圖1:三聚氰胺氰尿酸酯的細胞毒性作用，以LDH法測定24小時後立即與
圖1:三聚氰胺和三聚氰胺。
圖1 b:三聚氰胺與氰尿酸酯的混合物(** P<0.01;* * * P < 0.001)。而活細胞數量在細胞單層後仍保留。
圖1 c:三聚氰胺和氰尿酸鹽的混合物攪拌10分鍾。
圖1 d:用新鮮培養基代替含UA的晶體孵育24小時(** P<0.01)。
全文
Mayur Danny I Gohel1 *袁偉民2Chi-Fai Ng3.
1中國香港九龍何文田東華學院醫學與健康科學學院2香港理工大學護理學院，紅磡，香港，中國九龍
3.香港中文大學外科學係，新界沙田，中國香港
*通訊作者:Mayur Danny I Gohel，中國香港九龍何文田東華學院醫學與健康科學學院，電話:(852) 31906680;電子郵件:dannygohel@twc.edu.hk
針對中國發生的三聚氰胺配方奶粉導致兒童急性尿石症事件，采用實驗性雙室管狀細胞模型研究三聚氰胺氰尿酸酯的細胞毒性。三聚氰胺的直接細胞毒作用改變了頂端細胞表麵物理形成晶體時緊密連接的完整性。其次是DNA氧化損傷，以及IL-5、IL-6、IL-8、MCP-1等炎性細胞因子的刺激，這與人類全基因組44K基因表達芯片揭示的基因表達一致。微陣列聚類分析也顯示鈣門控通道和鋅指蛋白基因受到影響。與其他結石事件不同，三聚氰胺的長期影響似乎僅限於細胞水平，因為三聚氰胺僅通過物理接觸引起細胞損傷，但有可能喚起免疫細胞聚集到損傷部位。
細胞損傷;細胞因子;基因表達;炎症;三聚氰胺;奶粉;腎毒性
動物急性腎衰竭被發現與含有三聚氰胺[1]汙染的小麥麵筋的摻假寵物食品有關。三聚氰胺是一種用於製造塑料和樹脂的化學物質，但也被作為肥料銷售。然而，為了增加含氮量，在兒童喂養的配方奶中添加了三聚氰胺[2,3]。眾所周知，添加到食品中的三聚氰胺主要是純三聚氰胺，其中1-2%的三聚氰酸(氰尿酸)汙染主要來自生產三聚氰胺。在毒理學研究中，三聚氰胺單獨不會造成腎損害，而與共汙染物氰尿酸鹽結合時，會形成不溶性晶體，導致腎小管梗阻[1,5]。我們已經進行了與臨床情況相似的劑量的研究。2008年底，三聚氰胺已導致中國大陸嬰幼兒腎結石發病率增加[6,7]。據報道，已有6人死亡，超過30萬名嬰兒患有與腎結石有關的尿路疾病，其中850人仍在接受治療，150人病情嚴重。在香港，超過4萬名兒童接受了與三聚氰胺相關的結石篩查，其中15例報告為[3]陽性。大多數患有三聚氰胺相關結石的兒童被描述為無症狀，直到腎髒異常，腎功能受損如此嚴重，以至於三聚氰胺及其結晶結石在首次臨床表現時就已造成損害[8]。 Whilst most infants and children affected were less than 3-years old, the long-term effects and damage are largely unknown. There are numerous evidences that the presence of crystals, such as calcium oxalate mainly from diets, may cause renal cell and tissue damage [9] as well as elevating cytokines [10] and mediators of inflammation [1]. During such events, gene expression would be invariably altered to stimulate both physiological and pathological response. For melamine, many studies have been focused on patients’ histological samples [1,11]. Although the incidences of melamine-related stone are now infrequent, children may still suffer certain complications. The cytotoxicity of melamine and cyanurate is currently unknown at the level of gene expression, cytokine activation and inflammatory markers. The questions posed here are related to what effects does melamine and/or cyanurate have on cells in culture and at what concentrations and ratios? These are being addressed, in the present study, by using the human tubular cell line in an established transwell-insert model [12], whereby we can investigate forming crystals interacting with the apical cellular side which mimic the situations in the nephrons, in order to investigate the bio-mechanisms.
