的數量^125年我]-G-CSF被與過度競爭標記g - csf。飽和綁定的參數實驗包括離解常數(Kd),最大結合容量(Bmax)和綁定協同(h)計算GraphPad棱鏡5軟件(拉霍亞,CA)利用非線性回歸分析。

競爭研究

細胞,如上所述,準備在180年孵化µL綁定中含有0.2% BSA MgSO 5毫米₄玫瑰和50毫米,pH值7.2 1.5×10的濃度⁷細胞/毫升和適當的濃度(^125年我]-G-CSF。其次是增加每項研究化合物濃度增加(10到3000海裏)。2小時後的孵化,束縛和自由^125年我]-G-CSF決心,如上所述。從這些數據,競爭受體的參數計算與GraphPad棱鏡5軟件(拉霍亞,CA)。每個濃度進行了分析一式三份和實驗重複三次。這些實驗在人類單核細胞的神經細胞係。

信號轉導由g - csf與免疫印跡(測量PKCδVIII和Bcl2)

THP-1細胞或SH-SY5Y細胞3×10⁶細胞在5毫升媒體25厘米²瓶治療)100 ng / ml g - csf, b)中不g - csf和c)三種不同濃度的試驗藥物僅24 h。此外,一組燒瓶co-incubated g - csf的組合和3測試藥物的濃度。完整的細胞溶解產物(60毫克)分離10%聚丙烯酰胺凝膠electrophoresis-SDS (PAGE-SDS)。蛋白質是electrophoretically轉移到硝化纖維膜,阻止5%脫脂牛奶準備嚐試緩衝鹽水含0.1%漸變20日清洗和孵化與多克隆抗體對Bcl2(細胞信號)或PKCδVIII-specific多克隆抗體(帕特爾實驗室)[28]。管家基因GAPDH是作為內部標準。孵化後與anti-rabbit IgG-HRP,凝膠圖像數字被ProteinSimple FluorChem^™並使用AlphaView光密度分析^™軟件。

統計分析

密度測量結果分析了來自西方的屁股twotailed t當隻有兩組進行比較。在其他分析3組比較,單向方差分析其次是t與Dunnett修正為多個比較被利用。實驗至少進行三次;所有數據提出了均值±SEM。所有統計分析的數據是通過PRISM4或PRISM5統計分析軟件(La Jolla GraphPad棱鏡,CA)。所有被認為比較重要,P < 0.05。

結果

為了確定Kusano化合物的作用方式(化合物1 - 3號),有限的計算分析。總之,g - csf的坐標綁定到其受體從NCBI獲得蛋白質數據庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/?term=1PGR)。交互的坐標顯示一個關鍵點,g - csf的穀氨酸(E20)突出的小口袋GCSF-R,估計也有氫鍵接受地區。這是假設一個分子能夠打斷這種交互可以減少與G-CSFR g - csf的綁定。檢查Kusano化合物(化合物1 - 3、表1)通過簡單的對接,我們發現這三個藥物能夠占領這個口袋與負但高估計自由能的綁定。能量表明綁定是可能的。結合位點的阻塞可能妨礙g - csf與G-CSFR交互的能力。綁定模式建議有兩個綁定利用的要點:兩個離散蛋白質結合位點的接口和綁定到口袋裏,破壞Glu20的交互與Tyr78 GCSF並從GCSF-R Arg193。在此基礎上分析,兩個額外的化合物合成莫菲特藥物研發中心(化合物4、5)和五個化合物被篩選化學庫(化合物6 - 10)從ChemBridge集團(CA)聖地亞哥。

綁定的特征(^125年我]-G-CSF對單核細胞的受體(THP-1細胞)和神經元(SH-SY5Y)細胞

增加濃度的放射性標記g - csf(單獨或在100倍的存在多餘的“冷”g - csf)被添加到細胞培養生成飽和曲線。特定綁定的^125年我]-G-CSF受體表達單核細胞(THP-1細胞)揭示了Kd = 57.49點到希爾係數為0.92。神經元細胞的Kd線607點希爾係數為2.7(表2)。

	單核細胞的細胞(THP-1)	神經細胞(SH-SY5Y)
Bmax	901點	4826點
希爾係數	1.19	2.71
Kd	下午53.8點	608點

表2:特定的綁定參數的^125年我在THP-1] -G-CSF受體細胞和SH-SY5Y細胞。

綁定的配體與g - csf受體表達的單核細胞的細胞顯示更大的親和力(Kd)低於綁定到神經細胞。然而,結合配體受體表達的神經線路展品實質性的“協同”,由希爾表示係數2.7與1.19的單核細胞的細胞係。合作綁定是指增強綁定的配位高分子已經有其他配體出現在相同的高分子。希爾係數描述了配體的受體大分子飽和的分數作為配體濃度的函數;它是用來確定合作的程度綁定受體的配體。係數為1表示完全獨立的綁定,不管有多少額外的配體已經綁定了飽和曲線的單核細胞的細胞係。數量大於1表明積極的協同,而數字小於1表明負協同。

