摘要

目的:驗證轉錄因子核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白-1 (AP1)之間的協同作用增強胰腺外分泌細胞的轉錄活性的假設。

方法:我們在TNF-α或CCK刺激的惡性外分泌胰腺細胞係(AR42J細胞)中使用顯性陰性ERK2，檢測了應激激酶ERK MAPK對核轉錄因子NF-κB和AP-1的調控作用。利用特異性NF-κB和AP-1 DNA結合位點反應報告蛋白，NF-κB抑製劑蛋白IκBα (DN.IκBα)和AP-1組成蛋白c-Jun (DN.c-Jun)的顯性陰性形式，我們研究了NF-κB和AP-1在TNF-α或CCK刺激的AR42J細胞中是否相互調節轉錄活性。我們還檢測了AP-1對小鼠分離腺泡細胞NF-κB的調控作用。

結果:初步研究描述了激動劑刺激下AR42J細胞中ERK MAPK、c-Jun和NF-κB p65亞基激活的時間過程，以闡明實驗計劃的最佳刺激時間。DN。ERK抑製TNF-α或cck刺激的NF-κ b或AP-1的激活，表明ERK MAPK調節這兩種核轉錄因子。我們使用熒光素酶測定定量核轉錄響應激動劑刺激DN或存在。我ακB或DN.c-Jun。正如預期的那樣，DN。IκBα降低NF-κ b依賴性的轉錄活性，而DN.c-Jun降低ap -1依賴性的轉錄活性。此外,DN。IκBα降低AP-1依賴性的轉錄活性，而DN.c-Jun降低NF-κB依賴性的轉錄活性，說明NF-κB和AP-1相互調節。我們還證實了AP-1對小鼠分離腺泡細胞NF-κB的調控作用。

結論:NF-kB和AP-1在胰腺外分泌細胞中相互調節。ERK MAPK調節NF-κB和AP-1，因此是抑製急性胰腺炎治療的潛在靶點。

關鍵字

腺泡的細胞;激活蛋白1;急性胰腺炎;Adenoviral向量;腺相關病毒;AR42J細胞;縮膽囊素;核factor-kappa B;核轉錄因子;腫瘤壞死因子-α

簡介

急性胰腺炎很常見，發病率和死亡率都很高[1,2]。然而，疾病的發病機製尚不清楚，因此，治療選擇有限。在本研究中，我們研究了胰腺外分泌細胞中核轉錄因子激活的調節，並驗證了核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白-1 (AP-1)在胰腺外分泌細胞中相互調節的假設。NF-κB和AP-1之間的協同作用有可能放大胰腺細胞外分泌應激的促炎反應，從而加劇急性胰腺炎。

NF-κB和AP-1是普遍存在的轉錄因子，可調節炎症和細胞生存反應，同時可被重疊的上遊激酶(如細胞外調節激酶(ERK))激活，並誘導類似基因的轉錄(圖1)。盡管有這些密切的相似之處，但NF-κB和AP-1激活的調控存在重大差異。在靜止狀態下，NF-κB亞基(如p65, p50)與κB抑製劑(IκB)複合存在於細胞質中。IκB激活導致其自身降解，NF-κB/IκB複合體解離，允許NF-κB亞基的核易位和隨後的基因轉錄[3]。相反，AP-1是位於細胞核的二聚體轉錄因子蛋白組(如Jun、Fos)[4-6]。c-Jun形成同型二聚體，與DNA結合，並在AP-1依賴的轉錄中發揮關鍵作用，因為c-Fos依賴與c-Jun的異二聚結合DNA，而c-Fos自身不與AP-1 DNA位點[7]結合。

圖1:假設。
本研究驗證的中心假設說明了核轉錄因子NF-κB和AP-1如何參與協同作用，增加促炎介質的基因轉錄，超過它們各自作用的簡單總和，從而導致急性炎症反應的協同增強。NF-κB亞基p65和AP-1組分c-Jun在兩種途徑均被激活時，相互促進對方的轉錄活性，以放大總結性反應。核轉錄因子AP-1複合體的關鍵成分是c-Jun，它形成c-fos/c-Jun異二聚體或c-Jun/c-Jun同型二聚體誘導轉錄活性。由於ERK MAPK同時調節NF-κB和AP-1，抑製ERK MAPK可能會改善急性胰腺炎。

在核轉錄因子上遊，如ERK MAPK等絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)在外分泌胰腺細胞信號轉導中受到的關注有限[8-11]。我們之前已經證明ERK MAPK調節外分泌胰腺細胞[12]中NF-κ b依賴性基因的轉錄。然而，ERK MAPK是否調節外分泌胰腺細胞中的AP-1，此前尚未得到證實。在本研究中，我們證明了ERK顯性陰性形式(DN.ERK2)在外分泌胰腺細胞中的表達可以抑製NF-κB和AP-1的激活，以及NF-κB和AP-1依賴的基因轉錄。我們通過DN的表達證明了NF-κB的特異性抑製。IκBα可降低AP-1依賴性的轉錄活性，而通過表達DN.c-Jun特異性抑製AP-1通路可降低NF-κ b依賴性的轉錄活性。由於這些研究是使用特定的DNA結合位點反應報告蛋白進行的，我們得出結論，NF-κB和AP-1在外分泌胰腺細胞中相互調節。這些發現強調了NFκB和AP-1之間的協同作用可能加劇急性胰腺炎，它們的上遊調節因子ERK MAPK可能是治療抑製的靶點。這些觀察結果與我們最近的發現相一致，即特異性抑製ERK MAPK可以降低我們實驗室建立的膽管結紮誘導急性胰腺炎小鼠模型[13]的死亡率。

材料和方法

實驗方案由愛荷華大學機構動物護理和使用委員會批準(協議號:1012246)，並根據美國國立衛生研究院(Bethesda, MD)的實驗室動物護理和使用指南進行。

抗體

抗體購自商業來源:兔抗磷酸化ERK 1/2 MAPK (Cat No: 9101)、總ERK 1/2 MAPK (Cat No: 9102)、總IκBα (Cat No: 4814)和磷酸化c-Jun (Cat No: 9261)的多克隆抗體，以及兔抗磷酸化NF-κB p65 (Cat No: 3039)、總NFκ b p65 (Cat No: 4764)和總c-Jun (Cat No: 9165)的單克隆抗體，均來自MA Cell Signaling, Danvers。其他試劑包括:小鼠抗TATA結合蛋白單克隆抗體(貓號:ab818;Abcam、劍橋、馬);小鼠抗β-肌動蛋白單克隆抗體(貓號:A5316;西格瑪，聖路易斯，密蘇裏州);山羊抗兔IgG-HRP(貓號:sc2004;聖克魯茲生物技術，聖克魯茲，加州);山羊抗小鼠IgGHRP(貓號:31438;皮爾斯生物技術，洛克福德，伊利諾伊州)。

