摘要

PAX8是一種細胞譜係特異性轉錄因子。它在甲狀腺、腎髒和中腎和Müllerian導管的其他衍生物的發育中發揮重要作用。充分的證據表明PAX8是甲狀腺、腎髒和上皮Müllerian腫瘤的敏感和特異性標記物。然而，目前關於PAX8的免疫反應性以及在非上皮性婦科腫瘤中的診斷價值的文獻很少。當前研究的主要目標是調查PAX8在非上皮性和婦科起源的生殖細胞腫瘤中的表達。據此，共評估了80例婦科腫瘤。采用單克隆PAX8免疫染色，病例如下;子宮平滑肌瘤(n=20)、惡性潛能不確定的子宮平滑肌瘤(n=2)、子宮平滑肌肉瘤(n=4)、成熟囊性畸胎瘤(n=11)、不成熟畸胎瘤(n=3)、卵巢甲狀腺瘤(n=1)、支持- leydig細胞瘤(n=2)、含卵黃囊成分的混合生殖細胞瘤(n=5)、卵巢纖維瘤/纖維瘤(n=16)、卵巢血管肉瘤(n=1)、卵巢生殖障礙性細胞瘤(n=2)、類固醇細胞瘤NOS (n=1)、硬化性間質瘤(n=1)、成人(n=6)和幼年(n=2)顆粒細胞瘤，子宮內膜間質肉瘤(1例)、子宮絨毛膜癌(1例)、子宮多形性未分化肉瘤(1例)。卵巢囊腫呈強陽性，而卵黃囊腫瘤僅為局灶性陽性。 The remaining tumors were negative. In summary, this paper documents PAX8 focal immunoreactivity in yolk sac tumors, verification on a larger number of cases is prudent.

關鍵字

PAX8;免疫組織化學;米勒;Non-epithelial;生殖細胞腫瘤

簡介

PAX8是一種細胞譜係特異性轉錄因子。它是配對盒(PAX)轉錄因子家族的九個成員之一，具有結構相似性。PAX8在甲狀腺、腎髒、中腎和Müllerian導管[1]衍生器官的發育中起著至關重要的作用。PAX8由450個氨基酸組成，編碼2q13染色體上的一個基因。正常組織如朗格漢斯胰島細胞、甲狀腺濾泡細胞、子宮內膜黏膜、卵巢包涵囊腫、腎小管上皮、鮑曼包膜、男性睾丸網至射精管上皮等染色。據報道，PAX8在睾丸輸精管和間質中呈陰性[2-4]。

最近的證據強調了PAX8免疫染色-一種核標記-在診斷性外科病理中的應用。PAX8在甲狀腺、甲狀旁腺、腎髒、神經內分泌、Müllerian上皮性腫瘤和b細胞淋巴瘤等中表達[5-8]。關於pax8在非上皮性婦科腫瘤和生殖細胞腫瘤中的免疫反應性的數據缺乏和/或有限。本研究的目的是記錄PAX8在這些腫瘤中的染色模式。據我們所知，這是英文文獻中關於非上皮性婦科腫瘤的第一個報道數據。

方法

主題

這項研究得到了阿爾艾因醫療區人類研究倫理審查委員會的批準。協議號為ERH-2016-428116- 013。對Tawam病理實驗室接收的病例進行基於Cerner計算機的搜索。這些病例是通過Cerner計算機搜索確定的。所有2010-2015年間在病理實驗室接受的婦科(非上皮性和生殖細胞腫瘤)切除術都被包括在內(即連續的)。共鑒定出80例婦科腫瘤。案例如下;平滑肌瘤(20例)，惡性潛能不確定的平滑肌瘤(2例)，平滑肌肉瘤(4例)，未分化多形性肉瘤(1例)，絨毛膜癌(1例)，子宮內膜間質肉瘤(1例)，纖維瘤/纖維膜瘤(16例)，非生殖細胞瘤(2例)，卵巢硬化性間質瘤(1例)，成人顆粒細胞瘤(6例)，青少年顆粒細胞瘤(2例)，卵黃囊腫瘤作為混合生殖細胞瘤的組成部分(5例)，成熟囊性畸胎瘤(11例)、卵巢甲狀腺瘤(1例)、未成熟畸胎瘤(3例)、支持間質細胞瘤(2例)、甾體腫瘤NOS(1例)、卵巢血管肉瘤(1例)。所有病例的原始蘇木精和伊紅染色切片均由病理學家(Albawardi或Alameeri)獨立複查，以確認原始診斷。