綁定參數,包括電離常數(Kd),最大結合容量(Bmax)和希爾係數計算與GraphPad棱鏡5軟件使用非線性回歸分析

位移的研究

一個典型位移研究結果顯示在圖2中展示的能力化合物6和10取代[^125年我從對單核細胞的細胞受體)gcsf的IC50 13.7和2.3 nM,分別。的IC50表明濃度藥物取代50%的綁定的g - csf受體。IC50越小,更多的是受體親和力。化合物10展出六次GCSF受體的親和力大於化合物6。四個十化合物測試能夠顯著與綁定的g - csf受體競爭(圖3),化合物6和10,流離失所的大於75%的^125年I-GCSF,進一步研究了他們的模仿能力或阻止細胞內信號引發的天然配體。

圖2:化合物6和10取代放射性標記GCSF受體表達了人類單核細胞。
放射性標記的)百分比GCSF綁定到受體(軸),表示為均值±SEM (n = 6)策劃反對增加濃度的化合物6和化合物10。B)分對數Y (logistic回歸分析)和濃度的化合物6和10計算參數g - csf受體競爭結合的藥物。C)插入為化合物6和競爭力的顯示參數綁定化合物10。IC50表示藥物的濃度,取代50%的g - csf受體(較小的IC50 =更大的親和力受體)。數據基於2單獨的實驗與n = 3 /實驗。

圖3:位移(我^125年]gcsf從其受體表達單核細胞的化合物1 - 10。Y -軸左邊顯示的綁定g - csf在CPM和Y軸右側顯示的百分比放射性標記的GCSF受體。*表示顯著位移p < 0.05化合物10是最有效的,取代我的86.6%^125年從其受體gcsf。

生物反應

綁定的g - csf受體觸發受體homo-dimerization和複雜信號轉導和抗凋亡通路的激活增加STAT3的表達,伯靈頓的bcl - 2,並減少表達[29-31]。在我們實驗室以前的工作表明,g - csf的上調表達PKCδVIII和Bcl2人類單核細胞的神經元細胞培養[26]。盡管低親和力的g - csf受體表達的神經元與親和力在單核細胞的細胞相比,我們有報道,抗凋亡蛋白的表達Bcl2 PKCδVIII,當時大當量濃度(100 ng / mL或5.3海裏)在人類神經比單核細胞的細胞係細胞[26]。

比較潛在的g - csf的g - csf的影響模擬藥物關注的兩個最有效的競爭對手g - csf受體化合物6和10。這些藥物評估他們的能力來激活或阻斷細胞內信號由g - csf在人類神經細胞(SH-SY5Y)(圖4)。獨自孵化化合物6的人類神經細胞顯著增加Bcl2蛋白表達在低和中間,而不是高度集中(圖4 c)。此外,化合物6單獨刺激PKCδVIII蛋白質表達水平僅相當於g - csf。孵化神經元細胞的化合物6和g - csf並未改變Bcl2或PKCδVIII的表達,表明化合物6不作為拮抗劑的g - csf行動神經細胞株(圖4 c)。孵化的神經細胞株化合物10僅增加PKCδVIII和Bcl2蛋白質的表達水平僅相當於g - csf(圖4 d)。此外,化合物10在所有三個濃度測試沒有塊g - csf的行為。總結這兩個化合物6和化合物10 g - csf受體受體激動劑的作用,化合物6在最高濃度增加PKCδVIII不改變Bcl2表達式。

圖4:西方滴PKCδVIII和Bcl2 SH-SY5Y表達神經元細胞。
(A)從細胞免疫印跡孵化和三個濃度的化合物6單獨存在(或缺乏)的g - csf (100 ng / mL)。(B)從細胞免疫印跡孵化3化合物濃度10獨自的存在(或缺乏),g - csf (100 ng / mL)。(C, D)光密度分析的免疫印跡(Cmpd6)和B(化合物10)。實驗重複三次。* = p < 0.05基於單向方差分析Bcl2數據後跟Dunnett對車輛控製的多重比較。# = p < 0.05基於單向方差分析PKCdVIII數據單獨跟著Dunnett對車輛控製的多重比較。插入框顯示的影響表明,g - csf與化合物6到10。美元= p < 0.05基於單向方差分析後跟Dunnett獨自g - csf的多重比較。