AR42J細胞培養

AR42J細胞，大鼠外分泌胰腺惡性細胞係(貓號:CRL1492;ATCC, Manassas, VA)，在F-12K營養混合物Kaighn’s modified (Cat No: 21127-022;Invitrogen, Grand Island, NY)用20%胎牛血清，100 U/ml青黴素和100 μg/ml鏈黴素在聚賴氨酸包被培養皿中培養。細胞在37°C的5%濕潤CO中培養₂．我們此前已經證明，腺病毒感染AR42J細胞[15]後，其感染效率接近90%，細胞活力極佳，可持續48小時。

重組腺病毒載體感染體外

表達DN的複製缺陷重組腺病毒。B我κα(Ad.DN。IκBα， S32/36A突變，Cat No: 1028)， DN.c-Jun (TAM67, Cat No: 1046)或ap -1響應型熒光素酶報告載體(Ad.AP-1。Luc，貓號:1670)從Vector Biolabs(費城，賓夕法尼亞州)購買，表達NF-κ b響應熒光素酶報告載體[16]、綠色熒光蛋白(Ad.GFP)或不表達轉基因的空載體對照(Ad.EV)的由愛荷華大學載體核心設施(愛荷華城，賓夕法尼亞州)製作，以及表達DN的。ERK2(雙磷酸化位點T202/Y204突變為A202/F204)購自Cell Biolabs, Inc. (San Diego, california, USA;目錄號:ADV 113)。在37°C下進行腺病毒感染和細胞的合並感染，MOI為每個細胞5-10斑塊形成單位(PFU)，持續48小時，然後刺激進行免疫印跡分析或熒光素酶分析。

重組腺相關病毒載體感染已和腺泡細胞分離

我們首先轉導了老鼠的胰腺在活的有機體內利用腺相關病毒(AdenoAssociated virus, AAV)載體表達NF-κ b響應型熒光素酶報告基因，然後分離腺泡細胞，隻使用一個腺病毒載體在體外每口井進行研究。與腺病毒載體相比，AAV載體的免疫原性非常小，與不可檢測的炎症相關[17-20]。未手術的小鼠(雄性，30-50 g, C57BL/6，來自美國國家癌症研究所，Frederick, MD)給予AAV8.NF-κB。Luc 3e12病毒基因組粒子(VGP)在安樂死前2周i.p.。新鮮采集胰腺，用Williams組[21]描述的方法分離腺泡細胞的原代培養物。簡單地說，在DMEM(含有0.25% BSA、青黴素和鏈黴素和胰蛋白酶抑製劑)中用膠原酶消化池中的胰腺，滴定，通過150 μ m濾網過濾，使用4%的BSA線性梯度純化。將分離的腺泡細胞用1 ml/孔的DMEM以約350-400 μg蛋白/ ml的濃度接種於未處理的組織培養板中，然後在37℃含5% CO的潮濕氣氛中培養₂．然後用Ad的5moi感染腺泡細胞。電動汽車,Ad.DN。我ακB,或Ad.DN.c-Jun。我們之前已經證明，分離的腺泡細胞是活的，沒有過度損傷，當受到刺激時，澱粉酶釋放有適當的反應，腺病毒轉導效率是極好的[22]。

裂解液製備和western blot分析

對於使用全細胞蛋白提取物的Western blot, AR42J或分離的腺泡細胞在改良RIPA緩衝液(50 mM TrisCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 0.5%去氧膽酸)中溶解在冰上10分鍾，然後用膽囊收縮素(CCK8, Cat No: C2175;Sigma, St. Louis, MO)或大鼠重組TNF-α (Cat No: 510-RT-010;研發係統，明尼阿波利斯，MN)。可溶性蛋白在4℃15,000 xg離心10分鍾後收集。對於使用核蛋白提取物的Western blot，使用商業提取試劑盒(NE-PER核和細胞質提取試劑，Cat No: 78833;皮爾斯生物技術公司(Pierce Biotechnology, Rockford, IL)根據製造商的說明進行核蛋白和細胞質蛋白的分離。用Bradford蛋白測定法(Cat No: 500-0006;Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)和裂解物在SDS樣品緩衝液中變性並煮沸3分鍾。全細胞裂解物(10-40 μg)或核蛋白提取物(5- 10 μg)在12%的凝膠上進行SDS- page，並轉移到PVDF膜上。用抗phospho-ERK 1/2、phospho-c-Jun、phospho-p65、p65或IκBα的一抗檢測細胞膜，然後用α-兔或α-小鼠hrp結合的二抗檢測。用化學發光檢測(ECL Plus Western blotting檢測試劑，Cat No: RPN2132; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Membranes were then stripped for 20 min at 50°C with a mild stripping buffer (69.3 mM SDS, 125 mM Tris pH 6.8, 243 mM β-mercaptoethanol) and re-probed for total ERK, total c-Jun, β-actin or TATA binding protein expression, as appropriate. Densitometric analysis of immunoblots was then performed using Image J software (Version 1.4, National Institutes of Health, Bethesda, MD).

熒光素酶檢測

AR42J細胞與Ad共感染。EV (10 MOI)， Ad.DN。ERK2 (10 MOI)， Ad.DN;IκBα (5moi)或Ad.DN.c-Jun (10moi)除Ad.NF-κB的10moi外。呂克·或Ad.AP-1。給盧克48小時。收集細胞(熒光素酶細胞培養裂解5X試劑，貓號:E1531;使用TNF-α (10 ng/ml)或CCK (100 nM)和NF-κ b -或ap -1介導的基因轉錄刺激6小時後，通過測定熒光素酶活性(熒光素酶檢測，Cat No: E1501;Promega,麥迪遜,WI)。

統計分析

采用單向方差分析或配對t檢驗(SigmaStat軟件，SPSS Inc.，芝加哥，伊利諾伊州)。每組研究3口井，結果以平均值±SEM表示。P值<0.05為顯著性。

結果

激動劑刺激激活AR42J細胞中的ERK MAPK、NF-κB和AP-1

為了確定ERK MAPK激活的最佳刺激時間，在收獲前1、3、5、10或20分鍾用TNF-α (100 ng/ml)或CCK8 (10 μ M)刺激AR42J細胞。免疫印跡顯示TNF-α刺激後5分鍾內ERK MAPK磷酸化(p-ERK)穩定，在10分鍾達到峰值，20分鍾後恢複到基線水平(圖2A)。CCK刺激後3分鍾內ERK的強烈激活在5 - 10分鍾達到峰值，20分鍾後下降(圖2B)。在NF-κB激活的時間過程研究中，TNF-α (10 ng/ml)刺激AR42J細胞10、30、60、180或360分鍾顯示NF-κB亞基p65核易位(核組分中磷酸化p65增加)，在10分鍾達到初始峰值，30分鍾下降(圖2C)。刺激後1-3小時激活再次增加，6小時後下降(雙相反應)。在AP-1激活的時間過程研究中，在收獲前用CCK8 (100 nM)刺激AR42J細胞15、30、45或60分鍾。AP-1蛋白c-Jun的磷酸化證明了AP-1的激活在CCK刺激後15分鍾達到峰值，並持續升高至1h(圖2D)。