雙室跨井培養係統
三聚氰胺和三聚氰胺在腎小管中的存在需要對可溶性形式和結晶形式的相互作用進行研究，以(i)解決它們如何被吸收和定位，(ii)在什麼濃度下，以及(iii)通過目前已知的草酸鈣(CaOx)晶體細胞相互作用了解晶體細胞相互作用。人皮質小管遠端和近端WT 9-12細胞係(CRL-2833;ATCC, Manassas, VA)在Dulbecco 's Modified Eagle 's Medium (DMEM) (ATCC)中與10%胎牛血清(GIBCO, New York, NY)一起培養，並在預包膜培養瓶中與牛膠原蛋白I型Sigma溶液(St. Louis, MO)以3.0 mg/ml濃度培養。本研究以我們之前草酸鈣[12]的跨孔細胞培養模型為模型，以研究三聚氰胺/氰尿酸酯晶體是否具有類似的作用。對人腎-2人腎近端小管細胞進行了優化研究。在隨後的實驗中，鑒於大部分已發表的數據是關於犬類的，我們研究了人類WT 9-12細胞係的細胞培養係統，這與臨床相關。完整的細胞單層建立在滲透聚碳酸酯transwell微孔過濾膜上(插入生長麵積1.12 cm2，孔徑0.4 μm) (Coster®Corning, New York, NY)根據描述[12]的標準協議。簡而言之，對數細胞從密度為4.4 × 104個/株生長12-14天至融合。培養係統的兩個隔室(根尖層和基底層)然後被完整的單層分離，達到約300歐姆厘米的TEER2．使用上皮組織伏安計(World Precision Instruments, Hong Kong, China)測定細胞單層的完整性，並通過以下計算將其表示為經上皮電阻(TEER)值:(TEER樣本——三通空白) ×表麵積。通過評估異硫辛酸熒光素(FITC)-右旋糖酐(10 KDa;Sigma)從頂端側到基底側。人工尿(AU)的製備如前所述[12]。每天準備人工尿。分析級化學品溶解在milliq中®用鹽酸將水和pH調至6.0。主要離子的最終濃度為鈣(6 mM)、鎂(3.0 mM)、鈉(196 mM)、鉀(82 mM)、磷酸鹽(23 mM)、硫酸鹽(20 mM)、草酸(1.2 mM)和檸檬酸(2.2 mM)。用磷酸二鈉(22 mM)緩衝尿液。將1.26 gm三聚氰胺(C3.H6N3.， MW (126.1 g/mol)， Sigma-Aldrich®)放入1升milliq水中。將1.2908 gm三尿酸(C3.H3.N3.O3.， MW (19.1 g/mol)， Sigma-Aldrich)在1 l milliq水中。在顯微鏡下觀察過飽和AU與三聚氰胺氰尿酸鹽的結晶，並在405nm處測量濁度。
細胞毒性和細胞因子分泌
在96孔平板培養微孔板上，通過測定培養基中乳酸脫氫酶(LDH)的釋放量，研究導致細胞死亡的三聚氰胺、三聚氰尿酸酯和三聚氰尿酸酯/三聚氰尿酸酯的濃度，以指導後續實驗使用。此外，三聚氰胺與氰尿酸酯的臨床相關比值(建議為99:1)也被測試為[4]。在transwell實驗中，為了使WT 9-12細胞的尖表麵直接形成新晶體，分別將等量(各250 μl)適當稀釋的三聚氰胺(50、49.5、25、5 mmol/l濃度)和氰尿酸酯(50、25、5、0.5 mmol/l濃度)分別加入插入孔中，並立即在37℃下搖軌(10分鍾)，隨後在TECAN SPECTRA Fluor Plus微板儀上記錄(TECAN, Grodig，奧地利)。測試參數為三聚氰胺與氰尿酸酯的比例為1:1(50:50、25:25、5:5 mmol/l濃度)和99:1 (49.5:5 mmol/l濃度)。為了檢查暴露後的細胞活力，對激動的細胞進行胰蛋白酶化，並使用ViCell計數器(Beckman Coulter Miami, FL)使用台錐藍排除法進行計數。平行實驗中，攪拌後取出含有三聚氰胺/氰尿酸酯結晶的AU溶液，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌三次，更換完整的培養基，孵育24小時，研究細胞單層的修複。這種暴露後孵育的目的是為細胞修複、基因表達和細胞因子分泌等細胞反應提供足夠的時間。24小時，收集尖和基底培養基，使用eBioscience FlowCytomix T-helper (Th)1/Th2 11-plex和趨化性6-plex測定法(Bender MedSystems，奧地利)測量細胞因子麵板表達，並使用配備CXP 2.2版軟件的流式細胞儀(Beckman Coulter，邁阿密)。采用高靈敏度的8-羥基-2′-脫氧鳥苷(8-OHdG) ELISA試劑盒(日本衰老控製研究所，靜岡縣，日本)提取細胞核定量氧化DNA損傷。
人類基因組44K基因表達芯片
與之前對CaOx尿石症的研究相似，我們使用cDNA芯片[13]構建了表達分析，我們還使用安吉利特基因組平台上的44K全人類基因組寡聚芯片研究了培養細胞在正常生理條件下和高水平暴露於三聚氰胺/氰尿酸鹽時的基因表達。用RNeasy Mini試劑盒(Qiagen, USA)提取收獲細胞的總RNA。RNA的質量通過數量(260 nm處的吸光度)、純度(A260/一個280比例為1.9-21)和完整性(使用安捷倫2100生物分析儀，28S rRNA與18S RNA的比例為2:1)。所有純化的RNA樣品保存在-80°C直到檢測。三聚氰胺，氰尿酸單獨和混合50:50和49.5:5 .5(三聚氰胺:氰尿酸)的四種條件與AU對照進行了測試。然後根據其表達譜將差異調控基因分組，並與細胞因子表達板的工作相關。
