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Aritcle類型:研究文章

引用:陳曉明，陳曉明，陳曉明，等。(2015)靶向促卵泡激素溶解肽偶聯物在前列腺癌(PC-3)移植小鼠模型中的抗腫瘤作用。國際癌症研究分子力學1(4):doi http://dx.doi.org/10.16966/2381-3318.115

版權:©2015 Aggarwal S, et al。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可的條款發布，允許在任何媒介上不受限製地使用、分發和複製，前提是要注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2015年10月19日

接受日期:11月6日

發表日期:2015年11月11日

摘要

膜破壞溶肽與絨毛膜促性腺激素(CG)或促黃體生成素釋放激素(LHRH) β鏈的15個氨基酸片段的綴合物靶向並破壞裸鼠模型中的癌細胞異種移植。卵泡刺激素受體(FSHR)已在多種癌症的腫瘤新血管內皮細胞和前列腺癌和卵巢癌的腫瘤組織中被檢測到。在本研究中，我們將一個溶解肽(Phor18)偶聯到與FSHR結合的FSH β鏈的三個片段上，並測試了這些偶聯物(FSH_{90 - 95}-Phor18, FSH_{81 - 95}-Phor18和FSH_33-53-Phor18)在體內靶向和抑製前列腺癌細胞生長的能力。我們發現靜脈注射FSH90-95-Phor18、FSH81-95-Phor18和FSH_33-53-Phor18顯著(p<0.05)抑製裸鼠前列腺癌(PC-3)異種移植瘤的生長。FSH81-95-Phor18最小有效劑量為0.1 mg/kg, FSH最小有效劑量為1 mg/kg_{90 - 95}-Phor18和FSH_33-53-Phor18。屍解腫瘤切片免疫組化分析顯示，對照組小鼠血管內皮細胞上FSHR表達密集，FSH處理小鼠腫瘤中FSHR表達減少_{90 - 95}-Phor18, FSH_{81 - 95}-Phor18或FSH_33-53-Phor18。FSH81- 95-Phor18抗血管生成活性最強。這些數據表明，一種結合FSH β鏈段的溶肽與FSHR結合，能夠通過靶向和破壞表達FSH受體的內皮細胞來抑製前列腺細胞腫瘤的生長。

關鍵字

前列腺癌;促卵泡激素;促卵泡激素受體;裂解肽;血管內皮細胞;腫瘤生長抑製;抗血管生成

介紹

除了非黑素瘤皮膚癌，前列腺癌是所有種族男性中最常見的癌症。在美國，前列腺癌是男性癌症死亡的第二大原因，與高發病率和死亡率[1]相關。據癌症統計數據估計，2015年有220,800例前列腺癌新病例和27,540例男性死於該疾病。雖然目前使用的化療藥物可以有效降低前列腺癌的死亡率和發病率;但疾病進展是不可避免的[3-6]。與癌症治療相關的主要問題之一是劑量限製毒性，它限製了係統施用的化療藥物的劑量，而不是專門針對癌細胞。這些事實促使人們嚐試開發更有效的藥物，能夠專門針對癌細胞。人們普遍認為促黃體生成素/人絨毛膜促性腺激素(LH/hCG)和LHRH受體在各種腫瘤細胞中高度表達。在過去的幾年裏，我們實驗室已經測試了幾種靶向前列腺、乳腺、卵巢、胰腺和睾丸癌細胞表達的LH/hCG和LHRH受體的溶肽藥物綴合物[7,8]。

在這些藥物中，有一類膜幹擾肽[9,10]，在自然界中大量存在。腫瘤細胞對這些膜幹擾肽的敏感性是正常細胞[11]的50倍，這表明它們在摧毀各種癌症方麵有用。在之前的報道中，我們發現膜破壞溶肽與促黃體生成素釋放激素(LHRH)或與hCG β鏈的15個氨基酸片段結合，在荷瘤裸鼠中靶向並破壞人類前列腺癌細胞、乳腺癌細胞、卵巢癌細胞和胰腺癌細胞[12,13]。Esperance製藥公司開發了一種LHRH受體靶向膜幹擾肽綴合物EP-100，並完成了二期臨床研究[14]。