免疫組織化學

使用Cell Marque公司生產的PAX8小鼠濃縮單克隆抗體。克隆體為MRQ-50 (Cat# 363m-16-Lot#1531007B, 6600 Siera College Blvd- Rocklin-USA)。陽性(甲狀腺)和陰性(胎盤、肺和前列腺)的對照組被放置在每一張幻燈片上。驗證過程按照美國病理學家學院的要求進行。抗體初始稀釋倍數為1:100。增加到1:200以消除非特異性染色。從石蠟包埋的福爾馬林-10%緩衝福爾馬林固定組織中獲得4微米厚的切片。玻片在烤箱中保存30分鍾，然後脫蠟再水化。使用低pH值的6檸檬酸緩衝液，在97°C下處理20分鍾。使用10- DAKO-48免疫染色劑和Envision FLEX檢測試劑盒(聚合法)。 The antibody was incubated for 20 minutes, followed by mouse linker for 15 minutes, and then labelled polymer for 20 minutes, and substrate chromogen for 5 minutes repeated twice. Finally, counter stained with hematoxylin for 5 minutes. As per the antibody manufacturer’s leaflet, staining of mature B lymphocytes in tonsil, thymus, and bone marrow was reported.

結果

共80例婦科非上皮性和生殖細胞性腫瘤進行了PAX8免疫反應性的目視評估。如果在5%以上的腫瘤細胞核中發現中度或強染色[2]，則認為PAX8陽性。不符合這一標準的病例被視為陰性。PAX8陽性的病例，如果染色呈斑塊狀且涉及的腫瘤細胞核少於50%，則進一步表征為局灶性。使用來自Cell Marque的PAX8小鼠單克隆抗體-克隆MRQ50-。製造商指南報告了扁桃體、胸腺和骨髓中成熟B淋巴細胞的染色。在目前的研究中，浸潤性B淋巴細胞，甚至漿細胞均呈陽性。一例卵巢甲狀腺腫-如預期- PAX8表現出強烈的彌漫性陽性。此外，5例混合生殖細胞腫瘤在卵黃囊成分內可見斑塊狀局灶性中度染色(圖1)。

相反，成熟囊性畸胎瘤(n=11)、不成熟畸胎瘤(n=3)、硬化性基質瘤(n=1)、Sertoli-Leydig細胞瘤(n=2)、卵巢間質/卵泡、卵巢纖維瘤/纖維膜瘤(n=16)、卵巢血管肉瘤(n=1)、卵巢生長性異常瘤(n=2)、類固醇細胞瘤NOS (n=1)、成人(n=5)、少年(n=2)粒細胞瘤均為陰性(圖2)。此外，子宮平滑肌肉瘤(n=4)、惡性潛能不確定的平滑肌瘤(n=2)、平滑肌瘤(n=20)、包括細胞變異(n=3)、子宮多形性未分化肉瘤(n=1)、子宮內膜間質肉瘤(n=1)和子宮絨毛膜癌(n=1)均無反應(表1)。

圖1:PAX8在非上皮性和生殖細胞性婦科腫瘤中的表達模式。A)卵巢甲狀腺腫中倍高亮(H&E)，可見充滿膠質的甲狀腺濾泡。B)卵巢肉瘤PAX8免疫染色，卵泡上皮染色強烈且彌漫性。C)卵黃囊瘤(H&E)，原始細胞排列在網狀的吻合間隙內。D)卵黃囊腫瘤PAX8免疫染色，局灶性免疫反應。E)支持細胞瘤(H&E)中倍鏡高亮顯示，支持細胞呈中空小管排列，間質中有Leydig細胞簇。F)支持leydig細胞腫瘤缺乏PAX8表達。