統計分析
為保證重複性，所有試驗都進行了一式兩份。均值之間的差異采用方差分析比較，p < 0.05為有統計學意義。所有顯著性ANOVA檢驗結果均采用Dunnett多重比較後驗分析。(GraphPad Prism 3.0版本的Windows, GraphPad軟件，聖地亞哥，加利福尼亞州)。
三聚氰胺和氰尿酸鹽結晶的細胞毒性作用
通過乳酸脫氫酶的釋放評估，三聚氰胺和氰尿酸鹽的混合物以濃度依賴的方式證明了直接的細胞毒性作用，但三聚氰胺和氰尿酸鹽單獨作用均無效(圖1A)。約60%的WT 9-12細胞被50 mM三聚氰胺和50 mM氰尿酸鹽(1:1)的混合物殺死(圖1B)。在緊密連接的細胞單層上，與AU對照相比，在以1:1比例使用三聚氰胺/氰尿酸酯混合物攪拌孵育10分鍾後，約15-25%的細胞活力立即受到影響，而與添加的濃度無關(圖1C)。當臨床相關的99:1三聚氰胺與氰尿酸酯的比例測試時，也顯示出類似的抑製細胞活力的效果。然而，24小時後，既沒有觀察到細胞修複，也沒有觀察到活細胞數量進一步減少(圖1D)。此外，顯微鏡觀察到細胞頂端表麵沒有結晶體粘附，並且在24小時的孵育後沒有觀察到進一步的細胞損傷，結果表明，三聚氰胺/氰尿酸酯晶體以1:1和99:1的比例所引起的細胞毒作用是由於實驗初始階段攪拌時的物理接觸，因此不推測晶體攝取和內噬作用。
三聚氰胺和氰尿酸鹽結晶引起的DNA氧化損傷
與AU對照相比，三聚氰胺/三聚氰胺比例為1:1時，氧化應激顯著增加(P<0.01)， 8-OHdG增加1.13µg/ml(圖2)。而三聚氰胺/三聚氰胺比例為99:1時，氧化應激無明顯影響。
圖2:暴露24小時後，三聚氰胺/氰尿酸鹽以50 mmol/l三聚氰胺和50 mmol/l氰尿酸鹽的1:1比例混合後，氧化應激標記物8-OHdG升高(** P<0.01)。
三聚氰胺和氰尿酸鹽結晶對細胞因子分泌的影響
在測試的16種Th1/Th2細胞因子和趨化因子中，在24小時收獲的培養基中檢測到IL-6、IL-8和(單核細胞趨化蛋白)MCP-1的基線水平，並且在根尖側檢測到較高的水平。三聚氰胺/氰尿酸鹽晶體增加了IL-6、IL-8和MCP-1的分泌，同時增加了它們的細胞毒作用(圖3A-C)。此外，在對照培養基中未檢測到IL-5，而其分泌也受到晶體的刺激(圖3D)。
圖3:暴露24小時後，三聚氰胺/氰尿酸鹽以50 mmol/l三聚氰胺和50 mmol/l氰尿酸鹽的1:1比例混合後，氧化應激標記物8-OHdG升高(** P<0.01)。
三聚氰胺和氰尿酸鹽結晶對基因表達芯片的影響
三聚氰胺與氰尿酸酯的比例為1:1或99:1時，共7777個基因在培養細胞中被上調或下調2倍。聚類分析顯示，炎症、鈣門控通道和鋅指蛋白相關基因主要受到影響。在本研究中，我們將我們的結果限製在所有測試條件中，一些常見基因通過增加表達而改變的前100個改變基因，包括鈣結合蛋白和鋅指蛋白(表1)。與白細胞相關的免疫球蛋白樣受體的其他基因相比，嗜丁醇樣基因、claudin 19和電壓依賴性鈣通道變異基因以99:1的比例顯著下調(表2)。殺手細胞凝集素樣受體和突觸回蛋白1以99:1的比例下調(表3)。然而，某些細胞因子基因包括IL2、IL5、IL6、IL8和趨化因子樣因子均以99:1的比例上調(表3)，這與收獲培養基中檢測到的細胞因子蛋白分泌和細胞毒作用有關。
| 探針的名字 | 描述 | 50:50:00 | 49.5:0.5 | 三聚氰胺 | 氰尿酸鹽 |
| fms相關酪氨酸激酶1 (FLT1) | 23 | 23 | 26 | 27 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| S100鈣結合蛋白B | 16 | 19 | 18 | 19 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| CD48分子 | 11 | 11 | 12 | 13 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| 水通道蛋白12A (aqp12a) | 40 | 41 | 41 | 47 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| 鋅指蛋白645 | 16 | 18 | 18 | 19 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| 鋅指蛋白516 | 22 | 38 | 18 | 15 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| 乳酸脫氫酶a樣6A (LDHL6A) | 19 | 21 | 6 | 19 | |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 |