和LH一樣，卵泡刺激素(FSH)是哺乳動物生殖過程中關鍵的促性腺激素。FSH主要產生於垂體前葉，靶器官為卵巢和睾丸。FSH是一種異質二聚體，由一個共同的α-亞基與β-亞基非共價結合組成。所有哺乳動物FSH的β亞基都有111個氨基酸。FSH受體是一種糖基化跨膜蛋白，結合FSH，屬於g蛋白偶聯受體家族。在成人和動物中，FSH受體僅在睾丸支持細胞和卵巢顆粒細胞中表達[15,16]，在卵巢[17]和睾丸[18]的內皮細胞中表達量較低。最近，有報道稱FSH受體在包括前列腺癌[19]在內的多種人類腫瘤的外周血管內皮細胞中表達。既往兩項研究通過免疫組化檢測證實FSH受體存在於前列腺腺癌中[20,21]。FSH在人類前列腺癌中作為前列腺額外延伸的標誌的作用是重要的。因此，這些結果提示FSH受體及其配體FSH可能在前列腺癌[22]的發生中發揮重要作用。

鑒於這些最近的報道和我們實驗室早期的發現表明溶肽綴合物在抑製腫瘤進展方麵的有效性，我們認為開發溶肽與FSH的綴合物可能是靶向和破壞人類前列腺癌細胞的有效方法。迄今為止，已經合成了一些裂解肽綴合物，並對其活性進行了測試[8,13]。其中一種膜破壞溶解肽是Phor18，一種由18個氨基酸組成的肽，由Esperance製藥公司開發，通過將Phor18偶聯到LHRH (EP-100)來靶向癌症中的LHRH受體。EP-100已成功靜脈注射給76例患者，並顯示出活性和安全性[23]。在本研究中，我們合成了Phor18的生物偶聯物，分別與已知與FSH受體結合的三個β鏈片段相結合。使用的FSH β鏈的三個片段是6個氨基酸(90-95)，15個氨基酸(81-95)和21個氨基酸(33-53)，從而得到3個共軛FSH_{90 - 95}-Phor18, FSH_{81 - 95}-Phor18和FSH_33-53-Phor18。隨後，我們評估了所有三種結合物靶向和溶解前列腺癌異種移植的能力，並評估了它們對腫瘤生長和新生血管的影響。

