文摘

矯正治療在美國已經成為常規的青少年和成年人增加。盡管有這些積極進展,矯正治療經常被與口腔環境的變化有關,這可能會增加疾病風險。盡管許多研究都證明變異鏈球菌和腐爛的損害之間的因果關係,最近的證據表明,它隻更大的口腔微生物群落的組成部分。最近的一些研究已經證明了新特征的存在生齲齒的病原體,厭氧的革蘭氏陽性杆菌Scardovia wiggsiae。以前收集唾液樣本的回顧性研究起源於兒童和成人患者的便利樣本,以前招募了內華達拉斯維加斯大學的Vegas-School牙科醫學(UNLV-SDM)診所。超過一百份唾液樣本從成人矯正(n = 49)和non-orthodontic(52例)患者選擇包括在這項研究中。DNA提取這些樣本隨後使用PCR篩選,顯示存在的變異鏈球菌(SM), p . gingivalis (PG)和美國wiggsiae (SW),不同於流行non-Orthodontic和矯正患者。non-orthodontic患者幾乎所有的PG-positive和SW-positive樣本也SM-positive樣本。然而,矯正患者,沒有SW-positive樣本SM -或PG-positive。此外,進一步分析人口統計變量的顯示decayed-missing-filled牙齒(DMFT)得分,牙周袋深度(產後抑鬱症),年齡,性別,和BMI組間沒有變化,建議繼續研究在這一領域還需要解釋這些發現。

關鍵字

Scardovia wiggsiae;齲齒;口腔正畸學

介紹

矯正治療已成為常規,大約1%的年輕人(30歲以下)和近20%的青少年接受某種形式的矯正治療在任何給定的時間在美國[1,2]。盡管有這些令人印象深刻的進步矯正治療的流行在美國,仍然存在許多差距改善缺醫少藥,包括少數民族、保額不足和沒有保險[3 - 5]。許多矯正和其他牙科專業項目正在積極尋求低收入、少數民族和缺醫少藥人群不僅為了改善口腔衛生保健,但促進口腔健康意識,增加教育和其他資源(6 - 8)。

盡管有這些積極的發展和增量改進步驟訪問,矯正治療經常被與口腔黏膜變化有關,齒齦和微生物群落,這可能會增加疾病風險(9、10)。更具體地說,許多研究生成和評估證據有關的風險增加齲齒病變在矯正治療,這可能會不成比例地影響這些缺醫少藥,低收入和少數民族人口(11 - 13)。事實上,這個研究小組創造了幾項研究口腔健康的少數民族和在兒科服務不足,成人和矯正的人口在過去的幾年裏,清楚地表明這些病人可能患口腔並發症由於訪問障礙,低水平的健康素質,降低訪問預防性牙科保健,和生齲齒的負擔增加,牙周和其他口腔病原體(6、7、14 - 16)。

盡管大量研究表明變異鏈球菌和齲齒病變之間的因果關係,最近的證據顯示生齲齒的病原體,如變異鏈球菌、構成更大的口腔微生物群落的一部分,可能不成比例地影響齲齒的風險當次要成分變得不平衡,這一過程稱為失調(17、18)。這些微生物物種是眾所周知的和被廣泛研究的背景下生齲齒的過程,包括鏈球菌、乳酸菌、韋永氏球菌屬、放線菌種類[19]。然而,最近的一些研究已經證明了新特征的存在生齲齒的病原體,厭氧的革蘭氏陽性杆菌Scardovia wiggsiae [20]。

盡管齲齒研究的廣度,這些最近的研究已經證明,這些先前未被發現的(小說)生齲齒的病原體,如美國wiggsiae可能出現在口腔和可能帶來額外的風險和可能改變當前的理解齲齒篩查(第23 - 25)。然而,隻有少數初步研究都集中在這個新發現的生物,這個生齲齒的潛在生物可能在矯正治療當生齲齒的風險相對較高(23日25)。基於證據的缺乏,本研究的目標是屏幕唾液從成人矯正患者評估的患病率美國wiggsiae與一群成年患者沒有矯正裝置。收集的數據可能成為首批評估這種生物的存在在一個矯正人口公共牙科學校,主要是少數民族和缺醫少藥的病人。