表1:與非盟對照相比，所有測試條件下常見基因的表達變化程度相似。
| 探針的名字 | 描述 | 50:50:00 | 49.5:0.5 | 三聚氰胺 | 氰尿酸鹽 |
| A_23_P7412 | 智人丁親素樣8 (BTNL8)，轉錄變異體1,mRNA [NM_024850] | 沒有 | 9397 | 2 | 沒有 |
| 效果 | 下來 | 向上 | 效果 | ||
| A_23_P379054 | 智人CLDN19基因，mRNA [NM_148960] | 沒有 | 1861 | 2.7 | 沒有 |
| 效果 | 下來 | 下來 | 效果 | ||
| A_24_P401686 | 智人鈣通道，電壓依賴性，T型，α 1G亞基(CACNA1G)，轉錄變異體15,mRNA [NM_198397] | 沒有 | 13 | 2.4 | 2.4 |
| 效果 | 下來 | 向上 | 向上 | ||
| A_24_P820302 | AF246221跨膜蛋白BRI{智人}(exp=-1;生產總值= 0;cg=0)， partial (43%) [THC2594845] | 12 | 20. | 8 | 9 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P209135 | 智人白細胞相關免疫球蛋白樣受體1 (LAIR1)，轉錄變異體b, mRNA [NM_021706] | 454 | 2 | 3. | 2 |
| 下來 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P8723 | 智人殺手細胞凝集素樣受體亞家族G，成員2,mRNA (cDNA克隆MGC: 131846 IMAGE: 6139360)，完整的cd。(BC110858) | 75 | 沒有影響 | 2 | 沒有影響 |
| 下來 | 向上 | ||||
| A_23_P348063 | 智人突觸回蛋白1 (SYNGR1)，轉錄變異體1a, mRNA [NM_004711] | 55 | 沒有影響 | 沒有影響 | 沒有影響 |
| 下來 | |||||
| A_24_P115967 | 智人二酰基甘油脂肪酶(DAGLA) mRNA [NM_006133] | 29 | 15 | 16 | 17 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_32_P73452 | 智人跨膜蛋白16H (TMEM16H)， mRNA [NM_020959] | 27 | 8 | 6 | 9 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| 溶質載體家族24(鈉/鉀/鈣交換器)成員3 (SLC24A3) | 8.6 | 1.3 | 2.6 | 2.7 | |
| 下來 | 下來 | 下來 | 下來 |
表2:與AU對照相比，三聚氰胺:氰尿酸酯以1:1或99:1的比例改變基因表達。
| 探針的名字 | 描述 | 50:50:00 | 49.5:0.5 | 三聚氰胺 | 氰尿酸鹽 |
| A_23_P501713 | 智人白介素1家族，成員10 (theta) (IL1F10)，轉錄變異體1,mRNA [NM_032556] | 1．6 | 2 | 3．1 | 2 |
| 下來 | 下來 | 下來 | 下來 | ||
| A_23_P79398 | 智人白細胞介素1受體II型(IL1R2)，轉錄變異體1,mRNA [NM_004633] | 4.2 | 3．1 | 4.6 | 3．5 |
| 下來 | 下來 | 下來 | 下來 | ||
| A_23_P30115 | 智人白細胞介素2 (IL2) mRNA [NM_000586] | 8 | 9 | 9 | 9 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P30122 | 智人白細胞介素2 (IL2) mRNA [NM_000586] | 1.7 | 1.9 | 1．4 | 2．2 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_24_P209047 | 人白細胞介素5(集落刺激因子，嗜酸性粒細胞)(IL5)， mRNA [NM_000879] | 3.2 | 3.4 | 3.6 | 2.4 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_24_P935033 | 智人交替拚接白細胞介素-6受體β鏈mRNA，部分cds。(U58146) | 3.9 | 4.３ | 2.8 | 2.7 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_32_P87013 | 智人白細胞介素8 (IL8) mRNA [NM_000584] | 22 | 13 | 14 | 25 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_24_P52733 | 智人白細胞介素10受體α (IL10RA) mRNA [NM_001558] | 1．6 | 1．6 | 1．2 | 1.9 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P91943 | 人白細胞介素12A(自然殺傷細胞刺激因子1，細胞毒性淋巴細胞成熟因子1,p35) (IL12A)， mRNA [NM_000882] | 沒有影響 | 1．5 | 2．3 | 沒有影響 |