全麵了解該分子的特性，包括其在動物模型中對前列腺轉移的破壞作用，對於進一步開發FSH-Phor18作為一種新的治療方案非常重要。

材料與方法

fsh裂解肽綴合物的合成

β-FSH結合段偶聯到一個溶解肽(phor18);氨基酸，90-95 (Asp-Ser- Thr-Asp-Cys-Thr);氨基酸，81-95 (Gln-Cys-His-Cys-Gly-Lys-Cys-Asp-Ser-Asp-Ser-Thr-Asp-CysThr);氨基酸33-53 (tir - thr - arg - asp - leu - val - tir - lys - asp - proala - arg - pro - lys - ile - gln - lys - thrs - cys - thrs - phe)。所有肽都是在Protein Technologies Tribute自動合合器上使用標準的氟甲基羰基(Fmoc)固相化學合成的。簡而言之，每個共軛物都是在預負載的Wang樹脂上合成的，使用4.85當量的2-(6-氯- 1h -苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸(HCTU)， 10當量的4-甲基嗎啉(NMM)和5當量的Fmoc氨基酸。讓偶聯進行20分鍾，然後進行1-甲基- 2-吡咯烷酮(NMP)洗滌(5次，30秒)。用20%呱啶在NMP中的溶液(2.5分鍾)去除Fmoc，然後用NMP洗滌(5次，30秒)。使用95%三氟乙酸、2.5%水和2.5%三異丙基矽烷同時從樹脂和側鏈去保護中分離肽。在多肽中含有氨基酸的硫醇的情況下，裂解雞尾酒被修飾為包括94%的三氟乙酸，2.5%的水，2.5%的乙二硫醇和1%的三異丙基矽烷。 Peptides were purified by preparatory scale HPLC with a Waters prep LC controller and 2489 UV/Vis detector. The separation was performed on an AAPPTEC Spirit Peptide 120 C18 column (5 µm, 21.2 × 250 mm) with a Spirit Peptide guard column (21.2 × 10 mm). Solvents A (0.1% TFA in water) and B (0.1% TFA in acetonitrile) were mixed in a gradient starting at 5% B to 55% B in 50 minutes. The flow rate was 20 mL/ min and the detected wavelength was 215 nm. Purity of each of the FSHlytic peptides was checked by single peaks obtained on a Waters analytical HPLC equipped with an AAPPTEC Spirit Peptide 120 C18 column (5 µm, 4.6 × 250 mm) and a Spirit Peptide guard column (3.2 × 10 mm). The solvents and gradient were identical to those used in the prep HPLC. The MALDI-Tof mass spectrum for each peak in the analytical HPLC verified the identity of each peptide. The purity was >95% for all three conjugates.

細胞培養

人前列腺癌細胞(PC-3)取自美國VA的American Type Culture Collection (ATCC)，按照ATCC協議進行培養。PC-3細胞在添加10%胎牛血清(FBS)、100單位/ml青黴素和100µg/ml鏈黴素(Invitrogen, CA, USA)的Dulbecco修飾Eagle培養基(DMEM)中培養。

卵泡刺激素受體抗體

FSH受體(323)單克隆抗體由法國INSERM的Ghinea博士提供。

裸鼠皮下植入PC-3細胞模型:

道德:在這些調查中使用的所有動物都是按照《實驗動物護理和使用指南》(國家研究委員會，1996年)和美國農業部的指南(動物福利法;公法99-198)。實驗方案由潘寧頓生物醫學研究中心的動物護理和使用委員會審查和批準。從馬薩諸塞州威爾明頓查爾斯河實驗室獲得的雄性裸鼠(無胸型Balb/c, nu/nu, 5周齡)被關在標準的樹脂玻璃籠子裏，在恒溫恒濕的房間裏，光照和黑暗循環12小時。動物被喂食輻照顆粒飼料(PicoLab齧齒動物飼料20,Ren 's飼料和供應商有限公司，奧克維爾，ON)和自由用水。

PC-3細胞皮下植入:PC-3細胞在短暫暴露於0.25%胰蛋白酶和0.2% EDTA後，從次融合培養中獲得。加入含10%胎牛血清的培養基停止胰蛋白酶化。細胞在無血清培養基中洗滌一次，並在PBS中重懸。隻有由>存活率為90%的單細胞組成的懸液用於注射。PC-3細胞(1 × 10⁶)用100µL PBS懸浮在Matrigel (0.1 ml)(協同生物醫學產品Becton Dickinson Labware, Bedford, MA)中，使用27號針皮下注射到肩胛間區。腫瘤細胞植入後第21天，小鼠的腫瘤在100-200 mm之間^3.，隨機分為以下治療組(n=8);車輛控製;FSH_{90 - 95}肽(1 mg/kg)， FSH81-95肽(1 mg/kg)， FSH_33-53肽(1 mg/kg)， FSH_{90 - 95}-Phor18 (0.1 mg/kg和1 mg/kg)，卵泡刺激素_{81 - 95}- Phor18 (0.1 mg/kg和1 mg/kg)和FSH_33-53-Phor18 (0.1 mg/kg和1 mg/kg)處理。將多肽和肽綴合物溶解在USP生理鹽水中，並進一步用生理鹽水稀釋，以達到1 mg/kg (0.2 mg/ml)劑量和0.1 mg/kg (0.02 mg/ml)劑量濃度。尾靜脈注射100 μ L，每周兩次，共注射5次。對照組注射等量的USP生理鹽水。每周用卡尺測量腫瘤體積2次，每周測量體重1次。腫瘤體積由公式V (mm)計算^3.)=(長度×寬度²)/2，其中寬度是最短的測量單位(以毫米為單位)。最後一次治療後第36天對小鼠進行屍解^th。屍檢時，對腫瘤進行解剖、稱重、拍照，並浸泡在5%中性緩衝福爾馬林中固定部分。組織學組織樣品加工成石蠟塊，切割5 μm切片供進一步研究。