組織學類型	不。的情況下	解剖網站	負	積極的	染色強度‡
平滑肌瘤	20.	子宮	20.	___	___
樹樁*	2	子宮	2	___	___
平滑肌肉瘤	4	子宮	4	___	___
未分化多形性肉瘤	1	子宮	1	___	___
絨毛膜癌	1	子宮	1	___	___
子宮內膜基質肉瘤	1	子宮	1	___	___
纖維瘤/ Fibrothecoma	16	卵巢	16	___	___
無性細胞瘤	2	卵巢	2	___	___
硬化性間質瘤	1	卵巢	1	___	___
成人顆粒細胞瘤	6	卵巢	6	___	___
幼年顆粒細胞瘤	2	卵巢	2	___	___
卵黃囊腫瘤	5	卵巢	___	5	2 +
成熟囊性畸胎瘤	11	卵巢	11	___	___
甲狀腺腫Ovarii	1	卵巢	___	1	3 +
未成熟畸胎瘤	3.	卵巢	3.	___	___
支持間質細胞瘤	2	卵巢	2	___	___
類固醇腫瘤NOS	1	卵巢	1	___	___
血管肉瘤	1	卵巢	1	___	___

表1:PAX8在80例婦科非上皮性和生殖細胞腫瘤中的表達。
殘肢:惡性潛能不確定的平滑肌腫瘤。
‡染色強度分為輕度(1+)、中度(2+)或強烈(3+)。
†所有卵黃囊腫瘤病例均為混合生殖細胞腫瘤。

討論

配對盒(PAX)基因家族由9個基因組成，編碼調控細胞發育、器官發生甚至腫瘤發生的轉錄因子。PAX8是一種腎髒譜係轉錄因子，對Wolffian和Müllerian導管[1]的發展至關重要。報道的PAX8在b細胞淋巴瘤中的免疫反應性，歸因於PAX8多克隆抗體n端與PAX5或PAX6 n端區域的交叉反應。後者是公認的b細胞譜係標誌。PAX8和PAX5/PAX6在該區域具有較高的同源性[9,10]。

PAX8在成人組織中表達有限。它是腎髒和Müllerian腫瘤[11]的特異性標記物。醫學文獻強調PAX8作為腎細胞癌、卵巢上皮癌、甲狀腺癌和子宮內膜癌[2]的敏感標記物。例如，PAX8在44-71%的卵巢表麵上皮細胞[12]中表達，在83%的病例中，PAX8是診斷腎細胞癌的有用標記物。事實上，PAX8對原發性和轉移性腎腫瘤都有染色作用[12,13]。少數男性生殖道上皮性腫瘤顯示PAX8免疫陽性。PAX8在附睾漿液性囊腺瘤、睾丸網癌、Wolffian附件瘤和精囊內膜樣癌[3]中均有免疫反應。乳腺、胰膽管和胃腸道腫瘤的PAX8陰性，這使得它在原發性[2]未知的轉移性癌的診斷小組中是一個有價值的標記物。

另一方麵，目前關於PAX8在非上皮性腫瘤中的染色模式的資料很少。一項研究報告PAX8在子宮腺瘤樣腫瘤[14]中呈陰性。除A型一例[15]外，其餘腹膜間皮瘤均為陰性。另一項研究證明，黑色素瘤、胃腸道間質瘤、平滑肌肉瘤和嗜鉻細胞瘤[2]中缺乏PAX8染色。6例子宮內膜間質肉瘤累及膀胱，1例PAX8陽性。Roma[17]在2例中腎癌肉瘤中記錄了PAX8的反應性。他注意到肉瘤組分的染色強度較弱。據報道，2例卵巢卵黃囊瘤(YST) PAX8[18]陰性。使用組織微陣列技術研究了100例睾丸生殖細胞腫瘤，多克隆抗體[19]未能記錄PAX8的免疫反應性。MD Anderson癌症中心的一項研究發現了32例原發性縱隔精原細胞瘤，其中2例(6%)PAX8表達[20]。