研究單核細胞的THP-1細胞係顯示不同的藥物受體激活概要文件(圖5),化合物6 Bcl2表達的增加,但是沒有PKCδVIII 3濃度。與神經細胞係中的結果不同,添加化合物6 g - csf封鎖了增加Bcl2 PKCδVIII蛋白表達(圖5)。因此,化合物6似乎作為混合受體激動劑/拮抗劑在單核細胞的細胞係。化合物,3個濃度,顯著提高表達的是有效Bcl2和PKCδVIII(圖5 d)。化合物10似乎也作為一個混合受體激動劑/拮抗劑通過阻斷在Bcl2 g - csf表達的影響。然而,化合物10沒有對抗對PKCδVIII蛋白表達的影響。

圖5:西方滴PKCδVIII和Bcl2表達THP-1單核細胞的細胞。
(A)從細胞免疫印跡孵化和三個濃度的化合物6單獨存在(或缺乏)的g - csf (100 ng / mL)。(B)從細胞免疫印跡孵化3化合物濃度10單獨和存在(或缺乏)的g - csf (100 ng / mL)。(C, D)光密度分析的免疫印跡(化合物6)和B(化合物10),分別。* = p < 0.05基於單向方差分析Bcl2 Dunnett之後的數據的校正對車輛控製多重比較。# = p < 0.05)基於單向方差分析PKCdVIII數據單獨Dunnett緊隨其後的校正對車輛控製多重比較。插入框顯示的影響表明,g - csf與化合物6到10。& = p < 0.05基於單向方差分析Bcl2數據後跟Dunnett g - csf的修正為多個比較孤單。= p < 0.05美元僅根據單向方差分析PKCdVIII數據後跟Dunnett對g - csf的修正為多個比較治療。

討論和結論

g - csf作為小說的潛在效用神經營養因子引發了一場尋找小分子與g - csf受體繁殖或交互塊g - csf的生物學行為。生產的小型non-peptidergic分子模擬g - csf對血細胞的影響血統先前在日本進行[19]但項目追趕2004年。盡管Kusano不能獲得商業發現的3個化合物,他們報告的化學結構提供了一種實用的合成和搜索的起點與g - csf受體的藥物[19]。

基於計算機模擬這三個藥物和藥物庫的搜索,我們發現總共十化合物與潛在與g - csf受體相互作用在人類細胞培養。的兩個10藥物(化合物6和10)被證明與G - CSF受體和交互觸發人類單核細胞的信號轉導和人類神經細胞培養。化合物10似乎函數作為神經細胞係的g - csf受體激動劑。表達的蛋白質pro-survival Bcl2和PKCδVIII增加了神經細胞的藥物治療。相比之下,化合物10在最低濃度與g - csf對Bcl2的表達的影響和PKCδVIII單核細胞的細胞係。因此它可能會開發一種藥物組合(g - csf +化合物10)作為神經營養因子在活的有機體內,免費的有潛在危險的白細胞增多,血小板減少症和脾腫大。這將通過刺激神經元,g - csf受體(化合物10和g - csf)。同時化合物10能夠阻止g - csf的外圍影響,從而防止過度的白細胞增多。

盡管很明顯,化合物6和10可以取代放射性標記的g - csf受體神經細胞係和單核細胞的證據表明這些藥物的直接綁定GCSF-R仍有待確定。這將需要未來實驗評估直接drugGCSF-R綁定使用NMR(核磁共振)或其他技術。也會很重要更充分地調查最早的細胞內信號的步驟,如受體酪氨酸磷酸化STAT3磷酸化和其他中間體導致Bcl2和PKCδVIII表達式。後者g - csf受體生物效應的刺激措施強調因為g - csf的臨床相關性作為神經營養因子包括upregulation Bcl2凋亡的因素。

人類也有幾個缺點的應用g - csf作為神經營養因子治療神經係統疾病,如廣告、PD,創傷性腦損傷和中風:1)它是由DNA重組技術,因此成本昂貴的製造和管理一個療程。2)g - csf的主要外圍的行為(即刺激造血作用,增加循環水平中性粒細胞)限製劑量治療腦部疾病,可以安全使用。3)沒有特定的g - csf受體拮抗劑能夠阻止g - csf的邊緣行為,因此毫發無損地保留了原地直接在大腦神經營養作用。