免疫組織化學

對裸鼠異種移植瘤組織標本切片進行FSH受體免疫過氧化物酶染色。切片用二甲苯脫蠟(3次，每次10分鍾)，通過上升乙醇濃度(30%，50%，70%，95%和99.7-100%)再水化，然後進行抗原提取步驟。在此過程中，將載玻片置於沸騰的0.01 M檸檬酸鈉中，並在室溫下再靜置35分鍾，以揭出表位。然後用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)衝洗載玻片兩次，每次5分鍾。內源性過氧化物酶活性通過將載玻片浸泡在1% (v/v)過氧化氫甲醇中20分鍾而失活。載玻片在PBS中洗滌兩次，每次5分鍾。隨後，切片在濕化室中使用堵塞溶液堵塞60分鍾，堵塞溶液包括1%正常馬血清(維他汀Universal Elite ABC試劑盒，Vector Laboratories, CA, USA)，稀釋於PBS和20% (v/v)阿維丁/生物素堵塞試劑盒;矢量實驗室，CA，美國)。PBS洗滌3次(每次10分鍾)後，將載玻片與FSH受體(323)單克隆抗體以1:50稀釋，在4℃的濕室中孵育過夜。一抗在PBS中稀釋，20% (v/v)生物素溶液(Avidin/生物素阻斷試劑盒;Vector Laboratories, CA, USA)。 The negative control sections were treated in the same manner with PBS and biotin mixture in an absence of primary antibodies. After, the slides were washed thoroughly with PBS (3 times for 10 min.) and incubated for 30 min. with the secondary antibody (Biotinylated anti-mouse IgG Vector Laboratories, CA, USA). After another rinse for 10 min., the avidin–biotin complex solution (Vectastain Universal Elite ABC kit, Vector Laboratories, CA, USA) was applied for 30 min. After incubation, slides were washed twice for 5 min each in PBS. Tissue sections were then incubated with NovaRED peroxidase substrate (NovaRED; Vector Laboratories, CA, USA). Slides were then counterstained with Hematoxylin (DAKO, USA) for 30 sec., and washed with distilled water and with descending ethanol concentrations (100%, 95%, 70%, 50%, and 30%) and soaked in xylene for 5 min. Slides were then mounted with a drop of clear mount (Electron Microscopy Sciences, USA). FSH receptors were stained as a red-brown color; negative controls showed no staining.

間接免疫熒光共聚焦顯微鏡

對裸鼠異種移植腫瘤組織樣本切片進行FSH受體和抗血管性血友病因子(血管內皮細胞的一種特異性標記物)的雙免疫過氧化物酶染色。樣品的製備如上所述，包括抗原提取和阻斷。將載玻片與FSH受體(323)單克隆抗體(1:50稀釋)和兔多克隆抗血管性血友病因子(AbCam，美國)(血管內皮細胞的一種特異性標記物，1:50稀釋)一起在4℃的濕室中孵育過夜。陰性對照組在無一抗的情況下，以同樣的方式用PBS和生物素混合物處理。然後用PBS徹底清洗載玻片(3次，10分鍾)，並與山羊抗兔Alexa 594 (Molecular Probes，美國)和山羊抗小鼠Alexa 488 (Molecular Probes，美國)二抗的混合物孵育1小時。在同一實驗中，用Hoechst染色法(Sigma，美國)將載玻片孵育15分鍾來檢測細胞核。載玻片用一滴透明載玻片(電子顯微鏡科學，美國)。照片用Leica Zeiss共聚焦激光掃描顯微鏡，63X，水重現。