圖2:AR42J細胞激動劑刺激後ERK、NF-κB (p65)和AP-1 (c-Jun)的激活免疫印跡分析顯示，(A) 100 ng/ml TNF-α或(B) 10 μM CCK刺激AR42J細胞後，ERK活化增加，兩種激動劑刺激後5-10 min, ERK磷酸化(p-ERK)達到峰值。在ERK激活的下遊，免疫印跡分析還顯示(C)在10 ng/ml TNF-α刺激後核組分NF-κB p65亞單位激活增加(雙相反應)，以及(D)在100 nM CCK刺激後總勻漿中AP-1組分C - jun激活增加。

ERK調節AR42J細胞NF-κB和AP-1

使用Ad.DN。ERK2，我們之前已經證明ERK調節AR42J細胞[12]中NF-κ b依賴性基因的轉錄。在本研究中，我們證實了這一發現，並表明ERK參與了激動劑刺激的NF-κB亞基p65的核易位和c-Jun激活。

我們首先驗證了DN的表達式和功能。通過Ad感染AR42J細胞構建ERK。電動汽車或Ad.DN。在用CCK8 (100 nM)或TNF-α (10 ng/ml)刺激細胞之前，ERK2 (5 MOI)作用48小時。在ev感染的細胞中，經過10分鍾CCK(增加2.8倍)或TNF-α(增加9.0倍)刺激後，ERK激活超過基線水平(圖3)。與受刺激的ev感染對照組相比，ERK顯示受刺激後ERK激活減弱，CCK(降低71%)或TNF-α(降低29%)，而DN中的ERK總信號要強得多。ERK表達細胞。這些發現證實了DN。ERK表達，並提供了激動劑刺激後抑製ERK磷酸化的功能證據。

圖3:表達式的DN。ERK抑製AR42J細胞中激動劑刺激的ERK激活。
用任意一種Ad的5個MOI感染細胞。電動汽車或Ad.DN。ERK2在刺激前48小時±100 nM CCK或10 ng/ml TNF-α刺激10分鍾。ev感染的對照細胞，ERK激活在CCK刺激後增加2.8倍，在TNF-α刺激後增加9.0倍，而表達DN的細胞。ERK顯示CCK或TNF-α刺激後ERK激活減弱。β-actin表達作為蛋白負荷對照，ERK總表達增加證實dnn .ERK過表達。p-ERK與β-actin表達的密度比歸一化至未受刺激的對照組。

TNF-α刺激ev感染的對照細胞在20分鍾後出現了強烈的NF-κB激活，p65核易位證明了這一點(圖4A和圖4B)。DN。與ev感染的對照細胞相比，在TNF-α刺激後，erk感染的細胞NF-κB活化降低34%(比基線水平低6.1倍)。另外，AR42J細胞與10 MOI Ad.NF-κB共感染48h。Luc和10 MOI的廣告。電動汽車或Ad.DN。ERK2先於TNF-α刺激6小時。與未受刺激的細胞相比，ev感染細胞在TNF-α刺激後轉錄活性(通過熒光素酶活性測定)增加26.6倍，在DN中轉錄活性降低47%。ERK-infected細胞。這些結果表明，ERK可調節AR42J細胞NF-κB激活和NF-κB依賴性基因轉錄。

圖4:表達式的DN。ERK抑製AR42J細胞NF-κB激活和NF-κB依賴性基因轉錄。
(A)用任一Ad的5個MOI感染細胞。電動汽車或Ad.DN。ERK2作用48小時，然後用10 ng/ml TNF-α刺激20分鍾，然後進行核蛋白提取液免疫印跡。NF-κB的激活，表現為核部分p65的增加(p65的核易位)，刺激ev感染的對照細胞後，NF-κB的激活增加了9.2倍，而刺激DN。與刺激ev感染的對照細胞相比，erk感染的細胞NF-κB活化降低34%。TATA結合蛋白(TBP)表達作為核蛋白負荷對照，p65與TBP表達的密度比歸一化為未受刺激的ev感染對照。(B)細胞與10 MOI的Ad.NF-κB共感染。Luc和10 MOI的廣告。電動汽車或Ad.DN。ERK2持續48小時，然後用10 ng/ml TNF-α刺激6小時。數據為平均值±SEM;n = 3井/組;方差分析，星號(*)表示與未受刺激對照顯著性，#表示與受刺激對照顯著性，p<0.05;相對熒光素酶單位。

確定DN的效果。ERK表達對AP-1激活的影響，AR42J細胞分別被Ad的5種MOI感染。電動汽車或Ad.DN。ERK2反應48小時，然後用100 nM CCK8刺激10分鍾(圖5A和圖5B)。AP-1蛋白c-Jun在ev感染的對照細胞中被激活，在總細胞裂解蛋白提取物中，磷酸化c-Jun比未受刺激的基線水平增加10.2倍。細胞表達的DN。與ev感染的對照組相比，CCK刺激後ERK的激活被顯著抑製[5.3倍(降低48%)]。測試DN的效果。ERK在ap -1依賴基因轉錄中的表達，AR42J細胞與Ad.AP-1的10個MOI共感染。Luc和10 MOI的廣告。電動汽車或Ad.DN。ERK2持續48小時，然後用100 nM CCK刺激6小時。ev感染的對照組在CCK刺激後轉錄活性比未刺激的水平增加了35倍，在DN中下降了75%。ERK表達細胞。 These findings indicate that ERK regulates activation of AP-1 component protein c-Jun and modulates AP-1-dependent gene transcription in AR42J cells.