子宮癌肉瘤，PAX8在不同腫瘤成分(癌性、肉瘤性和未分化性)中表達不同，報道的PAX8陽性分別為97%、73%和33%[21]。

在本研究中，大多數評價的婦科腫瘤PAX8單克隆抗體陰性。名單包括;卵巢纖維瘤/纖維膜瘤、生殖細胞異常瘤、顆粒細胞瘤、卵巢血管肉瘤、子宮平滑肌瘤、惡性潛能不確定的子宮平滑肌瘤、子宮內膜間質瘤、子宮未分化肉瘤、絨毛膜癌。1例卵巢甲狀腺腫顯示PAX8染色強烈(圖1)。此外，卵黃囊腫瘤顯示局灶性中度PAX8染色(圖2)。這一最後的發現與英文文獻[18]中大多數報道的數據形成對比。然而，Ravishankar等人[22]觀察到PAX8免疫染色在卵黃囊腫瘤中的可變表達。腫瘤PAX8染色的不一致可能是由於使用了不同的克隆和/或方法學。變異的另一個來源源於日常臨床實踐中免疫染色反應性的視覺評估和解釋。視覺評估在一定程度上是主觀的，並可能導致結果的異質性。值得注意的是，PAX8免疫反應性評分采用視覺評估。

圖2:非上皮性和生殖細胞性婦科腫瘤PAX8免疫組化染色。A)血管肉瘤的中倍鏡(H&E)，顯示由非典型內皮細胞排列的吻合血管通道。B)血管肉瘤對PAX8無免疫反應。C和D)中倍鏡高亮顯示PAX8陰性的未分化多形性肉瘤。E)幼粒細胞瘤(H&E)，顯示腫瘤細胞片被大小和形狀各異的濾泡打斷。F)幼年顆粒細胞瘤PAX8陰性。G和H)非生殖細胞瘤的中倍鏡高亮，特征性的肺泡形態，纖維間隔交叉，腫瘤PAX8陰性。

卵黃囊腫瘤PAX8免疫反應具有特別的診斷價值，特別是當鑒別診斷為幼年顆粒細胞瘤或胚胎癌時，兩者均為陰性。PAX8染色在卵黃囊腫瘤中，特別是乳頭狀和網狀模式，可能會造成乳頭狀腎細胞癌甚至腎小管囊性癌的診斷陷阱。因此，了解臨床病史和放射學表現，以及仔細的顯微鏡檢查其他特征是至關重要的。因此，纖維血管核心中泡沫組織細胞的存在指向乳頭狀腎細胞癌，而鞋釘核應提示腎小管囊癌的可能性。當有疑問時，應使用合適的免疫染色組(如CD10, AMACR)。

與PAX8多克隆抗體的交叉反應被廣泛觀察到，這與PAX5和PAX6的高度序列同源性有關，兩者都是B細胞從pro-B到漿細胞階段的免疫標誌物。在目前的研究中，使用了來自Cell Marque的單克隆小鼠抗體(克隆MRQ50)。浸潤性B淋巴細胞，甚至漿細胞均呈陽性。與單克隆抗體的交叉反應尚未見報道。然而，根據製造商的細胞商標手冊，扁桃體、胸腺和骨髓中成熟B淋巴細胞的染色是已知的。盡管如此，重複染色是原來抗體稀釋倍數的兩倍，結果相似。這就要求在解釋所使用的單克隆抗體時要謹慎。熟悉所使用的特定克隆的細節是必要的。理論上，單克隆抗體不能染色B淋巴細胞[24,25]。文獻中還沒有報告病例提示交叉反應。 PAX8 immunostain is remains a valuable marker, in investigating advanced pelvic and/or abdominal malignancies of unknown origin. Peculiar cross reactivity even with monoclonal antibodies, and focal staining yolk sac tumors mandates extra caution.

結論

總之，本研究研究了PAX8在少數非上皮性和生殖細胞婦科腫瘤中的表達。值得注意的是卵黃囊腫瘤的局灶性陽性。這一發現值得在更大數量的腫瘤上進行研究，並且最好使用計算機模擬閱讀器等客觀的免疫反應性評分工具。這將增強目前關於PAX8技術難點和染色模式的知識。

確認

我們感謝阿聯酋大學資助這項研究(啟動基金# 31M116)。

利益衝突

作者宣稱他們沒有利益衝突。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:王曉燕，王曉燕，王曉燕，等。(2017)PAX8基因在婦科腫瘤中的表達。國際癌症研究分子力學3(2):doi http://dx.doi.org/10.16966/2381-3318.131

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收到日期:12月05日

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