統計分析

除特別注明外，所有結果均以均數±標準差表示。采用Student 's t檢驗或采用單因素方差分析同時比較兩組或兩組以上的均數，以p<0.05為有統計學意義。

結果

三種共軛物的合成，FSH_{90 - 95}-Phor18, FSH_{81 - 95}- Phor18和FSH_33-53-Phor18實現

質譜如圖1(A-C)所示。質譜測定了FSHPhor18偶聯物的純度。三種綴合物的純度均為>95%。

FSH-Phor18綴合物抑製裸鼠前列腺癌細胞異種移植的生長

在體內實驗中，三種FSH-Phor18結合物分別以0.1 mg/kg和1mg /kg的劑量在裸鼠中測試其抑製PC-3異種移植生長的能力，結果如圖2(A-C)和3(A-C)所示。數據說明FSH的管理_{90 - 95}-Phor18和FSH_{81 - 95}與對照組相比，-Phor18在體內顯著(P<0.05)抑製前列腺癌細胞生長，屍檢時腫瘤重量(圖2(A-C)和腫瘤體積(圖3 (A-C))顯示。FSH的有效劑量_{90 - 95}-Phor18為1 mg/kg體重，FSH有效劑量_{81 - 95}-Phor18為0.1 mg/kg。FSH的_35-53-Phor18偶聯物在1 mg/kg劑量時，屍檢時腫瘤體積顯著減小，但與對照組相比，腫瘤重量減小無統計學意義。與對照組相比，單獨使用FSH β鏈的任何片段對腫瘤重量或體積均無影響。

治療期間腫瘤體積變化

為了進一步研究溶肽綴合物對前列腺腫瘤發展的影響，我們每周測量兩次腫瘤體積。如圖4 (a - c)所示，載藥處理的小鼠攜帶前列腺腫瘤異種移植物後，腫瘤體積隨時間增加。FSH_{90 - 95}- Phor18, FSH_{81 - 95}-Phor18和FSH_33-53從第25天開始，與載體處理組和fsh -肽片段處理組相比，1 mg/kg劑量的-Phor18可顯著降低腫瘤生長。FSH-Phor18治療組無副作用，治療組肝腎功能檢測無變化(數據未顯示)。載藥組和治療組小鼠屍檢時體重無顯著差異(圖4(E-F))。

FSH-Phor18偶聯物可降低人前列腺癌細胞移植小鼠新生血管供血腫瘤中FSHR的表達

我們接下來檢查了FSH- phor18綴合物是否減少了腫瘤新生血管上的FSH受體。為了驗證這一點，使用抗fsh受體單克隆抗體(323)對石蠟包埋的組織切片進行免疫組織化學分析，然後使用紅棕色過氧化物酶反應產物觀察第二過氧化物酶偶聯抗體。切片用血氧甲素染色。與對照組腫瘤相比(圖5A)， FSH處理的裸鼠腫瘤中FSH受體陽性血管內皮細胞更少_{90 - 95}- pho18(圖5B) FSH_{81 - 95}-Phor18(圖5C)， FSH_33-53-Phor18(圖5D)。

染色的血管用實箭頭表示;被打開的箭射幹淨的容器。對無一抗的組織切片進行免疫組化，未見染色(圖A.補充資料)。

FSH受體存在於異種前列腺腫瘤的血管內皮細胞中

為了證實腫瘤新生血管上存在FSH受體，我們采用雙免疫熒光染色法對腫瘤移植石蠟包埋切片進行染色。我們用抗FSH受體抗體(綠色)和血管性血友病因子(血管內皮細胞標記物;紅色)。FSH受體與血管性血友病因子共定位，如合並圖像中的黃色熒光所示(圖6;D)。Hoechst染色核見圖6;a組。這些結果清楚地顯示裸鼠前列腺腫瘤移植血管內皮細胞中存在FSH受體。陰性對照(圖B.補充數據)。