總之,有必要開發模擬神經營養藥物和/或immune-modulating g - csf的行動。這些藥物比g - csf更容易和便宜。結構修改的g - csf模擬藥物選擇性地與中樞神經係統g - csf受體相互作用將導致一種新的神經營養藥物,以最小的對白細胞生成的影響。選擇性刺激中樞神經係統G - CSF受體也將有利於治療中樞神經係統疾病的過度生成白細胞和thrombocytes是一個不必要的副作用。此外,發現g - csf受體拮抗劑的大腦將可用於區別外圍的g - csf的核心行為。g - csf拮抗劑也可能是治療血液疾病相關,g - csf的活動係統。

未來將決定接下來的一係列實驗在活的有機體內g - csf管理局擬將在中風動物模型是有用的,創傷和神經退行性疾病。此外,機械的研究將需要執行)確認綁定網站使用和b)測定最早由g - csf受體的激活胞內信號。

承認

從海倫埃利斯養老基金支持JSR。

披露潛在的利益衝突

JSR, VS美國歌曲,和美國Sebti已經提交了一份專利申請開發G - CSF模擬藥物替代G - CSF本身或修飾符的G - CSF的活動

引用

1. 戴爾D(2003)目前化療所致嗜中性白血球減少症的管理:集落刺激因子的作用。Semin雜誌30:3 - 9。(Ref。]
2. Pusic我DiPersio摩根富林明(2008)使用生長因子在造血幹細胞移植。咕咕叫製藥Des 14: 1950 - 1961。(Ref。]
3. 施耐德,庫恩HG, Schabitz WR (2005) g - csf的作用(粒細胞集落刺激因子)的中樞神經係統。細胞周期4:1753 - 1757。(Ref。]
4. Bussolino F,王JM, Defilippi P, Turrini F, F Sanavio, et al。(1989)粒細胞-和granulocyte-macrophage-colony刺激因素誘發人類內皮細胞遷移和增殖。自然337:471 - 473。(Ref。]
5. Hanazono Y, Hosoi T, Kuwaki T, Matsuki年代,Miyazono K, et al。(1990)結構分析粒細胞集落刺激因子受體的中性粒細胞。Exp內科雜誌18:1097 - 1103。(Ref。]
6. 中村Morikawa K, Morikawa S, M, Miyawaki T(2002)描述的粒細胞集落刺激因子受體表達了對人類淋巴細胞。Br J Haematol 118: 296 - 304。(Ref。]
7. Diederich K, Sevimli年代,多爾H, Kosters能夠E,包羅M, et al .(2009)的角色粒細胞集落刺激因子(g - csf)在健康的大腦:G-CSF-Deficient老鼠的表征。J > 29日:11572 - 11581。(Ref。]
8. Diederich K, Schabitz WR, Kuhnert K, Hellstrom N, N (goldman sachs)、et al .(2009)粒細胞集落刺激因子的協同作用的影響和認知訓練新生海馬神經元的空間學習和生存。《公共科學圖書館•綜合》4:e5303。(Ref。]
9. Sanchez-Ramos J,西米洛C,阿維拉R,羅,陳R, et al。(2012)試點研究的粒細胞集落刺激因子治療阿爾茨海默氏症。J老年癡呆症說31號:843 - 855。(Ref。]
10. 曹Sanchez-Ramos J,歌曲,C,阿裏達什G(2008)造血生長因子的潛在治療阿爾茨海默氏症:一個原子力。BMC > 3: S3。(Ref。]
11. Schabitz WR,施耐德(2007)新成立的目標蛋白質:探討g - csf治療中風。趨勢雜誌Sci 28日:157 - 161。(Ref。]
12. 李歌年代,薩瓦河V,羅,K,曹C, et al。(2011) Granulocytecolony刺激因子(g - csf)提高帕金森病小鼠模型的複蘇。> 487:153 - 157。(Ref。]
13. Sanchez-Ramos J,歌曲,薩瓦河V,心血來潮B,林X, et al。(2009)粒細胞集落刺激因子減少大腦澱粉樣負擔和挫折認知障礙在阿爾茨海默氏症老鼠。神經科學163:55 - 72。(Ref。]
14. 楊DY,陳YJ王MF,潘HC,陳SY, et al。(2010)粒細胞集落刺激因子促進細胞增殖和運動功能恢複上老鼠遭受創傷性腦損傷。Res 32: 1041 - 1049。(Ref。]
15. Acosta SA在N, Shinozuka K,石川H, Sanberg公關,et al。(2014)聯合治療人類臍帶血細胞和粒細胞集落刺激因子減少組織病理學和運動障礙的慢性創傷性腦損傷的實驗模型。《公共科學圖書館•綜合》9:e90953。(Ref。]