圖5:表達式的DN。ERK可以抑製AR42J細胞中AP-1的激活和AP-1依賴的基因轉錄。
(A)用任一Ad的5個MOI感染細胞。電動汽車或Ad.DN。ERK2反應48小時，然後用100 nM CCK刺激10分鍾，然後提取總蛋白。刺激ev感染的對照細胞後，AP-1組分c-Jun的激活增加10.2倍，而刺激DN。與受刺激的ev感染細胞相比，erk感染細胞的c-Jun活化降低48%。β-actin表達作為蛋白質負荷對照，p-c-Jun與c-Jun表達的密度比歸一化為未受刺激的ev感染對照。
(B) 10 MOI Ad.AP-1共感染細胞。Luc和10 MOI的廣告。電動汽車或Ad.DN。ERK2刺激48小時後，再用100 nM CCK刺激6小時。數據為平均值±SEM;n = 3井/組;方差分析，星號(*)表示與未受刺激對照顯著性，#表示與受刺激對照顯著性，p<0.05;相對熒光素酶單位RLU =。

NF-κB調節AR42J細胞c-Jun激活和ap -1依賴性基因轉錄

為了評價NF-κB/AP-1的相互作用，我們用Ad的5種MOI感染AR42J細胞，研究NF-κB可能調節AP-1轉錄因子複合體。電動汽車或Ad.DN。IκBα作用48小時，然後用TNF-α (10 ng/ml)刺激10分鍾。在受刺激的ev感染對照組中，c-Jun磷酸化水平比未受刺激的水平增加3.0倍，而受刺激的DN。i κ b α-感染細胞僅增加1.9倍(圖6A)。為了確定這種抑製作用是否擴展到AP-1複合體的轉錄活性，我們將AR42J細胞與Ad.AP-1合並感染。Luc (10 MOI)和Ad.DN.c- jun (10 MOI)或Ad.DN. jun (10 MOI)。IκBα (5 MOI)刺激48小時，然後用CCK8 (100 nM)刺激6小時。正如預期的那樣，受刺激的EV感染對照組的熒光素酶活性比未受刺激的對照組增加了57倍，而在DN.c-Jun感染細胞中，熒光素酶活性下降了57%(圖6B)。然而，cck刺激的熒光素酶活性增加在DN中降低了35%。i κ b α-感染細胞表明NF-κB，除了AP-1蛋白c-Jun外，也在調節AP-1依賴的轉錄活性中發揮作用。抑製NF-κB通路後c-Jun激活和ap -1依賴性基因轉錄的減少是兩個關鍵轉錄因子通路之間相互作用的證據。

圖6:NF-κB/AP-1串擾:DN的表達。IκBα可抑製AR42J細胞中AP-1組分c-Jun的激活，抑製AP-1依賴性基因的轉錄。
A)用任意一種Ad的5個MOI感染細胞。電動汽車或Ad.DN。IκBα作用48小時，然後用10 ng/ml TNF-α刺激10分鍾，然後提取總蛋白。免疫印跡顯示，刺激ev感染的對照細胞後，c-Jun的激活增加了3.0倍，而刺激DN。i κ b α-感染細胞c-Jun活性較刺激ev感染細胞降低37%。β-actin表達作為蛋白質負荷對照，p-c-Jun與β-actin表達的密度比歸一化為未受刺激的ev感染對照。(B) 10 MOI Ad.AP-1共感染細胞。盧克和10 MOI的廣告。電動汽車,Ad.DN。IκBα或Ad.DN.c-Jun刺激48小時後再用100 nM CCK刺激6小時。
ev感染的對照組在刺激後熒光素酶活性增加，而在受刺激的DN.c- jun表達細胞中，甚至在受刺激的DN中，熒光素酶活性降低。B我κα表達的細胞。數據為平均值±SEM;n = 3井/組;方差分析，星號(*)表示與未受刺激對照組的顯著性(左欄)，#號(#)表示與受刺激對照組的顯著性(右欄)，p<0.05;相對熒光素酶單位RLU =。

AP-1在AR42J細胞的轉錄水平上調節NF-κB

然後我們評估了相反的情況，即特異性抑製AP-1通路也可能抑製NF-κB通路。然而，由於AP-1蛋白的核位置和靜止NF-κB/IκB複合體的胞質區隔化，像c-Jun這樣的AP-1成分預計不會調節NF-κB亞基的初始激活。為了驗證這一點，AR42J細胞被EV或Ad.DN.c-Jun的5moi感染48小時，然後TNF-α刺激(10 ng/ml) 10分鍾。正如預測的那樣，在EV感染的對照組中看到的TNF-α刺激的NF-κB激活(p65轉位到核部分)沒有被Ad.DN.cJun感染抑製(圖7A)。

圖7:AP-1/NF-κB串音:表達DN.c-Jun抑製AR42J細胞NF-κB依賴性基因轉錄
(A)用任一Ad的5個MOI感染細胞。電動汽車或Ad.DN。c-Jun for 48hrs prior to stimulation with 10 ng/ml TNF-α for 10 min, followed by nuclear protein extraction. Immunoblotting showed that activation of p65 increased following stimulation in EV-infected control cells, and this activation was not inhibited by DN.c-Jun expression (as expected due to the nuclear location of AP-1 proteins and cytosolic location of inactive NF-κB proteins). Tata Binding Protein (TBP) expression was used as a nuclear loading control. (B) Cells were co-infected with 10 MOI of Ad.NF-κB.Luc and 10 MOI of either Ad.DN.IκBα or Ad.DN.c-Jun (Ad.EV in controls) for 48 hrs prior to stimulation with 10 ng/ml TNF-α for 6 hrs.
ev感染的對照組細胞在刺激後熒光素酶活性增加，而在刺激DN中熒光素酶活性降低。IκBα表達細胞和刺激的DN.c-Jun表達細胞。數據為平均值±SEM;n = 3井/組;方差分析，星號(*)表示與未受刺激對照顯著性，#表示與受刺激對照顯著性，p<0.05;相對熒光素酶單位RLU =。

為了評估AP-1特異性抑製與DN.c-Jun表達是否影響NF-κB依賴性轉錄，將AR42J細胞與10 MOI Ad.NF-κB孵育。Luc和Ad.DN的任何5個MOI。IκBα或Ad.DN.c-Jun的10 MOI作用48小時，然後用TNF-α (10 ng/ml)刺激6小時。在ev感染的對照組中，TNF-α刺激導致NF-κB轉錄活性增加10.9倍(圖7B)。正如所料，表達DN的細胞。IκBα對TNF-α刺激的NF-κB轉錄活性增加的抑製作用達到93%。

有趣的是，DN.c-Jun的表達還導致TNF-α刺激的NF-κB轉錄活性顯著降低(51%)，表明AP-1調節NF-κB。結合NF-κB調節AP-1通路激活的數據，AP-1調節NF-κB的轉錄活性進一步證明了AR42J細胞中NF-κB和AP-1通路之間的相互作用。