| 下來 | 下來 | ||||
| A_23_P7560 | 人白細胞介素12B(自然殺傷細胞刺激因子2，細胞毒性淋巴細胞成熟因子2,p40) (IL12B)， mRNA [NM_002187] | 1．1 | 2．3 | 1．1 | 2.5 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P61057 | 人類白細胞介素16(淋巴細胞趨化因子)(IL16)，轉錄變型1,mRNA [NM_004513] | 3. | 3. | 3．5 | 3.6 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P332820 | 智人白細胞介素17A (IL17A) mRNA [NM_002190] | 1.9 | 2 | 2 | 2．3 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_23_P167882 | 智人白細胞介素17F (IL17F)， mRNA [NM_052872] | 2．3 | 4.6 | 6.5 | 3.8 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 | ||
| A_24_P215804 | 人類趨化因子樣因子(CKLF)，轉錄變異體1,mRNA [NM_016951] | 3. | 14 | 14 | 6 |
| 向上 | 向上 | 向上 | 向上 |
T能力3:與AU對照相比，三聚氰胺:氰尿酸鹽以1:1或99:1的比例引起白介素/趨化因子基因及其受體的表達。
我們的體外三聚氰胺晶體與腎細胞相互作用的研究是在我們早期草酸鈣細胞培養研究的基礎上建立的。晶體-細胞相互作用及其後續細胞損傷和反應的研究是尿石症研究的一個活躍領域。三聚氰胺晶體與細胞的物理相互作用主要是1:1或99:1(臨床相關)。寵物食品和奶製品主要受到三聚氰胺的汙染，而氰尿酸鹽是一種副產物汙染物，[4]含量不到1%，我們的研究認為這一比例為99:1與臨床相關。與已被證明可被腎小管細胞主動吸收的CaOx晶體不同[12,14]，三聚氰胺晶體對細胞造成物理損傷，並且沒有任何粘附在細胞表麵的外觀-內吞作用發生前的必要事件。乳酸脫氫酶(LDH)是細胞損傷的經典標記物，在三聚氰胺氰酸酯以1:1的比例存在時，可以看到細胞隨後的氧化應激，而不是臨床相關的99:1的比例。這種細胞損傷在人紅細胞[15]上也可見到。氧化應激是一種細胞反應，向免疫係統和臨近危險的細胞發出信號，雖然我們的結果沒有顯示在99:1的三聚氰胺比例下的這種應激，但它確實預測細胞要麼因高負荷的三聚氰胺而受損，例如嬰兒長時間連續服用含三聚氰胺的牛奶。低濃度或急性劑量的三聚氰胺也不會損害細胞，但這需要進一步說明。
在一個已在物理損傷等情況下，細胞會引起局部炎症反應並釋放大量細胞因子。IL-5， -6， -8和MCP-1顯著升高，提示細胞對腎細胞損傷的反應，並促進宿主免疫能力細胞如中性粒細胞和單核細胞的募集。IL-5和-6的存在也表明了向Th2的轉移，這有利於體液型免疫反應。有報道稱，三聚氰胺能誘導抗體[16]，並能在實驗模型[17]中產生抗體。因此，對於細胞釋放介質來支持/增強體液型免疫反應是一致的已對人類和動物的研究。整體微環境表明，晶體對小管細胞造成物理細胞損傷，引發促炎反應。根尖和基底外側細胞因子水平的升高也提示緊密連接對細胞單層的幹擾。
與之前的一項研究[18]相似，該研究觀察了大鼠CaOx腎結石期間的整體表達基因，我們報告了使用全基因組掃描(人類基因組44K)將三聚氰胺/三聚氰酸鹽呈現給培養細胞時的基因表達微陣列。在采用全局掃描的研究中，通常會有數千個基因表達，對表達量最高的100個基因進行聚類分析，炎症、鈣通道和鋅指蛋白是主要表達的基因簇。這類似於已在患有CaOx尿石症[18]的大鼠上進行了全局基因表達的動物模型，其中類似的集群受到影響。然而，在我們的模型中，向上/向下調控的幅度高出幾倍，該研究中顯示的基因與我們在當前研究中觀察到的基因明顯不同。這可以假設曹ox尿石症的損傷和攝取與三聚氰胺誘導的結晶明顯不同。這裏觀察到的基因表達，確實提供了三聚氰胺損傷後可能的細胞反應類型的快照——主要是炎症和th2 -體液免疫反應類型。這與培養基中分泌的細胞因子圖譜的發現得到了證實。這可能是有關三聚氰胺的首個此類研究報告。