摘要

本研究研究了順勢療法藥物蛇紋羅氏菌(Rauwolfia serpentina, Q, 30c和6c)對未切除的雄性高血壓大鼠血壓、心率、血清生化指標、氧化應激指標和腎髒抗氧化防禦酶表達水平的影響。給高血壓大鼠服用蛇紋草可降低收縮壓和舒張壓。高血壓大鼠升高的血清鈉水平在藥物30c和6c的作用下有所降低。血清鉀水平在Q和30c的響應下下降，盡管在給予6c效力的藥物後其水平升高。高血壓大鼠血清天冬氨酸轉氨酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)水平隨藥物作用的不同而降低。高血壓大鼠的血糖水平降低，肌酐水平升高，對6c的藥物效力有反應。高血壓大鼠腎髒脂質過氧化升高水平在藥物的所有效力下恢複到控製值。另一方麵，高血壓大鼠腎髒線粒體後部分(PMF)中升高的蛋白質羰基含量在30c的響應下下降。然而，在線粒體分數(MF)中，它響應於效力，Q和30c而降低。在高血壓大鼠的研究中，超氧化物歧化酶1 (SOD1)的轉錄水平在藥物的作用下升高，而翻譯產物的水平沒有任何變化，除非6c效力降低。 The transcript level of SOD2 in the kidney of hypertensive rats was decreased in response to Q potency of the medicine but its translated products were decreased in response to 30c and 6c potencies. Though SOD activity was elevated in PMF of kidney in 6c treated group, its activity was decreased in MF in response to the medicine. Although catalase (CAT) mRNA level did not change in response to the medicine, its translated products were decreased in response to 30c and 6c potencies. Kidney CAT activity of the hypertensive rats was decreased in PMF in response to all potencies of the medicine but was increased in MF in response to Q potency only. Renal glutathione peroxidase (GPx) activity of the hypertensive rats was elevated in the MF after treatment with 30c and 6c potencies of the medicine without any change in its transcript level. Glutathione S-Transferase (GST) activity of the kidney was increased in PMF of 30c treatment group. Overall findings indicate that different potencies of homeopathy medicine R. serpentina have the efficacy to reduce systolic blood pressure in DOCA-salt-induced hypertensive rat and also modulates serum clinical parameters and renal antioxidant defenses.

關鍵字

蘿芙木屬蛇;DOCA;高血壓;血壓;氧化應激;抗氧化劑

簡介

高血壓是最常見的心血管疾病，是發生卒中、冠心病和腎功能衰竭的主要危險因素[1,2]。它影響著全球約26%的成年人口，預計到2025年其患病率將增加60%。高血壓的定義是收縮壓140 mm Hg或更高，舒張壓90 mm Hg或更高[4]。醋酸脫氧皮質酮(DOCA)誘導的高血壓是鹽依賴性的，通過增加血容量和血壓[5]起作用。長時間給藥時加鹽的DOCA促進醛固酮濃度升高，導致收集管中上皮細胞對鈉離子和水的再吸收增加，導致鹽和液體滯留，並在未去腎切除術(UNX)大鼠中產生體積依賴性高血壓[6,7]。據報道，doca鹽誘導的高血壓患者腎血管阻力升高，腎血流量減少，這些生理功能障礙參與了高血壓[8]的發生和維持。大量證據表明，鹽敏感性高血壓[9]中高血壓伴隨氧化應激和腎功能損害。docasalt誘導的高血壓與通過NADPH氧化酶產生的活性氧(ROS)增加有關，這可能導致血壓升高和氧化應激升高[10,11]。與高血壓相關的過度氧化應激已在幾種高血壓大鼠模型中得到證實，如Dahl鹽敏感[12]、自發性高血壓大鼠(SHR)[13]、血管緊張素II (ANG II)灌注大鼠[14]、雙腎一夾Goldbaltt高血壓大鼠和doca -鹽高血壓[15,10]。此外，據觀察，這些實驗模型也與線粒體改變有關，這可能與疾病的病理生理學和腎損傷[16]有關。

利血平，主要的生物堿蘿芙木屬serpentina傳統上是用來治療高血壓的，最早有記載的參考應用是蘿芙木屬人類高血壓是在1940年[17]。在實驗動物[18]中觀察到蛇紋草根具有降壓、鎮靜、催眠作用。研究發現，長時間使用粗樹脂分離出來r . serpentina根會產生一些副作用，如鎮靜、抑鬱、帕金森症、鼻塞、自殺傾向，因此不常被醫生使用。然而，在使用順勢療法藥物時，還沒有觀察到或報道這種副作用r . serpentina[20]。