材料和方法

人類被試

回顧性研究的協議,是目前對以前收集唾液樣本題為“口腔微生物的患病率在唾液內華達拉斯維加斯大學的(UNLV)牙科醫學院(SDM)小兒和成人臨床人口”(協議# 1502 - 5068 m)審核並批準UNLV辦公室保護研究對象(超載比)機構審查委員會(IRB) 2月6日,2015年。

研究設計

這項回顧性研究,是目前對以前收集唾液樣本起源於兒童和成人患者的便利樣本,以前從UNLV-SDM診所招募。簡而言之,所有參與者先前提供知情同意之前收集的人口統計信息和唾液樣本。排除標準包括病人(或其指定的監護人)拒絕參與。

唾液收集

在最初的研究中,協議,同意了牙科患者給予無菌50毫升唾液收集容器一個樣本。樣本存儲在冰直到轉移到生物醫學實驗室篩選和分析。這些樣品有一個獨特的,隨機生成的數字防止研究偏見和任何識別信息披露。病人也收集人口和健康信息和考慮到匹配隨機生成的數字分析的目的,但沒有特定的識別信息隨後被用於任何研究小組成員。

細胞計數和DNA隔離

在本研究中,所有以前收集唾液樣本,含有脫落上皮細胞和細菌細胞,離心10分鍾2100 g (RCF)和顆粒洗1 x磷酸鹽(PBS)(美國猶他州Hy克隆:洛根)和resuspended 5毫升1 x PBS。上皮細胞數量決定使用錐蟲藍(費舍爾科學:公平的草坪,新澤西,美國)使用蔡司Axiovert 40倒置顯微鏡(Carl Ziess公司:Thornwood,紐約,美國)和血細胞計數器(費舍爾科學:公平的草坪,新澤西,美國)。確定任何存在感興趣的生齲齒的病原體——樣品美國wiggsiae或西南,DNA被隔離的唾液樣本使用DNA基因組預科隔離設備(Amersham生物科學:白金漢郡,英國)和程序製造商推薦的血液和組織,建議至少3.5×10⁵細胞(14 - 16)。DNA resuspended並存儲在50µL DNA水化溶液(Amersham生物科學:白金漢郡,英國)4 c。DNA純度計算使用比率測量吸光度在260和280海裏(A260 / A280比率在1.59和2.0之間)。

引物聚合酶鏈反應(PCR)

每個樣本的DNA被用來執行PCR與費舍爾exACTGene完成PCR試劑盒(費舍爾科學:公平的草坪,新澤西,美國)和Mastercycler梯度thermocycler(埃普多夫:漢堡,德國)使用以下引物美國wiggsiae,變異鏈球菌,p . gingivalis,16 s rRNA和甘油醛- 3 -磷酸脫氫酶

(GAPDH) (SeqWright:休斯頓,德克薩斯州,美國)(14、16、20、21):
GAPDH正向引物ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH反向引物ACCACTGACACGTTGGCAGT;
16 s rRNA通用引物ACGCGTCGACAGAGTTTGATCCTGGCT;
16 s rRNA通用引物GGGACTACCAGGGTATCTAAT;
變異鏈球菌正向引物,GCCTACAGC TCAGAGATGCTATTCT;
變異鏈球菌反向引物GCCATACACCACTCATGAATTGA;
p . gingivalis正向引物TACCCATCGTCGCCTTGGT;
p . gingivalis反向引物CGGACTAAAACCGCATACACTTG;
美國wiggsiae正向引物GTGGACTTTATGAATAAGC;
美國wiggsiae反向引物CTACCGTTAAGCAGTAAG;

