文摘

目的:卡式肺致病真菌,引起嚴重的免疫功能低下的患者之間的間質性肺炎。移植患者傾向於p .卡式肺肺炎(PJP),尤其是那些在免疫抑製治療或與移植排斥。我們描述這兩例腎移植患者PJP和演示的重要性的分子生物學診斷和井下供電基因突變的發生率。

材料和方法:的診斷卡式肺使用傳統技術:直接檢查染色GomoriGrocott修改周報(GG),穆May-Grunwald染色(“萬人迷”女友),和直接免疫熒光(DIF) MONOFLUO^™卡式肺IFA Biorad測試。分子診斷與實時PCR (Liferiver完成^™卡式肺^®)和聚合酶鏈reaction-restriction片段長度多態性(PCR-RFLP)。

結果:兩個樣本的“萬人迷”女友,GG和DIF染色不允許檢測囊性或植物人狀態。實時PCR顯示陽性結果的數量的DNA樣本每毫升每毫升103份和104份。放大的井下供電基因顯示沒有發生突變的基因。改善患者的一般情況與磺胺甲惡唑/甲氧苄氨嘧啶治療14天之後。

結論:我們的研究表明,PCR是一個更快、更敏感的技術比染色技術。目前,實時PCR同時提供定量和定性的方法檢測閾值很低,使得它可以簡單區分殖民和感染。

關鍵字

卡式肺;肺炎;實時聚合酶鏈反應;腎移植

介紹

Pneumocystosis是一個投機取巧的黴菌病所致卡式肺nubiquitous真核微生物,真菌中分類1980 [1]。多達45%的人類免疫缺陷病毒(HIV)病人患有肺孢子菌肺炎(PJP)。此外,non-HIV-patients PJP病例增加是由於糖皮質激素的使用,化療或其他免疫抑製藥物[1 - 3]。此外,在移植患者,它是一個日益增長的問題:在美國,25%的病人患有PJP [3]。

的微生物診斷PJP通常是基於微觀的真菌在呼吸道標本染色方法。分子生物學技術的發展大大提高了診斷[4 - 6]。分子方法相比,表現出更多的敏感性和特異性微生物方法[7,8]。此外,通過定量PCR (qPCR),真菌的數量在一個標本,甚至可以確定病人的狀態(4、9、10)。

這種疾病的預防和治療是基於(使用)或複方磺胺甲惡唑甲氧苄氨嘧啶磺酰胺類特別是組合。因此,選擇情況下的阻力與突變的dihydropteroate合成酶(井下供電),磺胺類藥的目標(11、12)。

我們在這裏描述兩例腎移植患者PJP和演示的重要性分子生物學診斷和流行的井下供電基因突變。

方法

例描述

案例1:一名53歲婦女,患有腎功能衰竭引起的多囊腎疾病,2016年對腎移植慢性排斥反應下黴酚酸鈉metasulfobenzoate Mofetil-tacrolimus-Prednisolone。她承認無力組成的一般情況的改變,厭食、發熱39°C,呼吸急促。實驗數據顯示,C反應蛋白(CRP)的355毫克/毫升,Hb = 9.2 g / dl,白細胞= 7800 /毫米³、PLT = 181000 /毫米³,尿素= 14.5更易與l,肌酐= 303µmol / l, K = 4.2更易/ l,血清鈣= 2.53更易/ l。胸部x光顯示雙邊alveolar-interstitial綜合症。血清學的念珠菌和曲黴菌是消極的;尋找BK的痰是負麵的。巨細胞病毒(CMV) PCR是負麵的。微生物調查顯示尿路感染大腸杆菌和積極的p .卡式肺實時PCR。病人最初Tazocillin-Ciprofloxacin-Sulfamethoxazole /甲氧苄氨嘧啶、頭孢他啶和磺胺甲惡唑/甲氧苄氨嘧啶。一般情況與第二個負麵。一個星期後p .卡式肺PCR。

案例2:一個人,自2002年以來62歲與腎髒移植。2018年貪汙活檢穿刺顯示額外特發性膜性腎小球腎炎的複發時穿上環孢黴素和高劑量的類固醇。入院時臨床檢查指出發燒38°C和下肢水腫。胸部x光顯示alveolar-interstitial綜合症。