高血壓與氧化應激[21]升高相關，進一步報道doca鹽誘導的高血壓通過增加ROS生成[10]來增強氧化應激。雖然順勢療法的準備r . serpentina傳統上被順勢療法從業者用於治療人類高血壓，目前的治療方案通常僅限於使用母液，沒有關於使用母液的其他功效及其在調節與高血壓相關的氧化應激和抗氧化保護方麵的功效的信息。因此，本研究旨在研究順勢療法藥物的不同效力，蛇紋蝽(Q，30c和6c)對doca -鹽誘導高血壓大鼠血清臨床參數、氧化損傷產物和腎髒抗氧化保護的影響。

材料與方法

動物

雄性Wistar大鼠(鼠形)， 120天大，體重250- 350克，來自印度海得拉巴國家營養研究所，用於本實驗。將大鼠置於本係動物室的聚丙烯籠內(每籠3隻)，籠內采用不鏽鋼料鬥，在25±2°C的受控條件下光照/暗循環12:12 h。對照組和實驗動物提供食物和水隨意．整個實驗是根據印度新德裏動物實驗控製和監督委員會的指導方針進行的，並在實驗規程獲得機構動物倫理委員會的批準後進行。

化學物質

醋酸脫氧皮質酮(DOCA)購自美國密蘇裏州聖路易斯的SigmaAldrich化學公司。順勢療法藥物r . serpentina由德國Dr. Reckeweg & Co公司配製的不同藥效(Q、30c和6c)的藥物均從當地供應商采購。研究中使用的所有其他化學品均為分析級，從印度孟買的西斯科研究實驗室獲得。血清試劑盒購自印度果阿的Coral臨床係統。

單側腎切除術誘發高血壓的方法

大鼠用氯胺酮(50 mg/kg體重)和木lazine (10 mg/kg體重)單次肌注麻醉，如先前報道的[22]。右側腎髒上方皮膚被剃除，清洗並使用殺菌劑。通過側翼切口單側切除大鼠腎，小心保存腎上腺。腎髒被從周圍的組織中解放出來，並被輕輕地取出。用絲線係住腎動脈和輸尿管，取腎。肌肉和皮膚分別用無菌可吸收縫線進行篩分。給藥後給予抗生素(氨苄西林125 mg/kg體重，肌注)，並在切口處噴灑新黴素防止感染。動物康複後用於高血壓誘導及進一步實驗。30隻大鼠中，5隻行假手術，其餘行單側(右腎)腎切除術(UNX)。

高血壓誘導及實驗設計

單側腎切除(UNX)大鼠給予DOCA (25 mg/kg體重，0.1 ml芝麻油/100 g體重皮下注射)一周兩次，每日1% NaCl加入飲用水，誘發高血壓隨意在整個實驗期間[22]。據報道，doca -鹽可增加醛固酮濃度，增加腎小管收集管對鈉離子和水的再吸收，從而增加血容量依賴性高血壓[5-7]。采用尾袖法(Noninvasive blood pressure NIBP)每周監測2次血壓變化。血壓參數升高證實誘發高血壓。

實驗設計用於評價中藥的降壓效果r . serpentina

將大鼠隨機分為6組，每組5隻:假手術及單側腎切除大鼠每周皮下注射2次芝麻油(0.1 ml/100 g體重);

對照組為假手術大鼠(組i)和單側腎切除大鼠(組ii)，分別給予正常飲用水和1% NaCl飲用水，持續65 d。III-VI組給予DOCA (Deoxycorticosterone-acetate, DOCA)和飲用水中1% NaCl，持續35 d誘導高血壓。高血壓大鼠(III組)給予doca -鹽(III組)和1% NaCl的藥物載體，IV-VI組給予doca -鹽(III組)和1% NaCl的治療r . serpentinaQ, 30c和6c，連同DOCA-salt分別進行30天(方案1)。

血壓測量

在實驗開始前，研究人員每周兩次測量大鼠血壓，使用尾袖血壓計(NIBP, IITC, Life Science, USA)。在測量血壓時，將動物置於溫度為30- 34°C的加熱室中15分鍾以穩定血壓。每隻動物記錄1-5個血壓讀數，取最低3個讀數的平均值。所有的測量和分析都是使用計算機化數據采集係統和尾翼血壓計提供的軟件完成的。