NF-κ b依賴性基因在小鼠離體腺泡細胞中的轉錄

然後我們測試了在小鼠分離腺泡細胞中，DN.c-Jun是否也能調節NF-κB的轉錄活性。未手術的C57BL/6小鼠接受AAV8.NF-κB信號。Luc 3e12 VGP在胰腺取出前2周內注射。將腺泡細胞分離感染48小時。IκBα或Ad.DN.c-Jun (EV為對照)。在熒光素酶檢測前，用TNF-α 10 ng/ml刺激細胞6小時。ev感染的對照組細胞在刺激後熒光素酶活性增加3.8倍。不出所料，表達DN。IκBα抑製了TNF-α刺激下NF-κ b轉錄活性的增加(降低83%，圖8)。與我們在AR42J細胞中的研究結果相同(圖7)，在分離的腺泡細胞中，表達DN.c-Jun也降低了TNF-α刺激下NF-κ b -的轉錄活性(降低36%，圖8)。這表明AP-1也調節了小鼠腺泡細胞中的NF-κ b通路，就像在AR42J細胞中一樣。

圖8:即使在分離的腺泡細胞中，DN.c-Jun的表達也能抑製NF-κ b依賴性基因的轉錄。
C57BL/6小鼠給予AAV8.NF-κB。2周後分離Luc (3e12 VGP) i.p.和腺泡細胞。用Ad的5moi感染細胞。電動汽車,Ad.DN。IκBα或Ad.DN.c-Jun刺激前48小時±10 ng/ml TNF-±6小時。ev感染的對照組細胞在刺激後顯示熒光素酶活性增加，不僅在受刺激DN中降低。IκBα表達細胞和刺激的DN.c-Jun表達細胞。數據為平均值±SEM;n = 3井/組;方差分析，星號(*)表示與未受刺激對照顯著性，#表示與受刺激對照顯著性，p<0.05;相對熒光素酶單位RLU =。

討論

我們提出了一項重要的發現，在外分泌胰腺細胞中NF-κB和AP-1核轉錄因子通路之間發生協同作用。使用在體外方法，我們已經證明了NF-κB和AP-1通路在外分泌胰腺細胞中相互調節，上遊氮激活蛋白激酶ERK同時調節NF-κB和AP-1通路。NFκB和AP-1核轉錄因子通路為細胞對環境變化的幾種反應傳遞信號，包括急性炎症、氧化應激、感染、電離輻射和誘變影響。NF-κB和AP-1調節參與炎症、免疫調節、細胞生長和發育、凋亡和壞死以及組織損傷和修複的基因。NF-κ b和AP-1調控多種促炎介質基因的表達，包括細胞因子、趨化因子、氧源性自由基、粘附分子和誘導效應酶[23- 25]。NF-κB和AP-1的結合序列存在於促炎症介質的外分泌胰腺細胞啟動子區域，因此，NF-κB和AP-1的激活增加了幾種促進急性胰腺炎症的介質的表達[23,26]。NF-κB對AP-1通路的調控和AP-1對NF-κB通路的調控暗示了應激胰腺外分泌細胞內細胞信號的協同增強，從而增加促炎介質的產生，惡化急性胰腺炎的細胞死亡反應。NF-κB和AP-1之間的協同作用被認為是通過一種稱為交叉偶聯的現象發生的，這種現象包括在DNA結合位點形成新的異質複合物，其中NF-κB p65和c-Jun/c-Fos之間的物理和功能相互作用導致κB和AP-1增強子依賴的啟動子[4]的轉錄活性增強。胰腺腺泡細胞中關鍵核轉錄因子NF-κB和AP-1之間的這種串擾現象可能是急性胰腺炎加重的原因之一。因此，像生物黃酮薑黃素這樣的化合物可以抑製NF-κB和AP-1，並且已知在急性胰腺炎[27]的實驗模型中有有益的作用，可能通過抑製這兩種途徑之間的協同作用在急性胰腺炎中發揮治療作用。

NF-κB和AP-1有促炎或抗炎的作用，這取決於激活它們的上遊信號[3]。在目前的研究中，ERK MAPK, NF-κB和AP-1的關鍵應激激酶上遊，調節外分泌胰腺細胞中的核轉錄因子通路在這方麵是重要的。我們的研究結果表明，抑製ERK MAPK降低了AR42J細胞中NF-κ b和AP-1的激活，也降低了NF-κ b和AP-1依賴的基因轉錄。抑製ERK MAPK可能通過抑製NF-κB和AP-1激活的個體效應，以及抑製它們的相互作用，在急性胰腺炎的治療中具有潛在的有益作用，因此為新的治療方案提供了另一個靶點。有趣的是，在我們實驗室最近開發的與死亡率相關的導管結紮誘導急性胰腺炎小鼠新模型中[14,28]，我們已經表明，特異性抑製ERK MAPK可以顯著降低死亡率[13]。該模型通過抑製ERK MAPK提高生存率，提示ERK MAPK促進NF-κ b和AP-1通路的促炎激活，而不是抗炎激活。

在本研究中，我們對激動劑誘導的ERK MAPK、NF-κB亞基p65和AP-1組分c-Jun的激活進行了時間過程研究(圖2)，以優化實驗前的條件。我們研究了AR42J細胞中CCK-和TNF-α刺激的ERK MAPK激活、CCK刺激的c-Jun激活和TNF-α刺激的p65激活的時間過程。我們已經顯示了TNF-α刺激的NF-κB亞基p65核易位的雙期模式，初始峰值在10分鍾，第二個峰值在3小時(圖2C)。在分離的腺泡細胞[29]和其他細胞類型中，NF-κB活化有兩個階段的證據已經建立[30,31]。IκB由亞基IκBα和IκBβ組成，它們通過掩蓋NF-κB的核定位序列，使其在細胞質中保持靜止狀態。IκBα快速但短暫降解，被認為是NF-κB激活的第一階段，而IκBβ降解緩慢，被認為是NF-κB激活的第二階段。在目前的研究中，我們證實了NF-κB的雙期激活發生在AR42J細胞中，就像在分離的腺泡細胞[29]、肝細胞[30]和骨骼肌細胞[31]中看到的一樣。

AR42J細胞在研究外分泌胰腺的信號機製方麵具有許多優勢，例如細胞培養維護容易，與齧齒類動物胰腺收獲相比成本較低，腺病毒載體轉導效率高，對腺病毒感染具有良好的耐受性，以及許多激動劑受體(如CCK、TNF-α)的內源性表達[15,26,32,33]。在確認分離的腺泡細胞中的顯著發現之前，在AR42J細胞中進行初步研究是可行的。在此，我們在AR42J細胞中進行了一係列與中心假設相關的研究，在獲得令人鼓舞的結果後，證實AP-1調節NF-κ b依賴性轉錄，甚至在小鼠腺泡細胞中。一種使用AAV向量的新方法在活的有機體內NF -κB的表達。Luc之前在體外對小鼠腺泡細胞的研究使我們能夠避免潛在的腺泡細胞損傷在活的有機體內使用腺病毒載體或在體外使用多個腺病毒載體。相反的情況，即NF-κB調節ap -1依賴的基因轉錄，甚至在小鼠腺泡細胞中，沒有像AAV8一樣被研究。AP-1-Luc試劑我們還沒有生成。

