臨床研究:Open Access-Sci Forschen

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研究文章
芝麻籽乙醇提取物Effects對酮康唑所致雄性Wistar大鼠睾丸損傷的組織學和精子濃度的影響

優素福可Ibegbu AOAlawa約伊卜拉欣-莫Evang一

尼日利亞艾哈邁杜貝洛大學醫學院人體解剖係

*通訊作者:王曉明,王曉明,王曉明,王曉明,王曉明,等。(2018)芝麻籽乙醇提取物對酮康唑致雄性Wistar大鼠睾丸損傷的影響。clinin Res Open Access 4(4):電子郵件:maylkabiru2008@yahoo.com;maylkabiru2014@gmail.com


摘要

目的:本研究旨在評價枸杞乙醇提取物的作用胡麻屬indicum酮康唑誘導Wistar大鼠睾丸損傷。

方法:48隻成年雄性Wistar大鼠被分為8組,每組6隻。第1、2、3、4、5、6、7、8組大鼠分別給予生理鹽水1 ml,酮康唑純製劑100 mg/kg體重(bwt),枸杞醇提物500 mg/kg bwt胡麻屬Indicum(EESI)種子則100 mg/kg體重的酮康唑,100 mg/kg體重的酮康唑則250 mg/kg體重的EESI種子,100 mg/kg體重的酮康唑則500 mg/kg體重的EESI, 100 mg/kg體重的酮康唑則0.36 mg/kg體重的Mesterolone, 0.36 mg/kg體重的Mesterolone, 500 mg/kg體重的EESI。所有給藥均為口服,每天1次。對睾丸進行組織病理學和精液分析。

結果:與對照組和僅給酮康唑組大鼠相比,EESI組大鼠在給酮康唑前精子濃度顯著升高,睾丸細胞組織結構增強(p≤0.05)。

結論:乙醇提取物胡麻屬indicum種子通過改善治療組的細胞結構來提高精細胞濃度並改善酮康唑對睾丸的毒性作用。

關鍵字

評估;胡麻屬;酮康唑;睾丸;老鼠


簡介

已知毒素,如藥物、化學物質、內分泌幹擾物、生物基因工程的西方飲食和生活方式等因素會影響正常的身體功能,尤其是生殖健康。酮康唑是一種抗真菌藥物,用於治療真菌感染,如母細胞菌病、組織胞漿菌病、球孢子菌病和對球孢子菌病[2]。

酮康唑以片劑、藥膏和注射劑的形式進行藥物包裝,據報道,酮康唑以劑量依賴的方式抑製人類絨毛膜促性腺激素對睾丸睾酮產生的刺激[3]。類固醇如二氫睾酮和雌二醇被酮康唑[4]選擇性地從血清結合球蛋白中取代。抑製睾丸睾酮合成和從性激素結合球蛋白中取代雌激素可能會降低血液中的雄激素/雌激素比率,並有助於在一些酮康唑治療的患者中發生婦科乳房發育症[4]。酮康唑可改變精子指數,並引起嚴重的組織病理學病變,如生殖細胞耗竭,輸精管變性,睾丸脂質明顯氧化損傷和天然抗氧化劑[2]的改變。

多年來,已經有越來越多的科學研究,以盡量減少一些毒素增強的健康危害,這是從植物物種[5]中提取的植物化學物質。為了消除其中一些合成藥物的禁忌症,在非洲許多地區和世界其他地區,植物藥物已被用作替代品[6]。

除非傳統醫學與正統醫學相輔相成[6],否則非洲無法實現有效的保健。至少80%的非洲人依賴植物藥物進行醫療保健。水果和蔬菜被認為是多種生物活性化合物[8]的天然來源。水果和蔬菜的生物活性特性可以歸因於它們的植物化學成分,如類黃酮、花青素、維生素C和E、酚類化合物、膳食纖維和類胡蘿卜素[9]。芝麻就是其中的一種蔬菜植物,它的分類順序是鱗莖科,屬是胡麻屬種屬為indicum。芝麻以棕色、黑色和黃色的形式存在,在豪薩語中被稱為ridi,在約魯巴語中被稱為Ekuku,在伊博語中被稱為Isasa,在尼日利亞的埃比拉語中被稱為go-ri-go。