血清生化參數估計的樣品製備

實驗結束後，在麻醉(氯胺酮，50 mg/kg體重，xylazine, 10 mg/kg體重)下處死。立即用采血管小心地從斷頭部位采集軀幹血液。然後讓試管在正常室溫下凝固。凝血後，離心得到血清。血清儲存在-80°C的深冰箱中，用於進一步的生化分析。

血清生化參數測定

血清電解質如鈉(Na⁺)，鉀(K⁺)，氯(Cl^-)和鈣(Ca^{2 +})，血清肝髒標誌物酶，如天門冬氨酸轉氨酶(AST)，乳酸脫氫酶(LDH)，堿性磷酸酶(ALP)，穀丙轉氨酶(ALT)，血清生化成分，如尿素，尿素氮，尿酸，肌酐，白蛋白，球蛋白，膽紅素，總蛋白和葡萄糖，根據製造商提供的各自試劑盒的說明進行測量。

方案1:實驗設計用於評價中藥的降壓效果r . serpentina

腎髒生化參數估計的樣品製備

實驗結束後，麻醉下斬首處死動物。在獻祭後，立即取出腎髒，適當清洗並保存在-80°C。10% (w/v)的組織勻漿在冰冷勻漿緩衝液(50 mM磷酸鉀緩衝液，pH 7.4，含250 mM蔗糖)中使用PotterElvejhem型電動勻漿機在4℃下製備，亞細胞組分如前所述[23]。粗勻漿在4℃下以600 × g離心10分鍾，使細胞核和其他細胞碎片顆粒化。上清液在4℃下10000 × g離心20 min，分離線粒體(MF)和上清液。由此產生的上清液稱為線粒體後餾分(PMF)。MF在冰水緩衝液中洗滌三次以去除胞質汙染物，最後溶解在50mm磷酸鹽緩衝液中(pH 7.4)。為了測定抗氧化酶的活性，凍融的MF和PMF樣品通過Sephadex G-25。MF和PMF樣品均用於測定SOD、GPx、GR和GST活性。

氧化損傷產物(脂質過氧化和蛋白質羰基化)的估計

在PMF和MF樣品中測量脂質過氧化水平和蛋白質羰基含量，分別表示為nmol TBARS形成/mg蛋白質和nmol羰基/mg蛋白質，分別為[24]。

測定抗氧化酶活性

超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、穀胱甘肽過氧化物酶(GPx)和穀胱甘肽還原酶(GR)活性如前所述[23,24]。SOD活性以單位/mg蛋白表示。CAT活性以µkatal/mg蛋白表示。GPx和GR活性以nmol NADPH氧化蛋白/min/mg表達。GST活性采用Habig et al.[25]方法測定，活性表達為nmol CDNB共軛蛋白/min/mg蛋白。

RNA分離和半定量RT-PCR

使用Trizol試劑(Invitrogen Bioservices India Pvt. Ltd.)從腎組織中分離總RNA。分離的RNA樣品在RNA酶抑製劑的存在下進行DNase I處理。抗氧化基因引物序列(表1)由美國Integrated DNA Technology公司定製。內標采用G3PDH。用200 ng隨機六聚體、20U RNase抑製劑、1.0 mM dNTPs和40 U M-MuLV逆轉錄酶(Fermentas)在37℃下逆轉錄1小時，將5µg的RNA逆轉錄製備ss-cDNA。將cDNA在94℃PCR 3 min，三步循環，每個循環包括94℃變性30 s，退火30 s, 72℃延伸1 min, 72℃最終延伸5 min。25 μ l PCR混合物由1 μ l RT產物作為模板，2.5 μ l 10x緩衝液，0.2 mM dNTPs, 1.5 mM MgCl組成₂， 1uTaqDNA聚合酶(Fermentas)和每個引物25 pmol。PCR產物在1.2%瓊脂糖凝膠上電泳，用溴化乙錠染色。用密度分析法測定表達量。

