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Aritcle類型:研究文章

引用:Dasari SR, Velma V, Yedjou CG, Tchounwou PB(2015)低劑量順鉑治療急性早幼粒細胞白血病的臨床前評估。國際癌症Res Mol Mech 1(3): doi http://dx.doi.org/10.16966/2381-3318.113

版權:©Dasari SR.等人。這是一篇基於創作共用署名許可條款發布的開放獲取文章，該許可允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2015年9月7日

接受日期:2015年10月13日

發表日期:2015年10月15日

摘要

順式二胺二氯鉑(II)(順鉑)是用於各種癌症的最廣泛的化療藥物，但其療效受限於腫瘤細胞的耐藥性及其引起的嚴重副作用。由於高水平的順鉑對癌細胞和正常細胞都有細胞毒性，本研究的目的是探討長期低劑量的順鉑在治療白血病中的有效性。為了達到我們的目標，人類白血病(HL-60)細胞被不同劑量(1、2或3 M)的順鉑處理24、48、72和96小時。MTS法測定細胞活力。氧化應激損傷和遺傳毒性分別通過抗氧化劑、脂質過氧化和彗星試驗進行評估。從MTS試驗中獲得的數據表明，順鉑治療通過直接殺死細胞或以劑量和時間依賴的方式降低細胞增殖率來減少存活腫瘤細胞的數量。脂質過氧化結果顯示，丙二醛水平隨順鉑劑量的增加而顯著升高(p<0.05)。超氧化物歧化酶和過氧化氫酶測定結果顯示，與對照細胞相比，順鉑處理細胞的抗氧化酶活性逐漸增加。彗星實驗產生的數據顯示，順鉑治療導致DNA損傷的遺傳毒性顯著的劑量依賴性增加。綜上所述，我們的研究表明順鉑誘導的HL-60細胞毒性至少部分是通過誘導氧化應激和氧化損傷介導的。

關鍵字

順鉑;HL-60細胞;細胞生存能力;氧化應激;氧化損傷

簡介

順鉑，順-二胺二氯鉑(II)，是一種著名的化療藥物，是治療各種癌症應用最廣泛的藥物之一[1,2]。臨床證明順鉑可對抗不同類型的癌症，包括肉瘤、軟組織、骨骼、肌肉和血管的癌症。這類癌症化療的最新進展已產生較好的預後，因此已使這些疾病變得對生命威脅較小。從順鉑的分子角度來看，它代表了化學結構的微小變化如何顯著影響靶細胞生物活性的一個完美例子。目前世界各地有9種鉑類似物正在進行臨床試驗[4,5]。

已知順鉑可結合DNA和蛋白質等細胞成分，並與阻礙轉錄和翻譯機製的DNA和蛋白質分子發生交聯，形成DNA和蛋白質加合物[6,7]。這些DNA加在一起影響細胞周期進程檢查點，並在修複機製[8]的幫助下決定細胞是死是活。除了形成DNA加合物外，順鉑還能誘導氧化應激，調節鈣信號和細胞凋亡[9,10]。它還調節許多在細胞周期調節和信號轉導中起重要作用的蛋白的表達[8,11,12]。順鉑還介導絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)和jun氨基末端激酶(JNK)通路，協調各種細胞外信號，調節細胞生長、存活和凋亡[13,14]。

此外，順鉑誘導的氧化應激除可引起DNA損傷外，還可引起細胞死亡。氧化應激是針對線粒體膜電位誘導毒性的重要過程之一，最終由於線粒體蛋白巰基的丟失而導致鈣吸收的抑製。氧化應激誘導程度與暴露時間和藥物劑量有關。含有硫醇基團(- SH)的分子在維持細胞內氧化還原穩態方麵起著主要作用。在誘導條件[3]下，硫醇自由基與分子氧相互作用產生活性氧。如果細胞不能控製活性氧的產生，它們可能最終破壞細胞膜並觸發細胞凋亡的內在和/或外在途徑[16]。然而，與進入凋亡通路相反，在一些-患者中，由於藥物攝入的減少或藥物被動擴散，細胞對順鉑產生耐藥性[17,18]。