血清學的念珠菌和曲黴菌是負的。尋找BK在尿液和唾液是負麵的。血液和尿液培養結果為陰性。巨細胞病毒PCR是積極與1136拷貝/毫升。同時,聚合酶鏈反應p .卡式肺是正麵的。病人在治療Cymevan、安滅菌和磺胺甲惡唑/甲氧苄氨嘧啶、減少劑量的免疫抑製藥物。

發展,改善一般情況與第二個PCR後14天p .卡式肺負的。

微生物方法

兩個病人呼吸道標本(痰)在6000 g離心10分鍾。懸浮顆粒(約200µl)的一部分被用於顯微鏡檢查(“萬人迷”女友,GG汙漬)和200年µl用於實時PCR檢測和量化的p .卡式肺DNA和PCR-RFLP井下供電的檢測基因突變p .卡式肺菌株。

傳統techniques-microscopy

“萬人迷”女友汙點強調和/或營養體intra-cystic屍體p .卡式肺。染色染色細胞核的肺孢子菌生命周期階段purple-pink但沒有汙點的細胞壁在GG上牆的囊腫p .卡式肺黑色棕色綠色背景。

MONOFLUO DIF使用工具包^™卡式肺IFA試驗(Biorad)允許突出存在的病原體免疫標記(囊腫或營養形式)。附件fluorescein-labeled病原體的抗體了蘋果綠著色根據製造商的指示使用。

分子診斷

實時PCR使用生命河^™卡式肺^®允許檢測和量化的p .卡式肺DNA。PCR-RFLP用於井下供電軌跡分析。

結果

兩個樣品的“萬人迷”女友和GG染色不允許檢測囊性或植物人狀態。DIF技術也仍為負值。實時PCR顯示一個積極的結果兩個樣品103份分別每毫升和104拷貝/毫升。

(圖1)顯示的量化p .卡式肺DNA。(圖2)說明了井下供電基因的擴增與常規PCR 370個基點。PCR RFLP顯示沒有發生突變的基因的兩種情況(圖3)

圖1:的曲線PJ DNA的定量實時PCR。
我:放大曲線;A1 A6:標準的DNA濃度107 - 10 2份/µl;A1 (107), A2 (106), A3 (105), A4 (104), A5 (103), A6(102),案例1:樣品測試;-:-控製。
2:的標準曲線值構建的Cp(交點)與日誌DNA拷貝數/(範圍= 107 - 102冊/µl)。

圖2:conventionnal PCR產物的瓊脂糖凝膠電泳p .卡式肺井下供電基因370 pb。
道:米(100 bp DNA標記大小);1(案例1);2(例2);P(積極的控製);N(-控製)。

圖3:瓊脂糖凝膠電泳RFLP-PCR產品p .卡式肺基因通過accI和HaeIII井下供電。
道:米(100 bp DNA標記大小);1和2(例1和例2 aftre AccII限製);I和II(例1和例2後由HaeIII限製)。

改善患者的一般情況與Bactrim經過14天的治療^®是指出。甚至實時pcrp .卡式肺在這個區間內是負的。

討論

目前,pneumocystosis病例感染艾滋病毒的患者往往減少由於使用反卡式肺化學預防(1,4,13)。然而,其發病率已大大增加在過去的15年裏與其他誘發免疫缺陷病人[1],特別是移植受者(14 - 17)。在我們的研究中,我們診斷的存在p .卡式肺在兩腎移植病人,non-HIV。瑪格尼,PJP等人報告了805例,包括264 (33%)non-HIV, 86發生了移植其中37個腎移植[18]。

在我們的研究中,1例有慢性排斥反應的概念。案例2有巨細胞病毒感染。中位數時間從移植到疾病18個月的開發例1和例2 16年。幾個危險因素已經被確認為PJP誘發移植患者,尤其是在免疫抑製治療,移植排斥、巨細胞病毒感染,和老年(3、19)。Bostnar,等人報道,13/601(2.2%)的移植患者PJP發展。中位數時間從移植到開發的疾病是17個月[4]。三個病人PJP在移植後第一年,三個移植排斥,六有巨細胞病毒感染。新研究表明,大劑量免疫治療有著悠久的皮質類固醇與anti-lymphocyte抗體提供了特殊的危險因素和治療腎移植術後PJP [20]。