組織勻漿製備及western blotting

在50 mM Tris-HCl緩衝液，pH 7.4中製備10%的組織勻漿，含150 mM NaCl, 1% Triton-X-100和0.1% SDS和蛋白酶抑製劑，以避免蛋白質降解。勻漿在4℃下以1000 × g離心20 min。將30µg細胞蛋白在12% SDS-PAGE溶液中溶解後轉移到PVDF膜上(0.4µm, PALL Life Sciences)，在23 mA電流下溶解60 min。將膜在5%的封閉液中室溫封閉1 h，然後與兔多克隆抗g3pdh(1:1000)、antiat(1:5 000)、抗sod1(1:5 00)和抗sod2(1:2500)在室溫下孵育1 h。用洗滌液清洗膜3次，每次5分鍾，然後用hrp標記的抗兔山羊IgG (1:7500 Santa Cruz Biotechnology, Inc.， USA)在室溫下孵育1小時。用洗滌液清洗印跡，用ECL試劑盒(Santa Cruz Biotechnology, Inc.， USA)在x線片上檢測特異性免疫反應蛋白，用密度法檢測表達。

表1:擴增抗氧化基因G3PDH、SOD1、SOD2、CAT、GPx1和GR的接入號、引物序列、退火溫度、結合位置、PCR循環次數和產物大小

組織樣本中蛋白質的估計

以BSA為標準，按Bradford[26]方法進行蛋白測定。

統計分析

western blot條帶和PCR定量采用計算機輔助密度法Image- quant TL, Image Analysis Software v2003。相對密度以AOEs條帶/G3PDH條帶的比值表示。數據以均數±標準差表示。采用單因素方差分析(ANOVA)對結果進行統計學分析，並進行Fisher LSD檢驗，以確定各平均值之間的顯著性水平。p≤0.05時，認為結果有統計學意義。

結果

的影響r . serpentinaQ、30c、6c對大鼠體重及不同器官重量的影響(表2)

實驗結束時，I、II、III、IV、V、VI組大鼠體重差異不顯著。而II、III、IV、V、VI組相對器官重量(腎、肝)均高於I組(假手術對照組)。ⅲ組大鼠腎髒相對重量顯著高於ⅱ組大鼠(1.65倍)。順勢療法藥物的管理r . serpentina與III組相比，IV、V、VI組大鼠的體質量和器官重量均無明顯變化，隻有VI組大鼠的相對腎髒重量顯著升高(1.14倍)。

的影響r . serpentinaQ、30c、6c對大鼠收縮壓、舒張壓、平均血壓和心率的影響(表3)

III組大鼠的收縮壓、舒張壓、平均血壓和心率較I組和II組明顯升高。管理r . serpentina(Q, 30c和6c)導致收縮壓顯著降低(分別為1.15,1.17和1.11倍)。

的影響r . serpentinaQ、30c、6c對大鼠血清電解質的影響(表4)

血清鈉(Na⁺)與I組和II組大鼠相比，ⅲ組大鼠顯著增加(分別為1.8倍和1.2倍)。雖然順勢療法藥物的管理r . serpentina導致V組和VI組大鼠血清鈉水平分別顯著降低1.65倍和1.14倍，IV組大鼠血清鈉水平與III組大鼠相比基本保持不變。血清鉀(K⁺)與I組和II組大鼠相比，III組大鼠的水平沒有變化。IV組和V組大鼠K+水平分別下降1.35倍和1.35倍，而VI組K+水平高於III組(1.53倍)。III組大鼠血清鈣水平較I組和II組大鼠下降1.16倍和1.2倍。順勢療法藥物R. serpentina導致血清鈣(Ca^{2 +}IV組大鼠(1.21倍)和V組大鼠(1.19倍)。

的影響r . serpentinaQ、30c和6c對血清酶參數的影響(表5)

III組大鼠血清AST水平較I組和II組大鼠明顯升高(分別為1.44倍和1.39倍)。與I組和II組大鼠相比，III組大鼠的LDH(分別增加1.86倍和1.95倍)和ALP活性(分別增加1.69倍和1.41倍)也有相同的趨勢。服用R. serpentina 30c後，AST活性降低(1.41倍)，而LDH和ALP均降低r . serpentina(Q, 30c和6c)與doca鹽誘導的高血壓大鼠比較。LDH降低了1.45、1.68和1.51倍，ALP降低了1.12、1.32和1.37倍。與III組doca -鹽高血壓大鼠相比，V組大鼠血清ALT水平顯著降低(1.59倍)。

的影響r . serpentinaQ、30c和6c對血清生化參數的影響(表6)