雖然順鉑的一些生物化學效應已經得到了很好的研究，但其在低劑量下潛在治療作用的詳細模式尚未闡明。本研究的目的是評估順鉑對HL-60細胞的低劑量效應並闡明其細胞毒性機製。我們的研究結果為確定最低劑量的順鉑對減少癌細胞增殖的影響最大，從而最大限度地減少其對正常/非癌細胞的副作用提供了科學依據。因此，在本研究中，我們研究了順鉑在低水平接觸HL-60細胞時的細胞毒性、氧化應激、脂質過氧化和遺傳毒性潛力。

方法和材料

細胞培養，化學試劑

順鉑來自密西西比大學醫學中心(Jackson, MS)。Iscove的改良Dulbecco 's培養基(IMDM)和HL-60細胞購自美國類型培養收集公司(ATCC) (Manassas, VA, USA)。胎牛血清(FBS)和青黴素-鏈黴素購自Sigma (St. Louis, MO, USA)。IMDM含有4 mM L-穀氨酰胺，4500 mg/L葡萄糖和1500 mg/L碳酸氫鈉，並添加10% (v/v)胎牛血清和1% (W/ v)抗生素。活細胞在37°C 5% CO中培養₂恒溫箱(Thermoscientific, Waltham, MA, USA)。

細胞治療

試驗中，對照組和試驗組各設3個重複。均勻細胞密度為1 × 10₆細胞/毫升維持在所有處理和對照組。細胞用1、2、3 μ M的順鉑處理或不處理，在37°C的5%濕潤CO中孵育不同時間(24、48、72或96 h)₂恒溫箱(Thermoscientific, Waltham, MA, USA)。

細胞增殖實驗

細胞活力評估如先前描述的[19]細胞滴度96^®來自Promega (Madison, WI, USA)的單溶液細胞增殖檢測試劑盒，修改很少。簡單地說，將100µL處理過或未處理過的細胞懸液等量接種到96孔聚苯乙烯組織培養板中，每孔添加20µL的檢測試劑。在37°C孵育60分鍾後，用BMG LABTECH GmbH (Ortenberg, Germany)的96孔板閱讀器在490 nm處讀取吸光度。

脂質過氧化作用分析

使用脂質過氧化測定試劑盒(Abcam, Cambridge, MA, USA)進行少量修改，定量丙二醛(MDA)濃度，如前所述[20]。每次處理後，收集細胞懸液，1230 rpm離心5 min得到細胞球，細胞球懸浮在細胞裂解緩衝液中。13000 g離心10分鍾後，取200 μl，按脂質過氧化測定試劑盒方案測定MDA水平。用BMG Labtech GmbH (Ortenberg, Germany)的96孔板分析儀在532 nm處讀取樣品的吸光度。根據標準曲線測定MDA濃度。

超氧化物歧化酶(sod)和過氧化氫酶測定

按照之前的描述[21,22]進行了SOD和過氧化氫酶檢測，並進行了少量修改，分別使用了市售的SOD檢測試劑盒和過氧化氫酶檢測試劑盒(Abcam, Cambridge, MA, USA)。每次處理後，收集對照和處理的HL-60細胞。根據製造商的方案，定量測定細胞裂解物的SOD和過氧化氫酶活性。超氧化物歧化酶的最終吸光度在450 nm處測定，過氧化氫酶的最終吸光度在570 nm處測定，使用BMG Labtech GmbH (Ortenberg, Germany)的96孔板讀取器。

單細胞凝膠電泳

使用來自Trevigen (Gaithersburg, MD, USA)的單細胞凝膠電泳彗星檢測試劑盒，用堿性單細胞凝膠電泳(Comet)法分析經處理和未處理的HL-60細胞中順鉑的遺傳毒性，如前所述[23]進行了少量修改。所有的預防措施都是為了避免紫外線對DNA的影響。低熔點瓊脂糖在沸水中熔化，冷卻至37°C。每處理取75 μL瓊脂糖與細胞混合物(比例為1:10)置於彗星載玻片上，4℃固化。細胞用裂解液在4°C裂解30min，然後用堿性溶液在37°C變性40min。製備的載玻片在TBE (Tris borate EDTA)緩衝液中電泳(1伏/厘米)10分鍾。電泳後，用70%乙醇固定細胞，然後用SYBR綠染色。使用熒光顯微鏡(Olympus BX51 TRF，美國)觀察彗星滑動。使用DNA損傷分析軟件(Loats Associates Inc.， USA)對數據進行評估。