CCK和TNF-α是已知的核轉錄因子激活因子，經常被使用在體外研究胰腺外分泌細胞的促炎途徑[15,22,26,27,32-39]。利用EMSA超移位技術，我們發現TNF-α[15]刺激AR42J細胞NF-κB的p65亞基被激活。一項研究表明NF-κB調節IL-6的產生[32]，另一項研究表明NF-κB和AP-1調節IL-8的產生[33]。對分離的腺泡細胞的研究表明，在CCK刺激後，NF-κB可調節趨化因子(mob1, MCP-1)和細胞因子(IL-6, TNF-α)的表達[26,38]。有趣的是，在分離的腺泡細胞中，完全抑製MIP-2上調需要NF-κB和AP-1[40]的雙重抑製，這支持了本研究的假設。

在小鼠中，我們建立了遠端膽管-胰管結紮誘導的急性胰腺炎模型，該模型與全身炎症、多器官功能障礙和高死亡率相關[14,28]。在該小鼠模型中，我們發現胰腺中ERK MAPK、NF-κB (p65)和AP-1 (c-Jun)激活，胰腺和遠處器官中ERK MAPK激活，胰腺和肺中細胞因子濃度升高[14,28,39,41]。在大鼠中，EMSA顯示胰腺NF-κB激活發生在1小時內，並在結紮誘導的急性胰腺炎24小時內增加;凝膠超移位實驗顯示抗p65亞基抗體轉移NF-κB帶，而抗p50抗體不轉移[42]。NF-κB和AP-1在大鼠胰管內注射牛磺膽酸[37]誘導的急性胰腺炎和天藍素或CCK +乙醇飲食[27]誘導的急性胰腺炎中也有激活。

在動物研究中，抑製NF-κB可提高實驗性急性胰腺炎患者的生存率[25,26]，而NF-κB在胰腺中過度表達在活的有機體內與胰腺和係統損傷[24]相關。n-乙酰- l-半胱氨酸(NAC)和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)是抗氧化劑，是NF-κB的非特異性抑製劑，在幾種胰腺炎動物模型中具有有益作用[43-48]。NF-κB/p105敲除或IKK2基因突變的轉基因小鼠藍藍色胰腺炎較輕[49,50]。薑黃素可改善急性胰腺炎，抑製兩種急性胰腺炎大鼠模型中NFκB和AP-1的激活，同時抑製幾種抑製介質[27]mRNA的誘導。許多其他的研究表明NF-κB抑製的有益作用已被報道，並在最近的一篇綜述[26]中得到了很好的總結。NF-κB在胰腺外部位(如肺、肝髒和內皮)的激活在動物模型[26]中也有描述。

NF-κB在人急性胰腺炎和全身炎症中活化的證據是有的，但有限。急性胰腺炎患者發病24小時內外周血單個核細胞NF-κB活化明顯增加[51,52]。在膿毒症和膿毒症休克的臨床研究中，NF-κB參與了急性肺損傷[53]的發展。急性呼吸窘迫綜合征患者肺泡巨噬細胞NF-κB活化[54]。目前的研究強調需要更多的研究NF-κB和AP-1在實驗和人類急性胰腺炎中的作用，以及抑製這些關鍵調控途徑的潛在有益作用，這些調控途徑共同加劇急性胰腺炎。先前的報道強調了NF-κ b和AP-1在癌症和其他疾病中發揮的功能作用[55- 57]，以及利用它們作為治療靶點的潛力[58-61]。本研究的一個不足之處是，在試圖闡明急性胰腺炎的發病機製時，使用NF-κB抑製劑蛋白IκBα (DN.IκBα)和AP-1成分蛋白c-Jun (DN.c-Jun)的顯性陰性熒光素酶檢測可能無法清楚地描述外分泌胰腺細胞中的急性炎症反應。例如，最近的一項研究表明，急性胰腺炎早期和晚期反應基因存在表觀遺傳調控[62]。

結論

NF-κB和AP-1通路在胰腺外分泌細胞中相互調節。ERK MAPK調節NF-κ b -和ap1依賴性基因轉錄，是急性胰腺炎治療抑製的潛在靶點。

作者的貢獻

waitit EC進行基礎科學實驗並獲取數據;塞繆爾一世提出了中心研究假說;Twait EC和Samuel I設計了實驗，分析和解釋了結果和數據，並撰寫了手稿。支持的(a)撥款R01 DK-071731，國家衛生研究院(NIH)糖尿病、消化和腎髒疾病研究所(NIDDK)，貝塞斯達，MD;(b)美國複蘇與再投資法案補充獎，授予NIH R01 DK-071731。

機構檢討委員會聲明

不適用(無人體實驗對象)

機構動物照顧及使用委員會聲明

實驗方案由愛荷華大學機構動物護理和使用委員會批準(議定書編號1012246)，並根據美國國立衛生研究院(Bethesda, MD)的實驗室動物護理和使用指南進行。