與I組和II組相比，III組大鼠血清生化指標無明顯變化。IV組、V組、VI組大鼠血清各項生化指標與III組大鼠相比變化不大。然而，尿酸在補充r . serpentina(Q, 30c, 6c)，與III組相比分別降低1.22,1.25和1.46倍。與III組相比，IV組大鼠肌酐降低2.12倍，而VI組大鼠葡萄糖降低1.63倍。III組大鼠膽紅素水平較I組、II組大鼠降低1.33倍、1.26倍。給藥後，IV、V、VI組大鼠膽紅素較III組分別升高1.55、1.21、1.49倍。

表2:蛇紋草Q、30c、6c對doca鹽致高血壓大鼠體重、腎、肝重量的影響
i組假手術對照組+正常飲用水;第二組-腎切除術+1% NaCl;iii組- doca +1% NaCl+Vehicle;iv組- doca +1% NaCl+Q;V-DOCA組+1% NaCl+30c;vi組- doca +1% NaCl+6c。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同字母的數據共享上標在p≤0.05水平上沿行有顯著差異。

表3:蛇紋草Q、30c和6c對DOCAsalt致高血壓大鼠收縮壓、舒張壓、平均血壓和心率的影響
i組假手術對照組+正常飲用水;第二組-腎切除術+1% NaCl;iii組- doca +1% NaCl+Vehicle;iv組- doca +1% NaCl+Q;V-DOCA組+1% NaCl+30c;vi組- doca +1% NaCl+6c。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同字母的數據共享上標在p≤0.05水平上沿行有顯著差異。

表4:蛇紋草Q、30c、6c對doca鹽致高血壓大鼠血清電解質的影響。
i組假手術對照組+正常飲用水;第二組-腎切除術+1% NaCl;iii組- doca +1% NaCl+Vehicle;iv組- doca +1% NaCl+Q;V-DOCA組+1% NaCl+30c;vi組- doca +1% NaCl+6c。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同字母的數據共享上標在p≤0.05水平上沿行有顯著差異。

測量氧化損傷的脂質和蛋白質(圖1)

高血壓大鼠腎髒中TBARS的升高在給藥大鼠中有所降低r . serpentina(Q、30c、6c)， PMF下降1.37、1.42、1.64倍，MF下降1.17、1.38、1.13倍。管理r . serpentina也導致V組和VI組大鼠PMF蛋白羰基水平(分別為1.4和1.3倍)和IV組和V組大鼠線粒體分數(MF)(分別為1.09和1.10倍)較III組大鼠降低。

表5:蛇紋草Q、30c、6c對doca鹽致高血壓大鼠血清酶的影響。
i組假手術對照組+正常飲用水;第二組-腎切除術+1% NaCl;iii組- doca +1% NaCl+Vehicle;iv組- doca +1% NaCl+Q;V-DOCA組+1% NaCl+30c;vi組- doca +1% NaCl+6c。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同字母的數據共享上標在p≤0.05水平上沿行有顯著差異。

表6:蛇紋草Q、30c、6c對doca鹽致高血壓大鼠血清生化指標的影響
i組假手術對照組+正常飲用水;第二組-腎切除術+1% NaCl;iii組- doca +1% NaCl+Vehicle;iv組- doca +1% NaCl+Q;V-DOCA組+1% NaCl+30c;vi組- doca +1% NaCl+6c。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同字母的數據共享上標在p≤0.05水平上沿行有顯著差異。

抗氧化酶活性及表達水平

SOD的表達(圖2):doca -鹽誘導的高血壓大鼠(Q, 30c, 6c)與III組大鼠相比，SOD1轉錄水平顯著升高(分別為1.83,1.79和1.92倍)。III組大鼠SOD1翻譯產物的減少在VI組進一步顯著下降(1.15倍)，即對給予6c效力的大鼠的反應r . serpentina．與I組和II組相比，ⅲ組PMF中SOD活性顯著降低(分別為1.63、1.58倍)，而VI組PMF中SOD活性進一步升高(1.91倍)r . serpentina6 c。IV、V、VI組大鼠中SOD活性較III組明顯下降(分別為1.91、1.91、2.36倍)。管理r . serpentinaQ導致IV組大鼠SOD2轉錄本水平下降1.31倍，V組和VI組翻譯產物下降1.31倍和1.36倍。