芝麻種子油作為治療油已經使用了數千年,它天然具有抗菌的特性,對常見的皮膚病原體,如葡萄球菌而且鏈球菌物種.它還具有抗真菌,抗病毒和抗炎作用[2]。整個芝麻植物非常有價值,是尼日利亞中北部和西南部大多數民族的主食,這可能是由於這些地區成年男性的高生育率[10]。

材料與方法
種子采購和鑒定

470克胡麻屬indicum種子來自尼日利亞卡杜納州薩馬魯市場紮裏亞,並在紮裏亞阿默杜貝洛大學生物科學係植物標本室進行了鑒定,並分配了憑證編號。4.用95%乙醇浸漬種子,得到溶劑形式的提取率為46.42 g的提取物。

藥物及試劑

由Divine New Favour Pharmaceuticals (Anambra State)和Bayers Pharmaceuticals(英國)生產的200 (200)mg酮康唑片和25 mg Provirone片(Mesterolone)分別從Micro novo Pharmaceutical Company Plc購買,批號為82339737和400 8500 060056,NAFDAC號為A4-2186和04-1300。尼日利亞卡諾州的卡諾

方法

芝麻的提取:470克芝麻種子在浸漬裝置中浸漬。將芝麻倒入2毫升浸漬器(Pyrex)中,手動去除籽皮。浸泡過的種子隨後被轉移到3.5 L的燒杯中,其中含有95%v/v的乙醇,以去除類黃酮和木脂素。攪拌後放置6小時,以提取極性物質。用金屬篩篩掉上清液,濾液收集到單獨的燒杯中。用抹刀將濾液收集到蒸發皿中,置於水浴中,加熱至60℃以完全去除乙醇。提取物保存了18個小時,以使其蒸發。溶劑形式的萃取物屈服質量為46.42g。(圖1)

圖1:動物團體及其行政機構。

實驗的程序

在整個實驗期間,每周記錄各組動物的體重,並計算各組的平均體重。LD50乙醇提取物胡麻屬indicum對wistar大鼠進行種子處理,發現其含量高於5000 mg/kg BWT[11]。

1組大鼠在整個實驗期間給予生理鹽水1 ml,使大鼠保持正常生理狀態;2組大鼠給予酮康唑100 mg/kg bwt,按照阿明[2]的方法給予;第3組為預防組,給予枸杞乙醇提取物500 mg/kg體重胡麻屬indicum4、5組分別為治療用低、高劑量組。各組給予酮康唑片100 mg/kg bwt,並給予酮康唑醇提物(250/500)mg/kg體重胡麻屬indicum種子,分別。第6組患者給予酮康唑100 mg/kg bwt,並以酮康唑酮(睾酮)0.36 mg/kg bwt作為標準藥物。第7組給予甲酮酮0.36 mg/kg bwt,研究甲酮酮對Wistar大鼠睾丸的影響,並進行比較。8組大鼠給予枸杞乙醇提取物500 mg/kg體重芝麻種子(表1)。

S / N 給藥劑量/持續時間
1 正常的控製 在實驗期間,每天1毫升生理鹽水-18年th實驗當天)
2 不正常的控製 酮康唑(100 mg/ kg bwt)每日一次,連續五(5)天(14th-18年th實驗日)
3. 預防組 乙醇提取物500mg /kg BWT芝麻indicum種子
13天(1-13年th試驗日)+100 mg/kg BWT酮康唑,持續(5)5天。(14th-18年th實驗當天)
4 治療性低劑量組 酮康唑100mg /kg bwt(5) 5天(15th試驗日)+ 250 mg/kg BWT的乙醇提取物芝麻indicum種子每天一次,連續13天(6th- 18th實驗日)
5 治療性高劑量組 酮康唑100 mg/kg bwt,連續(5)5天(試驗的第1 -5天)+乙醇提取物500 mg/kg bwt芝麻indicum種子13天(6th-18年th實驗當天)
6 酮康唑和甲酮 酮康唑100 mg/ kg bwt, 5天(15th+ 0.36 mg/kg bwt Mesterolone,每天1次,連續13天(6th-13年th實驗當天)
7 美睾酮 0.36 mg/kg bwt美斯酮,每日1次,連續13天(6th-18年th實驗當天)
8 芝麻僅種子提取物 芝麻籽乙醇提取物500 mg/kg bwt,僅持續13天(6th-13年th實驗當天)