16. 歌,香港X, Acosta年代,薩瓦河V, Borlongan C, et al。(2016)粒細胞集落刺激因子促進行為複蘇創傷性腦損傷的小鼠模型。J > Res 94: 409 - 423。(Ref。]
17. 歌年代,香港X, Acosta年代,薩瓦河V, Borlongan C, et al。(2016)粒細胞集落刺激因子促進大腦修複創傷性腦損傷後的招聘小膠質細胞和神經營養因子表達增加。備份文件夾> 34:415 - 431。(Ref。]
18. 克魯格Pitzer C, C, C也,Kirsch F, Dittgen T, et al。(2008)粒細胞集落刺激因子提高了肌萎縮性脊髓側索硬化症小鼠模型的結果。大腦131:3335 - 3347。(Ref。]
19. Kusano K, Ebara年代,立花K, T西村,佐藤年代,et al。(2004)的潛在治療作用小nonpeptidyl化合物模仿人類粒細胞集落刺激因子。血103:836 - 842。(Ref。]
20. Maeda Honjo E、Tamada T、Y, Koshiba T, Matsukura Y, et al。(2005)結晶2:2複雜的粒細胞集落刺激因子(包含GCSF受體的配體結合區域。Acta Crystallogr教派F結構生物學觀點》結晶Commun 61: 788 - 790。(Ref。]
21. 岡本Tamada T, Honjo E, Maeda Y, T, Ishibashi M, et al . (2006) Homodimeric交叉結構的人類粒細胞colonystimulating因素(包含)受體信號複雜。103年《美國國家科學院刊年代:3135 - 3140。(Ref。]
22. 謝人力資源時,胡錦濤LS,李GY (2010) SH-SY5Y人類神經母細胞瘤細胞係:在體外帕金森病的多巴胺神經元細胞模型。下巴地中海J(英格蘭)123:1086 - 1092。(Ref。]
23. 陳YK,江澤民XM,龔JP(2008)重組人粒細胞集落刺激因子增強靜脈血栓的決議。J Vasc雜誌47:1058 - 1065。(Ref。]
24. 施耐德,克魯格C, Steigleder T,韋伯D,比薩C, et al。(2005)造血因子g - csf抵消程序性細胞死亡的神經元配體和驅動神經發生。中國投資115:2083 - 2098。(Ref。]
25. 近藤年代,岡年代,淺野Y,原田M, Niho Y(1991)人類粒細胞集落刺激因子受體在急性髓係白血病。歐元J Haematol 46: 223 - 230。(Ref。]
26. 彭寧頓,薩瓦河V,歌,Patel N, Sanchez-Ramos J(2013)的直接行動粒細胞集落刺激因子對人類神經細胞和單核細胞的細胞係。J老年癡呆症說帕金森症3:121。(Ref。]
27. 3月CJ,嫁妝SK,老克龍海姆,康倫PJ,老板霍普TP, et al .(1985)檢測和表征高親和力的質膜受體對人類白介素1。J Exp 162: 501 - 515。(Ref。]
28. 江K, Apostolatos啊,Ghansah T,沃森我,維氏T, et al .(2008)識別人類小說凋亡蛋白激酶Cδ同種型,在NT2 PKCdeltaVIII細胞。生物化學47:787 - 797。(Ref。]
29. 董F,學習交流(2000)的一種蛋白激酶激酶激活粒細胞集落刺激因子(g - csf):證據的角色酪氨酸激酶活動有別於Janus激酶。血95:1656 - 1662。(Ref。]
30. 田SS、羊肉P,塞德爾嗯,斯坦RB,羅森J(1994)快速STAT3轉錄因子的激活粒細胞colonystimulating因素。血84:1760 - 1764。(Ref。]
31. 我們K, Matchett GA,平川T,唐J, Kanamaru K, et al。(2007)粒細胞集落刺激因子抑製凋亡神經元損失在老鼠新生兒分後。大腦Res 1145: 227 - 238。(Ref。]

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條信息

文章類型:研究文章

引用:薩瓦河V,歌曲,香港X, El Bassit G, Patel N, et al。(2017)小分子模擬或粒細胞ColonyStimulating因子(G - csf)的對抗行動。J藥物Res Dev 3 (2): doi 1009.131 http://dx.doi.org/10.16966/2470

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出版的曆史:

收到日期:2017年1月18日

接受日期:2017年2月28日

發表日期:2017年3月06