PJP尤其與漸進性呼吸困難表現為幹咳,產生一個血氧過低的間質性肺病經常雙邊發展發熱上下文[6]。我們的病人患有發熱、咳嗽,alveolar-interstitial綜合症。

實時PCR陽性兩個樣品而沒有囊腫和/或營養體被傳統的技術檢測。染色技術是可以接受的敏感性(89 - 98%)支氣管肺泡灌洗樣品但是低(35 - 78%)願望和痰液樣本(1、5)。博薩爾特,等人的研究中,所有31個pcr陽性,其中30例陽性DIF。唯一不和諧的結果有慢性阻塞性肺疾病患者[4]。缺乏敏感性的微觀方法解釋閱讀的困難當樣本非侵入性或膚淺。事實上,采用分子生物學技術在診斷PJP增加的檢測靈敏度p .卡式肺(86 - 100%)無論樣例支氣管肺泡灌洗、吸入物、或痰樣本[6]。實時PCR的主要優勢同時放大和檢測步驟的性能在一個封閉的係統,它可以降低汙染的風險。實時PCR陽性控製也有明確的量化(10⁷毫升¹副本)。此外,它允許DNA被發現即使在少量能夠指定是否簡單的殖民或感染,因此確定病人的狀態(5 4)。

的出現p .卡式肺最近提出的耐藥性突變基因編碼dihydropteroate合成酶(井下供電)。Jarboui,等人透露,21免疫功能低下的患者,隻有17(81%)被井下供電放大積極。隻有兩個病人有一個協會的野生基因型和突變基因型[21]。然而,貝瑟等人並沒有發現任何從瑞典病人井下供電基因的突變。同樣地,我們沒有發現任何井下供電的基因突變的病人和改善病人的一般情況後14天治療[11]。的缺失突變的結果是隻使用磺胺甲惡唑/甲氧苄氨嘧啶作為一線治療PJP (11、22)。

結論

PJP是一種嚴重的機會性呼吸道感染,可以使許多immunosuppression-related疾病的進程。總之,我們的結果表明,實時PCR是更敏感比傳統技術可以被添加到每個專業實驗室的診斷阿森納。另一方麵,井下供電的頻率突變可能更高,如果研究艾滋病毒的病人。的確,他們目前接觸磺胺類藥可以誘導阻力這些分子。