統計分析

實驗采用三次重複，數據以均數±SDs表示。為了檢驗實驗組之間和實驗組之間的差異，分別使用傑克遜州立大學RCMI環境健康中心生物統計學核心實驗室的SAS軟件進行單因素方差分析(ANOVA)和學生t檢驗。beplay最新下载p值小於0.05的數據被認為有統計學意義。

結果

順鉑抑製HL60細胞增殖

與對照組相比，用1、2、3 μ M順鉑處理HL60細胞孵育24、48、72和96 h，測定細胞存活率(圖1)。結果表明，細胞存活率隨著順鉑劑量和孵育時間的增加而降低。1 μ M順鉑處理24、48、72和96 h時，細胞存活率分別為92.0±1.7%、81.0±3.8%、59.0±2.2%和38.0±1.9%。2 μ M順鉑24、48、72和96 h的記錄數據分別為89.0±2.2%、74.0±4.0%、52.0±3.9%和41.0±2.8%。3 μ M順鉑處理24h、48h、72h、96h細胞活力分別為84.0±3.1%、66.0±1.8%、48.0±3.3%、34.0±3.6%。與1 μ M處理相比;3 μ M順鉑處理24、48、72和96h時，細胞存活率分別下降約8%、15%、11%和4%。總體而言，與對照細胞相比，順鉑治療細胞的劑量和時間依賴性顯著降低(p<0.05)。

順鉑可提高HL60細胞的SOD和過氧化氫酶活性

分別用1、2、3 μ M順鉑在24、48、72、96 h的時間段裏對未處理或處理的HL60細胞進行SOD和過氧化氫酶活性的測定。SOD和過氧化氫酶的結果分別見圖2和圖3。SOD和過氧化氫酶活性隨順鉑劑量或時間的增加而升高。1 μ M順鉑在接觸24、48、72和96 h時，SOD活性分別比對照提高了23%、30%、62%和82%，過氧化氫酶活性分別提高了29%、33%、41%和58%。2 μ M順鉑處理的細胞在暴露24、48、72和96 h時，SOD活性分別比對照提高了41%、47%、67%和86%，過氧化氫酶活性分別提高了37%、39%、40%和57%。3 μ M順鉑在接觸24、48、72和96h時，SOD活性分別比對照提高了61%、68%、73%和110%，過氧化氫酶活性分別提高了41%、45%、49%和75%。順鉑處理組細胞中SOD和過氧化氫酶活性的升高與對照組相比差異有統計學意義(p<0.05)。

圖1:順鉑對HL-60細胞的細胞毒性作用。細胞分別用順鉑1、2、3 μ M處理24h、48h、72h、96h。細胞增殖試驗采用490 nm分光光度計測定細胞活力。數據被歸一化，控製為1。結果以三次獨立實驗的平均值±標準差表示。p值小於0.05被認為有統計學意義。

圖2:順鉑對HL-60細胞SOD活性的影響。用順鉑1、2、3 μ M攻毒HL-60細胞24h、48h、72h、96h，測定SOD活性。處理後，裂解細胞，定量測定SOD活性。在450nm處測量各樣品的吸光度，結果如圖所示。數據歸一化，對照為1，用三個獨立實驗的均值±標準差表示。p值小於0.05被認為有統計學意義。

圖3:順鉑對HL-60細胞過氧化氫酶活性的影響。HL-60細胞分別用1、2、3 μ M的順鉑孵育24h、48h、72h、96h。每次處理後，用分光光度計在570 nm處測定過氧化氫酶活性。結果以nmol/min/ml表示。數據歸一化，控製為1。數據用三個獨立實驗的平均值±標準差表示。p值小於0.05被認為有統計學意義。

順鉑誘導HL60細胞脂質過氧化

評估氧化應激的最佳方法之一是估計脂質過氧化的副產物丙二醛(MDA)。用順鉑處理HL-60細胞，測定MDA濃度。數據如圖4所示。如圖所示，估計的MDA水平以劑量和時間反應的方式逐漸增加。暴露96 h後，1、2、3 μ M順鉑誘導的HL-60細胞MDA含量分別比對照組增加39、48、64%。類似的趨勢也出現在任何其他接觸時間。因此，所有測試濃度和時間段內MDA水平的增加均顯著高於相應的對照(p<0.05)。