表1:動物團體及其行政機構。
所有的管理都是經胃進行的,所有的動物都在同一天被犧牲。

所述藥物和芝麻提取物的等效劑量;單位為ml(毫升),由以下公式推導:

\[體積= \frac{{劑量\乘以重量\左({kg} \右)}}{{庫存\,濃度}}\]

乙醇提取物的當量劑量,單位為毫升胡麻屬indicum種子計算如下:500 mg/kg bwt=500 mg=1000 g,實驗開始時大鼠平均體重為180 g;因此,體重為180 g的大鼠給藥劑量(×)計算為:

\[體積= \壓裂{{500 \毫克/公斤\ * 0.180公斤}}{{\ 128.3毫克/毫升}}\]

高劑量組為500mg /kg BWT,體積為0.70 ml。采用類似方法計算低劑量組(250 mg/kg bwt)的體積,得到0.35 ml。片劑為25毫克,這是成人(平均體重=70公斤)的推薦劑量。

由此,計算每1公斤的給藥劑量如下所示。

25毫克(甲酮)=70;公斤= 70000克;因此,每1kg = 1000g的劑量(x)計算如下:

\ [x = \壓裂{{25毫克\ * 1,000年{\ rm{}}}}{{70年,000年{\ rm{}}}} = 0.36毫克/公斤\ bwt \]

根據上述計算,體重為180克的大鼠的給藥劑量為:

\[\壓裂{{0.36毫克\乘以180 g}} {{1000 g}} = 0.065毫克\]

早些時候,有報道稱,美斯酮的包裝形式是每片25毫克。

將片劑溶解在10毫升蒸餾水中,以獲得2.5 mg/ml的濃度。以上,2.5毫克包含在1毫升,x毫升將包含0.065毫克。通過計算,

X =0.065/2.5=0.026 ml,因此用微量移液管測量0.026 ml,其中含有0.065 mg的美斯酮片,並給予大鼠。

動物祭祀

采用灌注法人道處死動物;左側睾丸固定於Bouin液中進行常規組織學分析,並用蘇木精和伊紅染色(H&E)。周期性酸性希夫(PAS)和馬鬆三色(MT)汙漬。取左側睾丸附睾,浸於5ml正式生理鹽水中,測定精子參數。采用改進的Neubar血細胞計計數室,按照[12]進行精液分析。

統計分析

所有數據均以均數±均數標準誤差(SEM)表示。采用單因素方差分析(One Way Analysis of Variance, ANOVA)比較兩組間及組內的平均差異,p值≤0.05為有統計學意義,采用事後分析(post-Hoc)表示有顯著性差異。使用統計軟件包服務解決方案(SPSS 20)進行統計分析。

結果

組織學觀察(板I-VIII)

板我:第1組睾丸切片(0.9 ml生理鹽水,口服,持續18天),顯示睾丸組織學正常。
SC:精子細胞;IC:間質細胞;IGC:未成熟生殖細胞,ST:生精小管。
舒木素和Eousin × 400。

板塊二:第2組睾丸組織切片(100 mg/kg bwt Tab。酮康唑,口服5天)顯示退化的精子細胞和退化的間質細胞/膜,(Masson Trichrome × 400)。

第三板塊:第3組睾丸切片(500 mg/kg bwt的乙醇提取物胡麻屬indicum種子;口服,13天和100毫克/公斤體重的Tab。酮康唑)顯示睾丸組織結構完整,間質細胞輕度退變(H & E × 400)。ST:輸精管。

