臨床與檢驗醫學

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全血離心對糖化血紅蛋白測定的影響

悉尼彼得森1希拉裏·史密斯1斯蒂芬妮·科克倫1Quinnita裏德2Dararo Kenbata2威廉一個Anong1 *

1美國北卡羅來納州溫斯頓塞勒姆市溫斯頓塞勒姆州立大學健康科學學院臨床檢驗科學係
2美國佐治亞州亞特蘭大市皮埃蒙特亞特蘭大醫院實驗室

*通訊作者:William A Anong博士,溫斯頓塞勒姆州立大學健康科學學院臨床實驗室科學係,馬丁·路德·金大道601號(406樓)。溫斯頓塞勒姆,美國北卡羅來納州27110;電話:(336) 750 - 2470;電子郵件:anongwa@wssu.edu


摘要

背景:糖化血紅蛋白(HbA1c)是糖尿病的標誌,用於診斷、監測治療依從性和糖尿病患者的整體管理。HbA1c在臨床實驗室進行常規測量,反映患者前3 - 4個月的平均糖尿病狀態。由於臨床實驗室規程要求從HbA1c水平對紡絲標本進行排斥,本研究研究了離心前後對全血標本HbA1c測定值的影響。

方法:根據實驗室標準操作程序,提取正常、糖尿病前期和糖尿病患者的全血標本,處理和分析三種不同實驗室儀器上的糖化血紅蛋白水平。隨後,這些標本被離心,然後通過輕輕地前後搖晃重新懸浮,並在相同的儀器上重新分析。比較離心前後糖化血紅蛋白值,采用統計學分析評估差異。

結果:各組(正常組、糖尿病前期組、糖尿病組)離心前後全血糖化血紅蛋白(HbA1c)值差異無統計學意義。然而,不同儀器分析儀測量的糖化血紅蛋白值存在顯著差異(p值<0.05)。

結論:與目前的實驗室規程相反,標本離心不影響HbA1c水平。葡萄糖與血紅蛋白的結合強、穩定、不可逆。要求拒絕紡絲全血標本和隨後要求重繪新鮮標本的HbA1c水平的實驗室協議需要修改。在不影響患者結果的情況下,可以對離心的全血樣本進行糖化血紅蛋白重懸處理。

縮寫

糖化血紅蛋白;糖化血紅蛋白;ADA -美國糖尿病協會;OGTT -口服糖耐量試驗;-利鈉肽

關鍵字

全血;糖尿病;糖化血紅蛋白;離心分離;分析程序


簡介

糖尿病的診斷通常是通過測量患者的血糖來完成的。四種標準中的三種直接測量患者的血糖,而HbA1c的測量是間接的。它是對與葡萄糖結合或與β鏈n端纈氨酸的一個或兩個糖化的血紅蛋白A的比例的體外定量測量。根據美國糖尿病協會(ADA)[1],當(i)患者空腹血糖水平達到或超過126 mg/dl, (ii)患者存在血糖高於200 mg/dl的症狀,(iii)口服糖耐量試驗(OGTT) 2小時後達到或超過200 mg/dl和/或(iv)糖化血紅蛋白(HbA1c)高於6.4%時,即可診斷為糖尿病。高血糖反映了胰島素分泌的絕對或相對缺乏,或對胰島素作用的代謝反應差。糖化血紅蛋白水平反映了一個人在過去三到四個月的糖尿病狀況。血糖水平越高,紅細胞循環時間越長。與每日定期和重複的血糖水平監測不同,糖化血紅蛋白的測量對患者來說更方便,而且相對不受急性(如進食、禁食、壓力或疾病相關)血糖水平紊亂的影響。

由於血糖水平和糖化血紅蛋白之間存在著密切的聯係,因此測定的人類全血糖化血紅蛋白水平也可以間接用於診斷糖尿病。根據美國糖尿病協會的標準,糖化血紅蛋白水平大於6.4%可診斷為糖尿病。總的來說,OGTT在診斷糖尿病方麵比HbA1c更敏感。糖化血紅蛋白在識別糖尿病風險個體以及幫助糖尿病患者長期監測和管理血糖水平方麵更有特異性[1-3]。

糖尿病是美國工作年齡人群失明的主要原因[4],是美國終末期腎病和西方世界周圍神經病變最常見的原因[4,5]。較高的HbA1c反映血糖水平控製不良,增加患者發生微血管並發症的風險[5]。高糖化血紅蛋白水平與糖尿病並發症如視網膜病變、腎病、神經病變和微微尿之間有密切關係[6-10]。如果能更好地控製和管理患者的血糖水平,糖尿病並發症的相關費用可顯著降低[6,9]。為此,醫療保健專業人員經常使用HbA1c值來指導治療決策,評估護理質量,預測微血管並發症發生和進展的風險[5,10]。