DNA標準:GAPDH

DNA標準從標準化控製細胞,人類牙齦成纖維細胞(0.3 - -0.5×10⁶細胞/毫升),近似的細胞濃度範圍觀察唾液樣本用於建立最低閾值(CT)和飽和(CS)周期校準和使用相對濃度比較所需端點PCR (RE-PCR)。GAPDH信號檢測以上背景或CT至少需要十個周期(C10),與飽和或CS網觀察到。

DNA標準:SM和PG

此外,口腔細菌細胞係變形鏈球菌(變異鏈球菌或SM)(國家反恐怖主義中心的- 10449)和Porphyromonas gingivalis (p . gingivalis或PG) (fdc - 381)也寫明ATCC(馬納薩斯,弗吉尼亞州)獲得。總之,細胞被解凍,條紋和各自的平皿上培養Difco(火花,MD)根據製造商協議[14]。每個被鍍的殖民地,一夜之間長大Trypticase大豆瓊脂37攝氏度;SM盤子補充5%去纖維蛋白的羊的血液和PG盤子補充酵母提取物為1%。單盤殖民地然後選擇和接種到液體肉湯文化;Trypticase醬油湯對SM和補充大豆胰蛋白酶的肉湯PG然後孵化一夜之間在37攝氏度。整除的細菌懸浮液隨後被用來接種生長標準。標準曲線創建使用光譜光度測量的吸光度的測量光密度(OD)在650 nm和枚舉的集落形成單位(CFU) (14、24)。

濁度產生的OD 0.8與5.0×10⁷對細菌細胞CFU /毫升線使用。連續稀釋準備最終濃度為5.0×10⁶,10⁵,10⁴和10³CFU /毫升建立RE-PCR SM和PG相應標準的最新理解微生物唾液濃度作為疾病的生物標記物(包括齲齒)的風險,這是:10⁶CFU /毫升=非常高的風險;105 CFU /毫升=風險高;10⁴CFU /毫升=中等風險,< 10³CFU /毫升=正常或平均風險[14日,26日,27日]。SM和PG信號檢測或CT高於正常或平均風險需要至少25周期(這件),與飽和或在C45 CS觀測。基於CT數據GAPDH C10和SM和PG這件,RE-PCR C30,執行以上檢測下限(CT),但低於觀察到的飽和限製(C45-C50)。

聚合酶鏈反應(PCR)

模板DNA的一個µg然後用於每一個反應。最初的變性一步跑三分鍾在94°C。總共30放大周期(C30)運行,包括30秒94°C的變性60秒58°C的退火和30秒的擴展在72°C。最後擴展運行五分鍾在72°C。PCR反應產物被凝膠電泳分離使用4%的依賴NuSieve®3:1 +瓊脂糖凝膠(美國緬因州Lonza:大)。樂隊是由紫外線光照ethidium-bromide-stained啫喱和捕獲的可視化使用柯達凝膠成像係統邏輯100和1 d圖像分析軟件(美國伊士曼柯達公司:羅徹斯特,紐約)。

統計數據

確定適當的樣本量為這種類型的PCR篩選微生物組合使用從唾液中提取DNA, sample-limited一步的DNA提取的回收率(90 - 95%)用來建立最低預期差異0.10或10% [28]。使用顯著性水平α= 0.05,p = 0.80,最低50 (N = 50)的樣本大小計算[29]。關於樣本描述性統計人口報告,和卡方(χ²)分析確定任何顯著差異在人口統計人口樣本組和診所。

結果

超過一百的唾液樣本成人矯正(n = 49)和non-orthodontic(52例)患者選擇列入本研究(表1)。所有樣本的人口統計細分結合幾乎是同樣分為雄性和雌性(51.5%,49.5%),和non-minority之間(白色)和少數族裔(西班牙人,黑人,亞洲人/其他)(55.4%,44.6%)。分布從矯正診所的更詳細的分析揭示了樣品含有更多的女性(61.2%)比男性(38.8%)、矯正診所內的總體布局相似的人口(p = 0.9482)。種族和民族的評價樣本的人口統計顯示近一半non-minority病人(48.9%),明顯高於在整個矯正診所人口(35.1%)和具有統計學意義(p < 0.0001)。