第四板塊:第4組睾丸切片(酮康唑100mg /kg bwt;口服5天,250毫克/kbw胡麻屬indicum種子13天)。顯示間質襯裏逐漸恢複(馬鬆三色染色× 400)。ST:精孔小管;集成電路:Interstistium;IL:間質襯。

板V:第5組睾丸切片(100 mg/kg酮康唑;口服5天,每公斤體重500毫克胡麻屬indicum顯示正常的精子細胞和支持細胞(馬尾鬆三色染色× 400)。STC:支持細胞;SC:精子細胞。

板六世:第6組睾丸切片(100 mg/kg bwt Tab。酮康唑和0.06 mg Tab。梅斯酮:分別口服5天和13天)顯示RGL(恢複生發層)增殖的精母細胞。間質細胞增大,精母細胞成熟。(PAS染色× 400) IC:間質細胞;MS:成熟精母細胞。

板七:第7組睾丸切片(0.06 mg Tab。口服美斯酮14天)。顯示精子細胞增殖增加,上皮高度增加,間質細胞增大。(馬鬆三色染色× 400)。EIC:增大間質細胞,SC:精子細胞;EH:上皮高度。

板八世:第8組睾丸切片(500 mg/kg bwt)胡麻屬indicum種子,口服13天)顯示間質細胞增大(Masson Trichrome × 400)。

精子濃度

表2結果顯示,3、4、5、6、7、8組精子濃度較2組顯著增加(P≤0.05)。同樣,組1的精子濃度較組2顯著增加(P≤0.05)。即2組精子濃度較1、3、4、5、6、7、8組顯著降低(P≤0.05)。

集團 N 濃縮的。(n×106 /毫升)/平均值±SEM
1 6 51.33±0.95
2 6 33.17±0.60英語字母
3. 6 73.33±2.78
4 6 69.50±2.93
5 6 86.50±0.76
6 6 86.50±0.43
7 6 87.00±2.18
8 6 75.33±2.26

表2:實驗動物精子濃度。
abcdefg = 1、3、4、5、6、7、8組分別與2組差異顯著。

討論

從目前的研究中,我們觀察到酮康唑可引起睾丸損傷,如精子濃度降低和嚴重的組織病理病變。精子濃度的降低主要表現為單給酮康唑組精子細胞數量和濃度的降低,從而導致精子濃度的降低。這一觀察結果與Amin[2]觀察到酮康唑通過降低雄性Wistar大鼠的精子指數和血清睾酮水平引起睾丸損傷的結果一致。

乙醇提取物的管理胡麻屬indicum似乎減少了酮康唑對睾丸造成的損害,這可能是由於它的螯合和抗氧化特性。

卵泡刺激素(FSH)已被證明與睾酮激素有協同作用,並在受體水平上刺激雄激素受體的合成[13]。然後,可以假設芝麻籽的提取物可能導致FSH激發睾酮水平的增加,從而導致在本研究中觀察到的精子濃度的增加。

據報道內分泌幹擾物是廣譜離子阻滯劑[14]。這也說明酮康唑破壞了離子通道,導致細胞膜離子平衡紊亂,最終導致細胞形態的破壞或扭曲。從目前的研究中,可以觀察到管狀形態的破壞也伴隨著睾丸間質和精子發生的普遍破壞。

結論

乙醇提取物胡麻屬indicum種子可提高精細胞濃度,改善酮康唑對睾丸的毒性作用,通過改善治療組的組織學細胞結構,這種改善作用在對實驗動物的預防性給藥中最為顯著。


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條信息

文章類型:研究文章

引用:王曉明,王曉明,王曉明,王曉明,王曉明,等。(2018)芝麻籽乙醇提取物對酮康唑致雄性Wistar大鼠睾丸損傷的影響。Clin Res Open Access 4(4): dx.doi.org/10.16966/2469-6714.141

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出版的曆史:

  • 收到日期:2018年8月31日

  • 接受日期:2018年10月30日

  • 發表日期:2018年11月6日