在測定糖化血紅蛋白水平時,目前的臨床實驗室規程規定,在測量前不應對全血標本進行離心。也就是說,如果在重新懸浮液檢測糖化血紅蛋白前不小心旋轉,標本通常會被拒絕,並要求回收。在薰衣草頂管中靜脈穿刺收集的全血標本用於HbA1c量化也可用於其他檢測;如全血細胞計數(CBC)、紅細胞沉降率(ESR)和/或-利鈉肽(BNP)測量。一般建議在測量BNP之前進行CBC、ESR和/或hba1c分析。

血漿中測定BNP;因此,BNP測量方案要求在測試前對標本進行離心。一旦離心用於BNP分析,標本將被丟棄,不能重複用於HbA1c測量。然而,標本拒絕的理由是脆弱的,沒有科學知識為基礎。為什麼在BNP測量後離心填充的細胞不能重新懸浮和混合HbA1c水平需要調查。因此,本研究的目的是確定全血標本離心對HbA1c測量的影響。我們假設,全血樣本的離心和再懸浮不應改變測量的HbA1c水平,因為正如先前報道的,血紅蛋白β鏈上n端纈氨酸的糖基化是穩定和不可逆的。

材料和方法

全血標本靜脈穿刺入抗凝薰衣草頂管,室溫8小時內處理或2-8℃保存7天。機構審查委員會(IRB)的批準由溫斯頓-塞勒姆州立大學IRB合規官在讚助項目辦公室提交。本研究的所有標本均為臨床實驗室遺留標本,或來自臨床實驗室科學項目中學生誌願者練習的靜脈切開術技能。檢查標本,用幹淨的塗抹棒去除任何可見的纖維蛋白凝塊和顆粒物質。在使用三種不同的儀器分析儀(Architect 8100、西門子DCA和拜耳A1C Now+)進行分析之前,根據各自製造商的包裝說明書,通過低速來回搖晃或輕輕翻轉幾次來徹底混合所有標本,以確保均勻性。目前,臨床實驗室或護理點使用三種不同的儀器分析儀(Architect 8100、西門子DCA和拜耳A1C Now+)進行分析。每個儀器分析之前都有適當的校準和/或質量控製。分析後,樣品以6000轉/分鍾的轉速離心5分鍾,在重複測量分析儀上的hba1clevel之前,通過混合重新懸浮。

統計分析

根據美國糖尿病協會(ADA)的分類[1],將離心前後測量的HbA1c值分為非糖尿病、糖尿病前期和糖尿病三組。第一組(HbA1c<5.7%-非糖尿病),第二組(5.7-6.4,受損狀態或糖尿病前期),第三組(>6.4 -糖尿病)。使用IBM的社會科學統計軟件包(SPSS)軟件對每組所有HbA1c前和後的定量數據進行分析,以確定平均值和標準誤差。采用獨立t檢驗檢驗各組離心前後HbA1c測量值之間以及儀器分析儀之間的差異。P值<0.05為差異有統計學意義。

結果

結果表明,標本離心前和離心後的糖化血紅蛋白值相似,與測量所用的分析儀無關。糖化血紅蛋白(HbA1c)是診斷和監測糖尿病治療的重要常規檢查。為了了解標本離心對測量的糖化血紅蛋白水平的影響,采集全血並按照方法進行處理。4個初始樣品的糖化血紅蛋白測定值在離心前後相似。這一觀察結果首次表明,正如之前報道的那樣,葡萄糖始終與血紅蛋白[3]β鏈的n端纈氨酸永久結合,不受標本離心的影響。

為了進一步證明這一發現的有效性,我們在Architect 8100係統上分析了更多來自三個ADA組的樣本[非糖尿病組(20個樣本),糖尿病前期組(16個樣本)和糖尿病組(11個樣本)]的平均值和標準誤差。如圖1所示,各組標本離心前後hba1c結果具有統計學意義。為了證實Architect 8100的結果,我們在另外兩種用於測量HbA1c的臨床實驗室分析儀(Siemen DCA和Bayer A1C Now+)上重複分析了更多的樣本[非糖尿病(12個樣本),糖尿病前期(6個樣本)和糖尿病(5個樣本)]。圖2的結果再次顯示離心前後hba1c值無統計學差異。因此,我們得出結論,血紅蛋白的糖基化是穩定的,不受離心的影響。這些發現同樣適用於更高的離心速度。在不同儀器之間觀察到的HbA1c值的變化是意料之中的,因為正如先前報道的,血紅蛋白的變化會幹擾儀器的靈敏度[3,11]。