圖4:順鉑對HL-60細胞脂質過氧化的影響。HL-60細胞分別用不同劑量的順鉑處理或不處理24h、48h、72h、96h。測定處理和未處理細胞的丙二醛水平。在532 nm處測定MDA含量(nmol/ml)。數據歸一化，控製為1。結果用三次獨立實驗的平均值±標準差表示。p值小於0.05被認為有統計學意義。

順鉑誘導HL60細胞DNA損傷

順鉑在1、2或3 μ M劑量下對HL60細胞進行24、48、72和96小時的處理，在DNA損傷方麵顯示出劑量-時間-反應關係。圖5展示了HL-60細胞的代表性彗星實驗圖像，顯示在較高水平的順鉑暴露下DNA損傷顯著增加。利用DNA損傷分析軟件(Loats Associates Inc.， USA)對這些定性數據進行了3個重複的定量分析。圖6所示的DNA損傷定量數據表明，3 μ M順鉑處理96 h誘導的HL-60細胞DNA損傷水平最高，而1 μ M順鉑處理24 h誘導的DNA損傷水平最低。1µM時，24、48、72和96 h的DNA損傷率分別為1.6±0.12%、2.8±0.51%、3.6±0.47%和5.7±0.23%。2 μ M時，24、48、72和96 h的這些百分比分別為3.4±0.19%、3.60±0.38%、6.1±0.46%和7.1±0.28%。在最大劑量3 μ M順鉑照射24、48、72和96 h時，DNA損傷率分別為5.9±0.09%、6.5±0.12%、6.7±0.39%和10.5±0.16%。所有試驗濃度的誘導DNA損傷均顯著高於相應對照(p<0.05)。

討論

本研究旨在研究順鉑對HL60細胞的細胞毒性、氧化應激和遺傳毒性。本研究的主要目的是研究低劑量順鉑的抗癌潛力，以盡量減少對非癌細胞的影響。我們評估了細胞活性的細胞毒性，抗氧化水平和氧化應激的脂質過氧化，以及彗星試驗的遺傳毒性。

順鉑是一種中性無機化合物，通過抑製DNA加合物形成的細胞周期進程和誘導細胞凋亡來誘導細胞毒性。為了顯示毒性，順鉑必須與水分子水解成為活性分子，與細胞內各種大分子相互作用[17,24]。順鉑活性依賴於內源性親核試劑，包括穀胱甘肽、蛋氨酸、金屬硫蛋白和其他細胞成分[2,25]。內源性親核試劑作為一種防禦機製，在較低水平的暴露下對抗順鉑誘導的毒性。

圖5:HL-60細胞在順鉑0、1、2或3µM中暴露24、48、72和96 h，具有代表性的彗星檢測圖像。處理和未處理的細胞進行單細胞凝膠電泳，用SBGR染色，並按照材料和方法部分所述進行分析。

在本研究中，HL60細胞分別用1、2、3 μ M順鉑處理不同時間段。研究結果顯示，在所有測試劑量中都有顯著的細胞毒性作用(圖1)。最低的測試劑量，1 μ M順鉑，抑製細胞增殖接近60%的對照。順鉑的抗增殖或抗癌特性與既往報道的順鉑在各種癌症中抑製細胞增殖速率一致[26-28]。

細胞增殖或細胞毒性的最終抑製可能是順鉑誘導的氧化應激、遺傳毒性和其他細胞反應的共同機製的結果。因此，我們確定了氧化應激是否在順鉑誘導的HL60細胞毒性中起關鍵作用。我們發現，與對照細胞相比，順鉑處理細胞中SOD、過氧化氫酶等抗氧化酶活性明顯升高。酶活性的增加與劑量和時間有關(圖2和3)。

作為防禦機製的一部分，SOD催化超氧陰離子的消變生成過氧化氫(H₂O₂)和H₂O₂成為過氧化氫酶的底物。在本研究中，這兩種酶的誘導可以被認為是一種對抗順鉑暴露引起的活性氧的適應性機製。本研究中抗氧化水平的劑量和時間依賴性增加與以前的報道一致，即順鉑誘導活性氧形成的濃度和時間依賴性[15]。由於抗氧化劑對氧化應激的響應升高，我們觀察到在順鉑處理的HL60細胞中，脂質過氧化副產物MDA的顯著誘導(圖4)。此前有報道稱，脂質過氧化產物的釋放增加了蛋白質的羰基化，誘導細胞膜的氧化損傷，這些事件可能導致細胞死亡的開始[29-33]。