的利益衝突

作者宣稱沒有利益衝突。

引用

1. 麵粉糊,岡薩雷斯F, Roux M, Mehrad M, Menotti J, et al .(2014)更新在肺卡式肺non-HIV感染病人。地中海Mal感染44:185 - 198。(Ref。]
2. Gaborit BJ, Tessoulin B, Lavergne RA, Morio F,薩根C, et al。(2019)結果和預後因素卡式肺肺炎免疫功能不全的成人:一個前瞻性研究。安重症監護9:131。(Ref。]
3. Chatelanat O, Delden簡曆,阿德勒D, Guerne PA, Nendaz M, et al。(2018)的危險因素和預防措施卡式肺艾滋病毒陰性患者的肺炎。牧師地中海瑞士14:1829 - 1833。(Ref。]
4. 博薩爾特年代,Muhlethaler K, Garzoni C,皮毛H(2020)實時PCR直接免疫熒光診斷更可取卡式肺肺炎感染艾滋病毒的病人嗎?BMC Res指出13:235。(Ref。]
5. 教堂DL, Ambasta,威爾默Williscroft H,裏奇G, et al。(2015)的開發和驗證卡式肺實時聚合酶鏈反應測定肺孢子菌肺炎的診斷。可以J感染說Microbiol 26日:263 - 267。(Ref。]
6. Kaouecha E, Kallel K, Ananea年代,Belhadja年代,Abdellatif, et al。(2009)耶氏肺孢子菌pneumocystosis: PCR和染色技術的比較研究。中華病理學雜誌57:373 - 377。(Ref。]
7. 胡Irinyi L, Y,黃平君MTV, Pasic L,韓禮德C, et al。(2020) Longread基礎臨床宏基因組測序檢測和確認卡式肺直接從臨床標本:一種範式轉移,真菌學的診斷。地中海Mycol 58: 650 - 660。(Ref。]
8. Rostved AA,天使M, Kurtzhals日航,Sørensen黨衛軍,拉斯穆森,et al。(2013)在腎和肝移植患者肺孢子菌肺炎爆發引起的遺傳型的不同的菌株卡式肺。移植96:834 - 842。(Ref。]
9. 山本Matsumura Y, Tsuchido Y, M, Nakano年代,Nagao M(2019)發展一個完全自動化的PCR檢測分析卡式肺使用GENECUBE係統。地中海Mycol 57: 841 - 847。(Ref。]
10. Casanova Fauchier T, Hasseine L, Gari-Toussaint M, V,馬蒂點,et al .(2016)檢測卡式肺通過定量PCR區分殖民和免疫功能不全的艾滋病毒陽性或陰性患者的肺炎。中國Microbiol 54: 1487 - 1495。(Ref。]
11. Kronbichler, Kerschbaum J, Gopaluni年代,越南計量J,甲氧苄氨嘧啶Alberici F, et al .(2018)預防措施防止嚴重/危及生命的感染後利妥昔單抗在antineutrophil細胞質antibody-associated血管炎。77年安大黃說:1440 - 1447。(Ref。]
12. Szydłowicz M, Jakuszko K, Szymczak Piesiak P, Kowal, et al。(2019)的患病率和基因分型卡式肺在腎移植recipients-preliminary報告。Parasitol Res 118: 181 - 189。(Ref。]
13. Carmona EM,資金流啊(2011)更新肺孢子菌肺炎的診斷和治療。其他副詞和Dis 5: 41 - 59。(Ref。]
14. Borstnar年代,Lindic J,境內J, Kandus, Pikelj, et al . (2013)卡式肺在腎移植受者肺炎:國家中心體驗。移植Proc 45: 1614 - 1617。(Ref。]
15. 科斯塔基斯ID、Sotiropoulos GC Kouraklis G(2014)在肝移植受者卡式肺肺炎:係統回顧。移植Proc 46: 3206 - 3208。(Ref。]
16. Iriart X,布阿爾ML, Kamar N,貝瑞在實體器官移植受者(2015)肺孢子菌肺炎。J真菌(巴塞爾)1:293 - 331。(Ref。]
17. Maruschke M, Riebold D, Holtfreter MC Sombetzki M, Mitzner年代,et al。(2014)肺孢子菌肺炎(PCP)和卡式肺腎移植患者的馬車:隻有體驗。維恩Klin Wochenschr 126: 762 - 766。(Ref。]
18. 瑪格尼D, Angoulvant Botterel F, Bouges-Michel C, Bougnoux我,et al。(2009)在巴黎Pneumocystosis網絡:評估5年的監測(2003 - 2007)。J地中海Mycol 19: 290 - 293。(Ref。]
19. 李SH,哈肯塔基州,Joo DJ,金女士,Kim SI et al。(2017)的危險因素卡式肺肺炎(PJP)在腎移植受者。Sci代表7:1 - 8。(Ref。]
20. De Langhe Verhaert M, Blockmans D, E, Henckaerts L (2020)卡式肺肺炎的病人治療係統性自身免疫性疾病:病人特點和結果的回顧性分析。Scand J Rheumatol 49: 345 - 352。(Ref。]
21. Jarboui馬,Sellami Sellami H, Cheikhrouhou F, F Makni, et al . (2011) Dihydropteroate合酶基因突變在耶氏肺孢子菌菌株與免疫功能不全的患者。中華醫學雜誌(巴黎)59:222 - 225。(Ref。]
22. Ozkoc年代,Erguden C, Delibas某人(2018)缺乏dihydropteroate合酶基因的突變卡式肺從土耳其愛琴海地區的菌株分離。Parasitol Res 117: 3103 - 3108。(Ref。]

在這裏下載PDF臨時

條信息

文章類型:病例報告

引用:Nawel B, Latifa M, Hana年代,實施K, Yosra年代,et al。(2021)卡式肺肺炎:分子在兩腎移植病例診斷和藥敏。中國案例斯圖6 (2):dx.doi.org/10.16966/2471 - 4925.220

版權:©2021 Nawel B等。這是一個開放的文章下分布式知識共享歸屬許可條款,允許無限製的使用、分配、和繁殖在任何媒介,被認為提供了原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2021年4月20日,

接受日期:2021年5月04

發表日期:2021年5月11日