由於本研究源於在HbA1c測量前意外紡絲測定BNP水平時,對共有(HbA1c和BNP)標本的排斥,我們決定測試血漿體積對測量的HbA1c水平的影響。首先對全血標本(2個)進行處理,並在建築師上分析HbA1c值,紡絲和去除500 μ l的血漿(假設這一量是用於BNP測量的體積)。將填充的紅細胞按所述混合後重新懸浮,並在儀器上再次分析。血漿體積的減少不影響離心前後全血HbA1c的測量(數據未顯示)。這一觀察結果表明,儀器分析儀隻測量糖化紅細胞的比例。因此,HbA1c水平與紅細胞懸浮的血漿體積無關。

圖1:Architect 8100儀器分析各組標本離心前後HbA1c值(平均值±SEM)比較,各組間離心前後HbA1c值無統計學差異。非糖尿病(4.93±0.011)、糖尿病前期(5.97±0.023)、糖尿病(9.80±0.063)

圖2:兩種不同儀器(Siemen DCA和拜耳A1C Now+)的平均HbA1c值在離心前後組間比較無統計學差異(p值小於0.05)。Siemen DCA的均值和標準誤差分別為:非糖尿病(5.25±0.029)、糖尿病前期(6.36±0.042)和糖尿病(12.58±0.070);拜耳A1CNow +包括:非糖尿病(5.10±0.122)、糖尿病前期(6.21±0.071)和糖尿病(10.60±0.106)。
然而,儀器測量之間的差異顯著,p值均小於0.05[非糖尿病前/後為0.003 / 0.013,糖尿病前/後為0.038 / 0.004,糖尿病前/後為0.004 / 0.019]。

討論

我們提供的證據表明,測定的糖化血紅蛋白值在統計學上不受全血標本離心的影響。離心前後測定值穩定。我們的發現與以往的研究一致,血紅蛋白n端纈氨酸的糖基化是穩定和不可逆的。一旦附著,葡萄糖就會在紅細胞的整個生命周期(約4個月)內與血紅蛋白結合。離心後的標本排斥是過早的,可能代價高昂。因此,臨床實驗室要求排斥和重抽紡絲標本的程序應加以修訂。這樣的修訂不會損害患者的結果和護理質量。事實上,修訂應該改善周轉時間,病人護理和降低整體醫療成本。與那些沒有糖尿病的人相比,一個在40歲被診斷為糖尿病的人在其剩餘的生命中花費大約124,000美元用於糖尿病的醫療支出[12]。消除不必要的標本排斥可以降低成本,特別是對糖尿病患者和少數族裔群體而言。

糖化血紅蛋白(HbA1c)對患者護理的好處已得到充分證明。糖化血紅蛋白(i)有助於診斷糖尿病,(ii)有助於識別可能發生糖尿病的患者,(iii)用於監測糖尿病患者的長期血糖控製情況。此外,準確的測量可以幫助醫生有效地處理糖尿病引起的長期微血管並發症,如失明、終末期腎病和神經損傷[7-10]。這些努力應顯著降低與這些慢性疾病管理相關的長期成本。

HbA1c水平的變化與影響紅細胞周轉率的幾個因素有關,如患者的年齡、種族、民族、血紅蛋白病和共存的醫療條件[1,11,13]。我們的研究表明,離心不影響糖化血紅蛋白的糖基化水平。血紅蛋白病和各種血紅蛋白變異對分析儀造成主要幹擾,從而影響HbA1c測量[3]。在非洲和東南亞等血紅蛋白變體占優勢的地區,果糖胺是[11]型糖尿病的推薦替代標記物,而不是HbA1c,因為需要在較短的時間內控製血糖。果糖胺反映了葡萄糖與血漿蛋白的結合,主要是白蛋白,其半衰期約為2 - 3周。

最後,由於目前的實驗室實踐拒絕紡絲標本用於HbA1c測量,我們提供了相反的新證據。在不影響患者護理的情況下,我們的發現表明紡絲樣品可以重新懸浮、分析和報告結果。先前發表的結果支持糖-血紅蛋白相互作用是穩定和不可逆的[2]。因此,要求排斥/重繪離心後標本的實驗室規程需要修改。修訂應改善周轉時間,以更好地照顧病人;如果消除了不必要的標本拒收,則減少與重繪相關的成本和整體醫療支出。醫療保健支出總額下降的程度需要進一步研究。除了成本,患者暴露在多次采血相關的風險,如注射疼痛,感染和可能的血腫被消除。


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條信息

文章類型:研究文章

引用:Peterson S, Smith H, Cochrane S, Reid Q, Kenbata D,等(2018)全血離心對糖化血紅蛋白測定的影響。臨床檢驗醫學3(1):dx.doi。org/10.16966/2572 - 9578.118

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出版的曆史:

  • 收到日期:2018年3月15日

  • 接受日期:2018年3月30

  • 發表日期:05年4月,2018