CAT表達(圖3):與III組相比，V組和VI組CAT翻譯產物減少(分別為1.31和1.30倍)。治療r . serpentina(Q、30c、6c)可使IV、V、VI組大鼠PMF中CAT活性較III組降低(分別為1.21、1.42、1.40倍)，而IV組大鼠MF中CAT活性較III組升高(1.13倍)。

GPx的表達式(圖4):doca -鹽高血壓大鼠(III組)和經doca -鹽治療後PMF中GPx1基因轉錄水平和GPx活性無變化r . serpentina．在MF中，GPx活性在處理後升高r . serpentina與III組相比，V組和VI組大鼠分別增加了1.15倍和1.26倍。

GR表達式(圖5):ⅲ組大鼠GR基因轉錄水平較ⅰ組增加1.39倍。IV、V、VI組與III組相比，其水平分別降低了1.18、1.27、1.17倍。與III組大鼠相比，V組和VI組PMF的GR活性分別增加了1.21和1.16倍r . serpentinaQ和6c。ⅲ組大鼠的MF中GR活性升高，即使在給藥後也沒有改變r . serpentina．

商品及服務稅的活動(圖5):高血壓大鼠(III組)腎髒PMF中GST活性的升高與I組大鼠(對照組)相比，在蛇紋病治療的Q和6c效力(V組和VI組)中進一步增加(分別為1.15和1.10倍)。用r . serpentinaIV、VI組大鼠中GST活性較III組提高1.22倍、1.12倍。

討論

doca鹽致高血壓大鼠模型是研究不同降壓化合物對高血壓作用[27]的非遺傳高血壓模型。本研究每日口服順勢療法藥物r . serpentina三種藥效(Q、30c和6c)均可顯著降低收縮壓和舒張壓參數。眾所周知，鈉、鉀和鈣等血清電解質在血壓調節中起著重要作用。doca鹽處理的大鼠吸收鈉(Na⁺)和腎髒中的水分，從而導致循環血量依賴性高血壓[29]增加。先前的研究表明，細胞內鈉超載和鉀消耗可能在高血壓[30]的病理生理中起重要作用。在本實驗中，與單側腎切除鹽處理的大鼠相比，doca -鹽處理大鼠的血清鈉水平有顯著上升趨勢。這提示高血壓的誘發。蛇紋草順勢療法的降鈉(V組)和升高鉀(VI組)表明，蛇紋草順勢療法可能有助於doca -鹽誘導的高血壓大鼠血清電解質水平的管理。血清鈣水平與高血壓之間的關係是由幾個作者建立的。據報道，飲食中攝入大量鈣可以防止血壓升高。高鈣飲食可防止doca -鹽和2-K、1C高血壓大鼠心肌血管壁增厚[32]。我們的結果與Takata et al.[33]的結果很好地一致，Takata et al.[33]記錄了高血壓大鼠血清鈣水平的降低。本研究結果表明，順勢療法藥物蛇紋草對高血壓大鼠血清鈣水平的升高有一定的促進作用。

臨床診斷的疾病和損害肝髒的結構完整性通常是通過監測血清AST, LDH, ALP和ALT活性。血清中AST、ALP和LDH水平升高提示DOCA引起的高血壓可能導致肝損傷，導致上述酶從肝細胞滲漏到血流[34]。有趣的是注意到的三種力量r . serpentina(Q、30c、6c)均能保護doca所致高血壓所致肝損傷。

臨床和流行病學研究發現，血清尿酸不僅與痛風發病風險相關，還與高血壓、冠心病、糖尿病[35]的發病風險相關。最近，尿酸被認為在高血壓中有因果作用[36]。許多實驗表明，高尿酸血症通過增加氧化應激和炎症，導致腎髒內皮、小動脈和小管間質損傷[37,38]。醫藥管理，r . serpentina顯著降低高血壓大鼠血清尿酸和肌酐水平。這種血清尿酸可能是doca -鹽誘導的高血壓大鼠[39]發生高血壓的一個促進因素。

圖1:蛇紋草對不同組doca鹽致高血壓大鼠腎髒LPx和PC的影響。I組(假手術對照組，正常飲用水)，II組(1% NaCl腎切除術)，III組(DOCA + 1% NaCl, Vehicle)， IV組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina Q)， V組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 30c)， VI組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 6c)。數據以5隻動物的平均值±標準差表示。不同上標數據間差異有統計學意義(p≤0.05)。