在對人腎上皮細胞的其他研究中發現，誘導細胞因子亞家族的基因通常參與晶體誘導的細胞損傷事件[13]。在所有測試條件下，我們還發現鋅指蛋白普遍上調(表1)，這並不奇怪，因為它們具有多種功能，如DNA識別、RNA包裝、調節凋亡、蛋白質折疊和脂質結合[19]。現時的結果顯示，持續攝入三聚氰胺，即使是在香港衛生防護中心及美國食物及藥物管理局規定的安全水平，是否合適?然而，要確認哪些基因受到影響，哪些蛋白質受到影響，還需要進一步的工作，這超出了本研究目前的範圍。 In conclusion, melamine-crystal cell interaction was particularly different from other nephrolithiasis event (eg. CaOx and Calcium Phosphate (CaP)). Presence of clinically relevant levels of melamine brought about physical damage to cells with the concomitant release of cell injury markers, LDH and oxidative stress. The release of cytokine markers for inflammation and humoral immune response were evident and this is correlated to that found in other studies. Cluster analysis of the top-100 genes up/down regulated revealed that they were mainly protective-type, such as shutting calcium channels and inflammatory to recruit cells to remove damaged and dead cells. Overall, there was no evidence of long-term sustained damage of cells from melamine exposure, except of the physical effects, unlike that seen in CaOx urolithiasis, whereby cells internalized CaOx crystals and continue to accumulate and send inflammatory cytokines over a period of time until such CaOx within the cells were removed. From our current studies, we can now have a better understanding of the cellular effects of melamine, which is particular important in understanding the clinical manifestations of melamine related problem and also establishing a clinical management plan. Whether patients with more chronic melamine exposure will lead to prolong inflammatory reaction, and/or subsequently lead to long-term tubular-interstitial nephritis or even renal fibrosis is still unknown. Further studies are needed in these areas. The monitoring of some urine inflammatory markers may also be relevant in patients with prolonged high-level exposure and help to ascertain the extent of disease.
本項目由香港中文大學吳誌峰教授獲香港特別行政區食物及衛生局M1-BS-07撥款資助。資助機構亦負責保證研究的質素。
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文章類型:研究文章
引用:吳誌輝，吳誌輝(2018)三聚氰胺對人腎近端小管細胞細胞因子和炎症相關基因的表達。Clin Res Open Access 4(2): dx.doi.org/10.16966/2469-6714.132
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