除氧化應激外，順鉑還可誘發基因毒性，可能是抑製細胞增殖或細胞周期進展最有效的途徑。已有報道稱活性順鉑可與蛋白質和DNA中的巰基等功能殘基發生反應，特別是與DNA中嘌呤的親核位點發生反應，導致DNA蛋白和DNA-DNA鏈間或鏈內交聯的形成[34-37]。在本研究中，報道的DNA損傷是劑量和時間依賴性的(圖5和6)。在96 h的處理中，1µM的DNA損傷幾乎是5%，而3µM的DNA損傷幾乎比各自的對照高10%(圖6)。這些發現與順鉑誘導的氧化應激(圖2和3)和脂質過氧化(圖4)的劑量和時間依賴性一致。誘導的DNA損傷可能是鏈間和鏈內交聯的結果，也可能是氧化應激和DNA交聯共同作用的結果。目前的研究結果與既往報道的順鉑與DNA嘌呤堿基相互作用形成DNA加合物誘導毒性一致[8,38]。

在野生型p53和p53缺失型肝癌細胞係[39]中，順鉑也有誘導細胞凋亡和細胞周期進展的改變的報道。HL60細胞缺乏p53蛋白，而野生型p53細胞與p53缺失細胞[40]相比，對順鉑更敏感。這些研究表明，p53激活可使細胞對順鉑毒性敏感。已有報道稱順鉑可通過p53依賴和獨立途徑誘導細胞凋亡[39,41,42]。與我們的研究結果一致，已指出順鉑通過阻滯細胞周期[43]的G1期細胞，不可逆地抑製細胞增殖。然而，還需要進一步的研究來闡明順鉑誘導的癌細胞生長抑製、氧化應激、細胞周期調節和遺傳毒性的分子機製。

結論

在本研究中，我們研究了低劑量(1、2和3 μ M)和不同時間段(24、48、72和96h)順鉑誘導的細胞毒性、氧化應激和遺傳毒性。順鉑能顯著抑製細胞增殖，誘導抗氧化水平和脂質過氧化，即使是最低劑量的1 μ M。此外，順鉑在所有治療劑量下均能顯著誘導HL60細胞的DNA損傷。綜上所述，低劑量的順鉑對HL-60細胞有顯著的活性，因此，可與三氧化二砷(ATO)聯合使用，以改善治療並減少急性早幼粒細胞白血病患者的潛在副作用。然而，為了確定順鉑和ATO在APL化療中的應用潛力，還需要進一步研究順鉑和ATO的聯合作用。

圖6:HL-60細胞用0、1、2或3 μ M順鉑處理24、48、72和96 h後DNA損傷。數據表示DNA損傷百分比，以三個獨立實驗的平均值±標準差表示。p值小於0.05被認為有統計學意義。

確認

本出版物中描述的研究部分是由美國國立衛生研究院(NIMHD-G12MD007581)通過傑克遜州立大學rmi -環境衛生中心提供的資助，部分是由密西西比INBRE (NIGMSP20GM103476)提供的資助。beplay最新下载