討論

當前研究的目標是合成膜破壞溶解肽(Phor18)和FSH β鏈的三個片段之一(6到21個氨基酸)的綴合物，並測試這些綴合物在FSH受體陽性的前列腺癌異種移植模型中減少腫瘤體積和重量的效力，以及對治療腫瘤新生血管的影響。本研究的顯著發現是:1)FSH的管理_{90 - 95}-Phor18, FSH_{81 - 95}-Phor18和FSH_{33 - 53}-Phor18顯著抑製前列腺癌細胞(PC-3)的生長和體積;2) FSH_{81 - 95}-Phor18被發現在低於FSH的劑量水平下，可以有效地減少人腫瘤移植裸鼠的原發腫瘤重量和體積_{90 - 95}-Phor18, FSH_33-53-Phor18;3)本研究進一步證明裸鼠前列腺腫瘤移植血管內皮細胞和腫瘤細胞中存在FSH受體;4) FSH治療裸鼠腫瘤中FSH受體陽性血管內皮細胞減少_{81 - 95}-Phor18, FSH_{90 - 95}-Phor18和FSH_33-53-Phor18在小鼠腫瘤中的表達高於對照組。這項研究首次證明了這些溶肽和卵泡刺激素的結合物的發展，並測試了它們在體內破壞前列腺腫瘤細胞的有效性。這些結果清楚地表明，由膜破壞溶解肽、Phor18和選擇的FSH片段組成的綴合物能夠抑製人前列腺腫瘤移植裸鼠前列腺腫瘤的生長。FSH_{81 - 95}-Phor18是三種FSH-Phor18綴合物中最有效的綴合物。

圖1:A) FSH的MALDI-ToF質譜_33-53-Phor18;B) FSH_{81 - 95}-Phor18;C) fsh90 - 95 phor18

圖2 (a - c):腫瘤壞死時的重量-數據代表平均值±標準差(n=8)。FSH組屍檢時腫瘤重量顯著降低_{90 - 95}-Phor18和FSH_{81 - 95}-Phor18處理小鼠與載體處理組比較。* p <0.05。

圖3 (a - c):壞死時腫瘤體積-數據代表平均值±標準差(n=8)。屍檢時FSH的腫瘤體積顯著減小_{90 - 95}-Phor18和FSH_{81 - 95}Phor18和FSH_33-53-Phor18處理小鼠與載體處理組比較。
* p < 0.05。

圖4 (a - c):FSH- phor18偶聯物抑製人體前列腺癌細胞在體內生長-用生理鹽水(對照)、FSH90-95 (1 mg/kg)、FSH90-95-Phor18 (0.1 mg/kg、1mg/kg)、FSH81-95- phor18 (0.1 mg/kg、1mg/kg)處理的裸鼠腫瘤體積的變化。數據以腫瘤體積的均值±標準差表示(n=8)。
4(E-F):用FSH-Phor18偶聯物處理的動物體重-載體處理和FSH-Phor18結合物處理動物的體重之間沒有顯著差異。

圖5:使用抗FSH受體單克隆抗體(323)在裸鼠體內培養的人前列腺癌細胞石蠟包埋切片上進行免疫組織化學分析，然後使用紅棕色過氧化物酶反應產物觀察二過氧化物酶偶聯抗體。切片用血氧甲素染色。用FSH治療的裸鼠腫瘤中FSH受體陽性血管較少_{81 - 95}-Phor18, FSH_{90 - 95}-Phor18和FSH_33-53-Phor18在對照組小鼠腫瘤中的表達高於對照組(A組與B、C、D組比較)_{81 - 95}-Phor18似乎是三種FSH-Phor18綴合物中最有效的。染色的血管用實箭頭表示;被打開的箭射幹淨的容器。