表1:研究樣本的人口統計分析

的比較或對照組成人non-orthodontic樣本是由更少的女性(42.3%)比男性(47.5%),這是不同的比他們幾乎相等的人口主要分布在診所,(p < 0.0001)。此外,這種分析揭示了大多數樣本從non-minorities(61.5%),這是不同的從主診所人口也具有統計學意義(p < 0.0001)。

每個選定的唾液樣本處理為後續使用PCR篩選分離DNA(表2)。使用先前建立協議和方法,DNA被成功分離出所有矯正和non-orthodontic唾液樣本,收益率100%的回收率(n = 101),這是在可以接受的範圍之內,為DNA複蘇根據製造商(95 - 100%),類似於以前的研究結果(14 - 16、24)。DNA濃度範圍從平均163.1 ng / uL的矯正樣本的172.4 ng / uL non-orthodontic患者樣本。DNA純度計算使用比率測量吸光度在260和280海裏(A260 / A280比率),介於1.59和2.0之間。所有樣品的處理使用PCR顯示人類的存在(GAPDH)和細菌(16 s rRNA) DNA。

DNA提取這些樣本隨後使用PCR篩選,顯示存在的變異鏈球菌(SM), p . gingivalis (PG)和美國wiggsiae (SW),不同於流行non-Orthodontic和矯正患者(圖1)。例如,SM患者的比例明顯高於矯正患者(69%)高於對照組(58%)。類似的結果觀察與PG,露出明顯更大比例的患者矯正PG(55%)相比,non-Orthodontic患者樣本(25%)。然而,SW篩查結果顯示矯正患者樣本之間的患病率較低(14%)比nonOrthodontic對照組(19%)。這些樣品組之間的差異(矯正,Non-Orthodontic)被發現具有統計學意義(p < 0.05)。

進一步分析這些結果,每個樣品的交叉引用,以確定是否有任何一個或多個樣本陽性(multi-positive)的病原體評估(圖2)。這些結果表明,在58%的Non-Orthodontic SM(控製)樣品測試陽性,21%是multi-positive SM和PG,另有15%是SM和SW積極和一小部分SM-PG-SW是積極的(圖2)。幾乎所有的PG-positive和SW-positive樣本SM-positive樣本中被發現(圖2 b),這表明近三分之二(58%)的36% multi-positive演示結果。

相比之下,一個更高比例的矯正樣本陽性SM(70%),盡管隻有一小部分(22%)也發現multi-positive(圖2)。此外,更高的百分比PG-positive樣品(55%)在矯正樣品隻有部分重疊的SM-positive樣本。出乎意料地,沒有一個SW-positive樣品被發現是SM或PG-positive(圖2 d)。

表2:DNA隔離和恢複

圖1:

確定協會與其他人口和健康的關係變量,數據排序根據PCR篩選結果(表3)。這一分析顯示,decayed-missing-filled牙齒(DMFT)得分沒有顯著變化之間的SM - PG -,或從Non-Orthodontic SWpositive樣本和矯正樣本。另外,牙周袋深度之間沒有顯著差異被發現(產後抑鬱症)當比較SM - PG和SW-positive這兩組樣本。然而,進一步分析表明DMFT分數和產後抑鬱症在PG-positive樣本與SM -相比,高或multi-positive樣本——無論樣本來自矯正或Non-Orthodontic樣本。最後,DMFT SW-positive樣本之間的分數高於從SM - PG -和multi-positive樣本和產後抑鬱症比SM -或multi-positive樣本。沒有其他的變量,包括年齡,性別或BMI從總體樣本人口顯著不同。

討論

本研究的目標是屏幕唾液從成人矯正患者評估SW的患病率與一群成年患者沒有矯正裝置。這項研究的結果清楚地表明,口腔病原體不同的患病率顯著的差異這兩個患者樣本——揭示發病率相對較高的SM和PG矯正樣本。有趣,SW患病率顯著低於矯正樣本——發現這可能是違反直覺的基於可用的信息關於這個生齲齒的有機體(22、25)。