參考文獻

1. Dasari S, Tchounwou PB(2014)順鉑在癌症治療中的作用分子機製。歐洲藥理學雜誌740:364-378。［Ref。］
2. Siddik ZH(2003)順鉑的細胞毒性作用模式和耐藥分子基礎。致癌基因22:7265 - 7279。［Ref。］
3. Desoize B, Madoulet C(2002)目前用於癌症治療的鉑化合物的特殊方麵。血液病42:317-325。［Ref。］
4. Goodsell DS(2006)分子角度:順鉑。幹細胞24:514-515。［Ref。］
5. Weiss RB, Christian MC(1993)新的順鉑類似物的開發。複習一下。藥物46:360 - 377。［Ref。］
6. 王曉燕，王曉燕，王曉燕，等。順鉑細胞毒性的生物化學機製。抗癌藥物醫學化學7:3-18。［Ref。］
7. dobrzyzynska I, Skrzydlewska E, Figaszewski ZA(2014)新型雙核順鉑(II)配合物對人Molt-4白血病細胞電特性的影響。細胞生物化學Biophys。［Ref。］
8. Alakananda B, Soumya K(2010)順鉑誘導DNA損傷的細胞應答。J .核酸雜誌2010:201367。［Ref。］
9. Gupta SC, Hevia D, Patchva S, Park B, Koh W，等(2012)活性氧對癌症的利弊:活性氧在腫瘤發生、預防和治療中的作用。抗氧化氧化還原信號16:1295-322。［Ref。］
10. Saad SY, Najjar TA, Alashari M(2004)非選擇性腺苷受體封鎖和磷酸二酯酶抑製在順鉑誘導的大鼠腎性腺毒性中的作用。臨床經驗藥物學31:862-867。［Ref。］
11. Hirata J, Kikuchi Y, Kita T, Imaizumi E, Tode T，等。(1993)12- o -十四鈣酰磷-13-醋酸酯和D, l-丁硫氨酸-s, r -亞碸昔明對人卵巢癌細胞對順二胺二氯鉑(II)的敏感性調節。癌症雜誌55:521- 527。［Ref。］
12. Isonishi S, Andrews PA, Howell SB(1990)人卵巢癌細胞對順式二胺二氯鉑(II)的敏感性增加，對12- o -十四烷基苯酞酯13-醋酸酯的治療反應。生物化學雜誌265:3623-3627。［Ref。］
13. Cuadrado A, Lafarga V，張PC, Dolado I, Llanos S, et al.(2007)一種新的p38 MAP激酶調控的轉錄共激活因子，可刺激p53依賴性凋亡。Embo j 26: 2115-2126。［Ref。］
14. Jones EV, Dickman MJ, Whitmarsh AJ (2007) c-Jun n端激酶調節p73介導的細胞凋亡。生物化學雜誌405:617- 623。［Ref。］
15. Brozovic A, ambriovi - ristov A, Osmak M(2010)順鉑誘導的活性氧、穀胱甘肽和BCL-2與順鉑耐藥的關係。毒醇40:347-359。［Ref。］
16. Ozben T(2007)氧化應激和凋亡:對癌症治療的影響。中國藥理學雜誌32(4):361 - 361。［Ref。］
17. Kelland LR(2000)一種新的順鉑耐藥機製。抗藥性更新3:139-141。［Ref。］
18. Yoshida M, Khokhar AR, Siddik ZH(1994)同源脂環混合胺鉑(II)配合物在敏感和耐藥腫瘤細胞株中的生化藥理學。巨蟹座Res 13: 3468-3473。［Ref。］
19. Bernabei PA, Santini V, silveststro L, Dal Pozzo O, Bezzini R，等(1989)白血病細胞的體外化學敏感性試驗:一種半自動比色法的開發。血液學檢查7:243-253。［Ref。］
20. 安春，王曉敏，林慧卿，Ifedigbo E, Washko GR，等(2012)香煙致肺氣腫中TLR4缺失促進自噬。肺細胞:L748-57。［Ref。］
21. Choudhery MS, Badowski M, Muise A, Pierce J, Harris DT(2014)供體年齡對脂肪組織來源間充質幹細胞的增殖和分化有負麵影響。J Transl Med 12:8。［Ref。］
22. Salcher S, Hagenbuchner J, Geiger K, Seiter MA, Rainer J, et al. (2014) FOXO3的轉錄靶標C10ORF10/DEPP調控人成神經細胞瘤ros敏感性。摩爾癌症13:224。［Ref。］
23. Yedjou CG, Tchounwou PB(2007)利用MTT和堿性單細胞凝膠電泳(Comet)測定三氧化二砷對人白血病(HL-60)細胞的體外細胞毒性和基因毒性作用。分子細胞生物化學301:123-130。［Ref。］