膽紅素是一種有效的生理抗氧化劑，可預防冠狀動脈疾病[40]。血清膽紅素一直被證明與心血管疾病呈負相關。近年研究表明血清膽紅素與糖尿病、體重指數、代謝綜合征[41]等心血管疾病相關因素相關。血清膽紅素水平升高r . serpentina治療組提示該藥可在高血壓狀態下對心髒提供額外的保護。

6c效價可降低高血壓大鼠的血糖水平r . serpentina這與Azmi等人早先的報道[42]相似。作者報道了蛇紋草甲醇提取物對四氧嘧啶誘導的糖尿病大鼠模型具有降血糖作用。這樣的降糖作用有6c的效力r . serpentina可能是由於腸道葡萄糖吸收減少或由於不同組織從血液中攝取葡萄糖增加。

在本研究中，我們發現服用DOCA-salt會增加血壓參數，這與Kwak et al.[43]和Chen et al.[44]之前的研究一致。ROS是細胞代謝的正常產物。自由基介導的脂質過氧化與心血管疾病、癌症、神經係統疾病和衰老等許多疾病的發病機製有關[45,46]。doca鹽處理大鼠腎髒中LPx和PC水平升高提示高血壓氧化應激水平升高。據報道，高血壓與高脂血症有關，高脂血症促進脂質過氧化，增強氧化應激[47]。脂質過氧化產物如4-羥基壬烯醛、丙二醛等與蛋白質的氨基酸殘基共價結合，引起腎髒[48]中蛋白質的氧化修飾。在本研究中，doca鹽高血壓大鼠組織中脂質過氧化和蛋白質羰基含量的升高可能是由於氧化應激的增加。未切除doca -鹽處理大鼠給藥後LPx和蛋白質羰基含量的降低r . serpentina說明該藥具有抗高血壓的抗氧化潛能。

需氧細胞中ROS的過量產生或減少消除可導致ROS的積累引起氧化應激。因此，所有的氧代謝細胞都進化出了抗氧化防禦機製來保護ROS的氧化損傷。據報道，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶[10]可促進doca鹽高血壓大鼠血管超氧化物的形成。長期服用超氧自由基清除劑、tempol或nadph -氧化酶抑製劑、羅布桃素可降低doca鹽高血壓大鼠的收縮壓和減少超氧自由基的生成。抗氧化劑在高血壓狀態下清除ROS和保護細胞免受氧化損傷的作用已經得到了很好的證實。體內存在的酶抗氧化劑包括SOD、過氧化氫酶和穀胱甘肽過氧化物酶，它們通過催化ROS轉化為活性較低的物質[51]，作為對抗ROS的第一道防線。SOD酶能有效地將高活性和有毒的超氧自由基分解成H₂O₂[50]。過氧化氫酶催化有害的過氧化氫分子，並將其轉化為水和氧氣。另一方麵，GPx催化過氧化氫和過氧化氫分子還原為無毒產物。我們的研究表明，不同效力的藥物在活性、轉錄和翻譯水平上對抗氧化防禦酶的表達有不同的調控作用。高血壓組SOD2轉錄水平明顯高於對照組，藥物治療降低線粒體部分mRNA水平和活性。SOD2的翻譯產物也有相同的趨勢。相反，SOD1在轉錄和翻譯水平上的活性呈現相反的趨勢。這些發現可能是由於SOD1在細胞質中有活性，SOD2在線粒體中有活性，兩種酶的啟動子區域有很大差異。我們的發現與Chaves et al.[52]的研究一致。

圖2:r . serpentina效應治療腎髒抗氧化酶的表達SOD1的信使rna (A),翻譯產品(B)和酶活性及(C)控製,騙局,高血壓和r . serpentina治療大鼠和表達SOD2的mRNA水平(D),翻譯產品(E)和酶活性在MF (F)。我集團(虛假的經營控製與正常飲用水),第二組(切除1%生理鹽水),第三組(DOCA 1%氯化鈉、車輛),第四組(DOCA 1%生理鹽水,R. serpentina Q)， V組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 30c)， VI組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 6c)。通過密度分析獲得的mRNA和蛋白質的SOD1/G3PDH和SOD2/G3PDH的定量表示，並表示為任意單位(a.u)。數據以5隻動物的均值±標準差表示。不同上標數據間差異有統計學意義(p≤0.05)。