進一步的分析表明,這些樣品multi-positive NonOrthodontic組,與幾個不同的病原體檢測的組合。此外,絕大多數的樣本PG -或SM-positive也發現SM-positive唯一,陽性組窩藏SM。與矯正樣本之間的研究結果相反,然而,沒有一個SWpositive樣本被發現港口或SM - PG。此外,一個更大比例的PG-positive樣品沒有港口SM。當結合的整體比例SM和PG在這一群體中,這些數據可能表明中斷在整個口腔生態係統可能促進特定類型的口腔微生物過度生長,與相應的競爭生物體的整體發病率的下降。

最後,數據顯示,DMFT得分和產後抑鬱症中更高的PG -和SW-positive樣本與SM和multi-positive樣本。之前的數據顯示,DMFT得分和產後抑鬱症常常是口腔健康的指標和缺醫少藥,少數患者可能更高,數據收集的研究可能有助於鞏固和加強口腔衛生的解決這些重要的提供者增加知識和意識問題和降低牙科準入壁壘和護理(5 - 8)。雖然數據不建議矯正內SW患病率的增加人口,這些可能是最早發現矯正療法可能足以破壞口腔生態和生態係統足以創造條件,支持一個主要類型的生齲齒的生物體,如SM或SW -而不是兩個。數據尤其有價值的,因為它有助於評估SW的存在在一個矯正服務主要少數民族人口在公共牙科學校和服務水平低下的患者(6、7、14、15)。

圖2:

表3:協會和與其他人口和健康變量之間的關係

SW的大多數其他研究都涉及鑒定或檢測的生物從兒童嚴重兒童早期齲齒(SECC) [20]。此外,最近的研究西南涉及檢測SW直接從齲齒病變(23、30、31),隻有一個迄今為止的研究包括任何患者矯正裝置[25]。然而,這項研究評估SM和SW和協會白斑病變(WSL)齲齒發展一個已知的危險因素,但沒有提供任何數據分析SM或SW患者個體的存在。目前的研究是迄今為止唯一的研究提供任何證據來描述個體的口腔微生物構成SW-positive矯正患者,提供了一些證據表明一部小說,從沒被破壞的現象,這種口腔生態可能足以支持SM或SW增長創造條件,而不是兩個。

盡管這些發現可能成為首批屏幕s wiggsiae矯正和Non-Orthodontic病人,有一些限製需要考慮未來的這種性質的研究。首先,使用現有的唾液庫限製的一些結論,可以從這些觀察基於回顧性研究設計。此外,盡管最初收集協議包括矯正和Non-Orthodontic病人,這些研究依賴自願參與者的便利樣本沒有隨機選擇,因此可能隱含的自我選擇偏見(12、14)。此外,這些患者樣本被收集在一個時間點,這意味著沒有時間的結論可以對觀察到的口腔微生物流行。

基於研究設計盡管有這些限製,這些發現是小說,可能是臨床意義重大,這表明前瞻性研究的規劃和實施評估任何時間更改在這些人群。數據可以說明這一現象和描述任何時間隨著時間的變化是至關重要的。這種類型的研究,最早一個試點研究設計使用現有的唾液樣本是最好的可用選項提供一個初始基線篩選在這個患者人群和提供了關鍵的證據tosuggest繼續在這個領域研究的必要性。

引用

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Aritcle類型:研究文章

引用:Streiff BJ, Seneviratne M,金斯利K(2015)篩查和流行小說的生齲齒的病原體Scardovia wiggsiae成人矯正和Non-Orthodontic病人唾液樣本。Int J影響口腔健康1 (6):doi 7090.159 http://dx.doi.org/10.16966/2378

版權:©2015 Streiff BJ,等。這是一個開放的文章下分布式知識共享歸屬許可條款,允許無限製的使用、分配、和繁殖在任何媒介,被認為提供了原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2015年9月22日

接受日期:2015年11月28日

發表日期:2015年12月7日