圖6:通過雙重免疫熒光檢測表達FSH受體的前列腺腫瘤細胞中的內皮細胞——一種抗血管內皮細胞標記物von Wille品牌因子的抗體，隨後是一種紅色標記的二抗(圖C)，與一種綠色標記的二抗(圖B)檢測的抗FSH受體抗體信號重疊。兩種抗體信號的合並如圖D(黃色)所示。圖a為Hoechst染色核。圖片拍攝於63X，光圈1.2。

此外，我們的研究結果表明，這些結合物的抗腫瘤作用是通過特異性結合前列腺腫瘤血管上表達的FSH受體和腫瘤細胞上的FSH受體介導的。我們的結果與先前的研究一致，這些研究表明FSH受體在包括前列腺癌在內的廣泛人類腫瘤的血管表麵選擇性表達[19-21]。

非腫瘤組織及其胸膜、肺、肝、骨和淋巴結的脈管係統不表達FSHR[19]。已經描述了幾種優先在腫瘤血管上表達的標記物(例如，前列腺特異性膜抗原，α_vβ_3.-整合素，血管內皮生長因子及其受體)和新形成血管周圍的細胞外基質(基質金屬蛋白酶，Robo-4)[24]。然而，如前所述，靶向腫瘤新生血管和腫瘤細胞的FSHR可以增強FSH-Phor18殺傷腫瘤的能力，並且比靶向其他已知標記物更有效，因為許多這些標記物(例如整合素)不允許高度特異性靶向腫瘤[25]。最近有報道稱，原發性腎細胞癌腫瘤中的FSHR水平與接受舒尼替尼(一種抗血管生成受體酪氨酸激酶抑製劑)治療的轉移性腫瘤患者的反應密切相關，提示FSHR水平與轉移程度直接相關[26,27]。從臨床角度來看，我們目前的結果具有重要意義，因為大多數健康組織中不存在FSHR;因此，靶向FSHR可以最大限度地減少抗癌藥物對周圍組織或器官的損害。溶肽綴合物具有額外的優勢，它們不具有抗原性，因為它們體積小，代謝時副作用最小，例如可能抑製男性的精子發生和女性的排卵[28]。我們研究的一個局限性是增加了動物繁殖的風險。然而，先前的研究表明，用LHRH[29]靶向細胞毒類似物治療後，垂體促性腺激素的功能在2周內完全恢複。此外，重組FSH治療恢複了促性腺激素缺乏大鼠[30]的血清抑製素- b水平，並部分恢複了精子發生。

本研究證明了FSHPhor18結合物通過靶向新生血管和腫瘤治療原發性前列腺腫瘤的有效性。由於本研究中使用的溶肽被靶向段(βFSH)特異性結合，我們認為我們的FSH-Phor18綴合物不僅可以破壞原發腫瘤，還可以破壞轉移性腫瘤。我們實驗室先前的報告證實了這一概念，表明與LH或hCG結合的溶肽可以防止轉移。盡管如此，研究這些偶聯物是否同樣有效地靶向轉移性腫瘤將是有趣的，這些偶聯物將總體上提高治療小鼠的存活率，這可能是未來研究的重點。綜上所述，這些結果表明FSH-Phor18綴合物可能是治療人類前列腺癌的新治療選擇。

確認:

我們感謝David Burk博士在熒光顯微鏡方麵的幫助。潘寧頓生物醫學研究中心的生物成像核心部分由COBRE (NIH P20-RR021945)和CNRU (NIH IP30-DK072476)和潘寧頓生物醫學研究基金會支持。我們感謝ghinea博士，INSERM，法國提供FSH受體(323)單克隆抗體。

這項工作得到了洛杉磯巴吞魯日的Esperance製藥公司的支持;Hansel/Downey研究基金、Pennington生物醫學研究基金會和路易斯安那州立大學。

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