利益衝突聲明

作者沒有任何利益衝突需要披露。

數據共享聲明

沒有其他數據可用。

參考文獻

1. Ranson J, Rifkind K, Roses DF, Fink S, Eng K，等(1974)急性胰腺炎的預後體征和手術治療的作用。婦科外科139:69-81。［Ref。］
2. Ranson JH(1982)人類急性胰腺炎的病因和預後因素:綜述。胃腸病學雜誌77:633-638。［Ref。］
3. Ghosh S, Karin M (2002) NF-kappaB謎題中缺失的部分。細胞109:S81-S96。［Ref。］
4. Stein B, Baldwin AS Jr, Ballard DW, Greene WC, Angel P，等(1993)NF-kappa B p65與Fos/Jun轉錄因子交叉偶聯產生增強的生物學功能。Embo j 12: 3879- 3891。［Ref。］
5. 邵蓮E (2010) AP-1——Jun蛋白:致癌基因還是偽裝的腫瘤抑製因子?手機信號22:894-899。［Ref。］
6. 卡琳M，劉錚，讚迪E (1997) AP-1的功能和調控。細胞生物學:240-246。［Ref。］
7. Halazonetis TD, Georgopoulos K, Greenberg ME, Leder P (1988) c-Jun與自身和c-Fos二聚，形成不同DNA結合親和力的複合體。細胞55:917 - 924。［Ref。］
8. 段RD, Williams JA(1994)膽囊收縮素在大鼠胰腺腺泡中快速激活絲裂原激活蛋白激酶。Am J physics 267: G401-G408。［Ref。］
9. 段道仁，鄭長發，關昆林，Williams JA(1995)膽囊收縮素對大鼠胰腺腺泡中MAP激酶(MEK)和Ras的激活作用。Am J Physiol 268: G1060-G1065。［Ref。］
10. Dabrowski A, Grady T, Logsdon CD, Williams JA (1996) Jun激酶在大鼠胰腺中被膽囊收縮素快速激活在體外而且在活的有機體內．生物化學雜誌271:5686-5690。［Ref。］
11. Pandol SJ, Saluja AK, Imrie CW, Banks PA(2007)急性胰腺炎:從長凳到床邊。胃腸病學132:1127 - 1151。［Ref。］
12. Samuel I, Tephly L, Williard DE, Carter AB(2008)腸內排除增加膽石性胰腺炎模型中映射激酶激活和細胞因子產生。Pancreatology 8: 6日至14日。［Ref。］
13. Yuan Z, Williard DE, Twait EC, Kempuraj D, Samuel I (2011) ERK抑製顯著改善急性胰腺炎的早期死亡率:AAV載體介導的基因調節在外分泌胰腺疾病中的首次報道。摩爾Ther 19: S251- S252。［Ref。］
14. Samuel I, Yuan Z, Meyerholz DK, Twait EC, Williard DE，等(2010)一種新型的重症膽石性胰腺炎模型:小鼠胰管結紮導致全身炎症和大量死亡。Pancreatology 10: 536 - 544。［Ref。］
15. Twait E, Williard DE, Samuel I(2010)在AR42J細胞中，p38絲裂原激活蛋白激酶顯性陰性表達抑製NF-kappaB激活。Pancreatology 10: 119 - 128。［Ref。］
16. 範c，李強，張穎，劉欣，駱敏，等(2004)IkappaBalpha和IkappaBbeta具有損傷環境特異性功能，獨特影響肝髒NF-kappaB誘導和炎症。J clinin Invest 113: 746-755。［Ref。］
17. 王愛依，彭PD, Ehrhardt A, Storm TA, Kay MA(2004)腺病毒和腺相關病毒載體在胰腺基因傳遞中的比較在活的有機體內．Hum Gene Ther 15:405 -413。［Ref。］
18. Loiler SA, Tang Q, Clarke T, Campbell-Thompson ML, Chiodo V，等(2005)腺相關病毒載體處理後的局部基因表達通過胰腺導管。摩爾Ther 12: 519-527。［Ref。］
19. 王錚，朱濤，Rehman KK, Bertera S，張傑，等(2006)腺相關病毒載體廣泛穩定的胰腺基因轉移通過不同的路線。糖尿病55:875 - 884。［Ref。］
20. 程宏，Wolfe SH, Valencia V，錢凱，沈磊，等。(2007)腺相關病毒8型在外分泌和內分泌胰腺的高效和持續轉導。中國生物醫學雜誌14:585-594。［Ref。］
21. Bi Y, Page SL, Williams JA (2005) Rho和Rac促進腺泡形態改變、肌動蛋白重組和澱粉酶分泌。美國胃腸肝髒物理雜誌289:G561-G570。［Ref。］
22. Williard DE, Twait E, Yuan Z, Carter AB, Samuel I(2010)在膽囊收縮素和腫瘤壞死因子α刺激的分離腺泡細胞中，核因子kappa b依賴的基因轉錄受p38絲裂原激活蛋白激酶的調控。外科200:283-290。［Ref。］
23. Algul H, Tando Y, Schneider G, Weidenbach H, Adler G，等(2002)急性實驗性胰腺炎與NF-kB/Rel激活。Pancreatology 2: 503 - 509。［Ref。］
24. 陳旭，姬波，韓波，Ernst SA, Simeone D，等(2002)胰腺NF-kappaB激活誘導胰腺和全身炎症反應。胃腸病學122:448 - 457。［Ref。］
25. Satoh A, Shimosegawa T, Fujita M, Kimura K, Masamune A，等(1999)抑製核因子- kappab活化改善牛磺膽酸胰腺炎大鼠的生存。腸道44:253 - 258。［Ref。］
26. 王曉燕，王曉燕，王曉燕(2008)NF-kappaB活化在急性胰腺炎發病機製中的作用。腸道57:259 - 267。［Ref。］
27. Gukovsky I, Reyes CN, Vaquero EC, Gukovskaya AS, Pandol SJ(2003)薑黃素改善乙醇和非乙醇實驗性胰腺炎。胃腸肝髒雜誌284:G85-G95。［Ref。］
28. 袁錚，Meyerholz DK, Twait EC, Kempuraj D, Williard DE，等(2011)小鼠結紮急性胰腺炎的全身炎症和多器官功能障礙是死亡的原因。胃腸外科15:1670-1678。［Ref。］
29. Gukovsky I, Gukovskaya AS, Blinman TA, Zaninovic V, Pandol SJ(1998)早期NF-kappaB激活與激素性胰腺炎相關。Am J physics 275: G1402-G1414。［Ref。］
30. Han Y, Brasier AR(1997)雙相rel A. NF-kappaB1核易位在腫瘤壞死因子α刺激肝細胞中的作用機製。生物化學雜誌272:9825-9832。［Ref。］
31. Ladner KJ, Caligiuri MA, Guttridge DC(2003)腫瘤壞死因子調節的NF-kappa B雙相激活是骨骼肌基因產物細胞運動誘導損失所必需的。生物化學雜誌278:2294-2303。［Ref。］
32. Lee J, Seo J, Kim H, Chung JB, Kim KH(2003)天藍素誘導胰腺腺泡細胞細胞因子表達和細胞凋亡的信號轉導。中國科學院學報1010:104-108。［Ref。］
33. Ju KD, Yu JH, Kim H, Kim KH(2006)絲裂原激活蛋白激酶，NF-kappaB和AP-1在天藍色誘導的胰腺腺泡細胞IL-8表達中的作用。中國科學院學報1090:368-374。［Ref。］