圖3:蛇紋草處理對對照、假手術、高血壓和蛇紋草處理大鼠腎抗氧化酶CAT mRNA表達(A)、PMF酶活性(B)、翻譯產物(C)和MF酶活性(D)的影響I組(假手術對照組，正常飲用水)，II組(1% NaCl腎切除術)，III組(DOCA + 1% NaCl, Vehicle)， IV組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina Q)， V組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 30c)， VI組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 6c)。通過密度分析獲得的mRNA和蛋白質的CAT/G3PDH的定量表示，並表示為任意單位(a.u.)。數據以5隻動物的均值±標準差表示。不同上標數據間差異有統計學意義(p≤0.05)。

線粒體呼吸因DOCA-salt[53]而加速，這是一個公認的事實。細胞呼吸的增強通常與泛素[53]位點超氧自由基的產生增加有關。我們的結果表明，抗氧化酶的變化響應r . serpentina對doca鹽處理大鼠的治療是通過不同的調節途徑調節的。r . serpentina保護大鼠腎髒免受doca -鹽高血壓引起的氧化應激。然而，不同的效力r . serpentina它們對高血壓大鼠氧化應激參數和抗氧化防禦係統的影響不同。

我們研究的總體結果表明，蛇紋草(Q, 30c和6c)可以降低血壓，從高血壓大鼠的血壓降低中可以明顯看出這一點。我們，第一次觀察到順勢療法的藥物r . serpentina(Q、30c和6c)能有效降低高血壓，其中Q效價調節血壓的效果最好。血清生化指標顯示，未顯示對器官有任何藥物毒性作用。r . serpentina在本研究中也表現出抗氧化潛力，因為它可以減弱doca -saltin所致高血壓大鼠腎髒的氧化應激指數。因此，蛇紋草具有抗高血壓和抗氧化特性，這從藥物治療對血壓、氧化應激參數的顯著降低和酶抗氧化劑的調節中得到了證明。這些結果為使用這種順勢療法製備的藥物來預防高血壓和相關的氧化應激提供了重要的藥理學基礎。

確認

這項工作是由印度政府新德裏衛生和家庭福利部AYUSH部門的順勢療法研究中央委員會額外壁畫研究項目慷慨資助的(F. 23-94/2006-07/CCRH)。科技/ EMR / 1330。Dt。10.01.2008)。我們非常感謝印度布巴內斯瓦爾A.C.H.醫學院和醫院院長，以及印度布巴內斯瓦爾烏特卡爾大學生物技術研究生部主任，允許進行這項研究並提供實驗室設施。作者還感謝DST-PUSRE贈款(印度州長)對布巴內斯瓦爾烏特卡爾大學生物技術係的支持。

圖4:蛇紋草處理對對照組、假手術、高血壓和蛇紋草處理大鼠腎抗氧化酶GPx mRNA水平表達(A)、PMF酶活性(B)和MF酶活性(C)的影響組I(假手術對照組，正常飲用水)，組II (1%NaCl腎切除術)，組III (1%NaCl DOCA, Vehicle)，組IV (DOCA, 1%NaCl, R. serpentina Q)，組V (DOCA, 1%NaCl, R. serpentina 30c)，組VI (DOCA, 1%NaCl, R. serpentina 6c)。通過密度分析獲得的mRNA的GPx/G3PDH的定量表示，並表示為任意單位(a.u.)。數據以5隻動物的均值±標準差表示。不同上標數據間差異有統計學意義(p≤0.05)。

圖5:蛇紋草處理對腎抗氧化酶GR mRNA表達(A)、PMF酶活性(B)和MF酶活性(C)的影響;對照組、假手術組、高血壓組和蛇紋病組大鼠PMF (D)和MF (E)中GST酶活性。I組(假手術對照組，正常飲用水)，II組(1% NaCl腎切除術)，III組(DOCA + 1% NaCl, Vehicle)， IV組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina Q)， V組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 30c)， VI組(DOCA + 1% NaCl, R. serpentina 6c)。通過密度分析獲得GR/G3PDH mRNA的定量表示，並表示為任意單位(a.u.)。數據以5隻動物的均值±標準差表示。不同上標數據間差異有統計學意義(p≤0.05)。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:張曉明，張曉明，張曉明，等。(2016)鹽致高血壓大鼠模型中抗氧化酶的表達及其對血壓和腎髒氧化應激的影響。J藥品開發2(1):http://dx.doi.org/10.16966/2470-1009.111

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出版的曆史:

收到日期:10月14日

接受日期:1月11日

發表日期:2016年1月15日