24. el-Khateeb M, Appleton TG, Gahan LR, Charles BG, Berners-Price SJ，等(1999)利用高效液相色譜和核磁共振技術研究順鉑水解物與蛋氨酸、半胱氨酸和血漿超濾液的反應。中國生物化學雜誌77:13-21。［Ref。］
25. Goto S, Yoshida K, Morikawa T, Urata Y, Suzuki K，等。(1995)順鉑耐藥癌細胞中順鉑-穀胱甘肽加合物的轉運增強。Cancer Res 55: 4297-4301。［Ref。］
26. Dhar S, Kolishetti N, Lippard SJ, Farokhzad OC(2001)體內靶向傳遞順鉑前體藥物以更安全有效的治療前列腺癌。美國國家科學研究108:1850-1855。［Ref。］
27. 高誌強，阿德吉·阿基(1999)順鉑和卡鉑的比較藥理和臨床活性。中華醫學會臨床雜誌17:409-422。［Ref。］
28. Tsimberidou AM, Braiteh F, Stewart DJ, Kurzrock R(2009)在沒有隨機試驗的情況下，美國食品和藥物管理局批準的腫瘤藥物的最終命運。中華臨床雜誌27:6243-6250。［Ref。］
29. 陳誌，Seimiya H, Naito M, Mashima T, Kizaki A，等(1999)ASK1介導遺傳毒性應激誘導的凋亡細胞死亡。致癌基因18:173 - 180。［Ref。］
30. Dalle-Donne I, Giustarini D, Colombo R, Rossi R, Milzani A(2003)人類疾病中的蛋白質羰基化。現代醫學雜誌9:169-176。［Ref。］
31. Previati M, Lanzoni I, Corbacella E, Magosso S, Guaran V，等(2006)順鉑誘導人早幼粒細胞白血病細胞凋亡。中華醫學雜誌18:511-516。［Ref。］
32. 宋bj, Soh Y, Bae M, Pie J, Wan J，等。(2001)4-羥基-2-壬烯醛通過選擇性激活c-Jun n端蛋白激酶通路介導PC12細胞凋亡。生化互動130-132:943-954。［Ref。］
33. Zanke BW, Boudreau K, Rubie E, Winnett E, Tibbles LA, et al.(1996)應激激活蛋白激酶途徑介導由正鉑、紫外線照射或熱誘導的損傷後的細胞死亡。生物學雜誌6:606-613。［Ref。］
34. Beck DJ, Brubaker RR(1973)順式鉑(II)二氨基二氯對大腸杆菌野生型和脫氧核糖核酸修複缺陷突變體的影響。微生物學雜誌(英文版)［Ref。］
35. 抗癌鉑配合物產生的DNA加合物的形成、分離和表征。藥典雜誌34:155-166。［Ref。］
36. Fraval HN, Roberts JJ(1978)在無咖啡因和存在咖啡因的情況下，順式鉑(II)二氯二胺對同步生長的HeLa細胞存活和DNA合成速率的影響。生化互動23:111-119。［Ref。］
37. Pascoe JM, Roberts JJ(1974)哺乳動物細胞DNA與無機鉑化合物之間的相互作用。一、DNA鏈間交聯和鉑化合物的細胞毒性。生物化學藥學23:1359-1365。［Ref。］
38. youssef MI, Saad AA, El-Shennawy LK(2009)葡萄籽原花青素提取物對順鉑致大鼠氧化應激的保護作用。食品化學與毒理學47:1176-1183。［Ref。］
39. 秦麗峰，吳敖(2002)順鉑誘導肝癌細胞凋亡及其對細胞周期相關蛋白和細胞周期變化的影響。巨蟹座:175:27-38。［Ref。］
40. Bressac B, Galvin KM, Liang TJ, Isselbacher KJ, Wands JR，等(1990)人肝細胞癌中p53基因的異常結構和表達。美國科學院學報87:1973-1977。［Ref。］
41. Fajac A, Da Silva J, Ahomadegbe JC, Rateau JG, Bernaudin JF等(1996)順鉑耐藥人卵巢癌細胞係中順鉑誘導的凋亡和p53基因狀態。腫瘤雜誌68:67-74。［Ref。］
42. Burger H, Nooter K, Boersma AW, Kortland CJ, Stoter G(1998)順鉑誘導的睾丸生殖細胞腫瘤細胞株凋亡中p53、Bcl-2和Bax的表達。癌症雜誌77:1562-1567。［Ref。］
43. 曲坤，林濤，魏傑，孟F，王錚等(2013)順鉑通過上調HepG2細胞P53和P21的表達誘導細胞周期阻滯和衰老。南方科技大學學報33:1253-1259。［Ref。］

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