34. Gukovskaya AS, Gukovsky I, Zaninovic V, Song M, Sandoval D，等(1997)胰腺腺泡細胞產生、釋放和對腫瘤壞死因子- α的反應。調節細胞死亡和胰腺炎的作用。投資100:1853-1862。［Ref。］
35. Satoh A, Gukovskaya AS, Nieto JM, Cheng JH, Gukovsky I，等(2004)PKC-delta和-epsilon調節膽囊收縮素和tnf - α誘導的胰腺腺泡細胞NF-kappaB激活。美國胃腸肝髒物理雜誌287:G582-G591。［Ref。］
36. 袁傑，Lugea A，鄭麗，Gukovsky I, Edderkaoui M，等。(2008)蛋白激酶D1介導胰腺泡細胞中膽囊收縮素和膽堿能信號通路誘導的NF-kappaB激活。美國胃腸肝髒物理雜誌295號:G1190-G1201。［Ref。］
37. vquero E, Gukovsky I, Zaninovic V, Gukovskaya AS, Pandol SJ(2001)牛磺酸膽酸誘導的胰腺炎中局部胰腺NF-kappaB激活和炎症反應。胃腸和肝髒生理指標280:G1197-G1208。［Ref。］
38. Han B, Logsdon CD (2000) CCK刺激mob-1表達和NFkappaB激活通過蛋白激酶C和細胞內Ca(2+)。美國物理雜誌細胞物理雜誌278:C344-C351。［Ref。］
39. Kempuraj D, Twait EC, Williard DE, Yuan Z, Meyerholz DK，等。(2013)新型細胞因子白細胞介素-33激活腺泡細胞促炎途徑並誘導小鼠急性胰腺炎症。PLoS ONE 8: e56866。［Ref。］
40. Orlichenko LS, Behari J, Yeh TH, Liu S, Stolz DB，等。(2010)小鼠胰腺腺泡中CXC-ELR趨化因子KC和mlip -2的轉錄調控。胃腸肝髒物理雜誌299:G867-G876。［Ref。］
41. Meyerholz DK, Williard DE, Grittmann AM, Samuel I(2008)小鼠胰管結紮誘導應激激酶激活、急性胰腺炎和急性肺損傷。外科196:675-682。［Ref。］
42. Samuel I, Zaheer S, Nelson JJ, Yorek MA, Zaheer A(2004)急性胰腺炎中CCK-A受體誘導及P38和NF-kappaB激活。Pancreatology 4: 49-56。［Ref。］
43. Rakonczay ZJr, Jarmay K, Kaszaki J, Mandi Y, Duda E，等(2003)在精氨酸誘導的急性胰腺炎中NF-kappaB激活是有害的。放射生物學雜誌34:696-709。［Ref。］
44. Grady T, Liang P, Ernst SA, Logsdon CD(1997)趨化因子基因在大鼠胰腺腺泡細胞中的表達是與急性胰腺炎相關的早期事件。胃腸病學113:1966 - 1975。［Ref。］
45. Virlos I, Mazzon E, Serraino I, Di PR, Genovese T, et al.(2003)吡咯烷二硫代氨基甲酸酯降低藍致小鼠急性胰腺炎的嚴重程度。衝擊20:544 - 550。［Ref。］
46. 石晨，趙旭，王旭，Andersson R(2005)核因子kappab、活性氧和細胞信號在急性胰腺炎早期的作用。中華胃腸雜誌40:103-108。［Ref。］
47. Ramudo L, Manso MA, Sevillano S, de Dios I(2005)膽胰管阻塞急性胰腺炎中腺泡細胞分泌tnf - α及其調節機製的動力學研究。J病刊206:9-16。［Ref。］
48. 龍健，宋寧，劉雪萍，郭克軍，郭榮祥(2005)核因子- kappab活化對急性壞死性胰腺炎大鼠活性氧的影響。世界胃腸雜誌11:4277-4280。［Ref。］
49. altaavilla D, Famulari C, Passaniti M, Galeano M, Macri A，等。(2003)核因子- kappb缺陷小鼠的淡藍色誘導胰腺炎。實驗室投資83:1723-1732。［Ref。］
50. Baumann B, Wagner M, Aleksic T, von WG, Weber CK，等(2007)腺泡細胞中IKK2的組成性激活足以誘導胰腺炎在活的有機體內．《臨床投資雜誌》117:1502-1513。［Ref。］
51. O 'Reilly DA, Roberts JR, cartell MT, Demaine AG, Kingsnorth AN(2006)熱休克因子-1和核因子- kappab在人急性胰腺炎中被係統激活。JOP 7: 174 - 184。［Ref。］
52. 王曉燕，王曉燕，王曉燕，等(2003)急性胰腺炎患者外周血單個核細胞中核因子kappa B的表達。胰腺26日:350 - 356。［Ref。］
53. Chopra M, Reuben JS, Sharma AC(2009)急性肺損傷:凋亡和信號機製。實驗生物醫學(梅伍德)234:361-371。［Ref。］
54. Schwartz MD, Moore EE, Moore FA, Shenkar R, Moine P，等(1996)急性呼吸窘迫綜合征患者肺泡巨噬細胞中核因子-kappa B被激活。急救醫療24:1285-1292。［Ref。］
55. Ji Z, He L, Regev A, Struhl K (2019) NF-kB、STAT3和AP-1因子聯合作用介導的炎症調節網絡參與了許多人類癌症。美國環境科學學報116:9453- 9462。［Ref。］
56. Fujioka S, Niu J, Schmidt C, Sclabas GM, Peng B，等(2004)NF-κB與AP-1的聯係:NF- kb依賴性調控AP-1活性的機製。摩爾細胞生物學24:7806-7819。［Ref。］
57. 夏L,謝H,於Y,周H,王T, et al。(2016)NF -κB的影響和c-Jun AP-1反引起的凝血和炎症分子的表達-β2 gpi在鼠標。PLoS One 11: e0147958。［Ref。］
58. Jakkampudi A, Jangala R, Reddy BR, Mitnala S, Reddy DN，等(2016)NF-κB在急性胰腺炎中的作用機製及治療潛力。Pancreatology 16: 477 - 488。［Ref。］
59. 那葉娜，丁勇，懷爾德，沈強，周傑(2014)靶向激活蛋白1 (AP-1)的小分子抑製劑。醫學化學57:6930- 6948。［Ref。］
60. Kang M, Henrich CJ, Bokesch HR, Gustafson KR, McMahon JB，等人(2009)通過高通量細胞為基礎的“激活蛋白-1撞擊”試驗獲得選擇性小分子核因子- kappab抑製劑。Mol Cancer Ther 8: 571-581。［Ref。］
61. 於紅，林玲，張錚，張紅，胡紅(2020)靶向NF-κB通路治療疾病的機製和臨床研究。信號傳導目標Ther 5: 209。［Ref。］
62. Sandoval J, Pereda J, Pérez S, Finamor I, Vallet-Sánchez A，等(2016)急性胰腺炎早期和晚反應基因的表觀遺傳調控。中華免疫學雜誌19(2):337 - 337。［Ref。］

在此下載臨時PDF

條信息

文章類型:研究文章

引用:Twait EC, Samuel I(2021)外分泌胰腺細胞NF-κB/AP-1串擾ERK MAPK下遊。臨床檢驗醫學6(1):dx.doi.org/10.16966/2572-9578.137

版權:©2021 Twait EC，等人。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2020年12月20日

接受日期:2021年1月18日

發表日期:08年2月,2021年