摘要

非霍奇金淋巴瘤(NHL)合並丙型肝炎病毒(HCV)和Sjögren綜合征(SS)具有共同的特征。TNFAIP3/A20的遺傳損傷與SS的淋巴瘤發生有關。我們研究了HCV患者(n=87)和(n=171) NHL中TNFAIP3的遺傳變異。rs2230926G變異在NHL患者和非NHL患者中的患病率無差異(p=0.51)。然而，在NHL患者中，rs2230926G等位基因僅限於類風濕因子陽性(RF+)患者(14.6% vs 0% RF-患者，p=0.015)。HCV感染是慢性抗原刺激的一個新例子，其中TNFAIP3的編碼變體有利於自身免疫B細胞的淋巴瘤逃逸。

關鍵字

A20;HCV-associated淋巴瘤;NF-kB

簡介

丙型肝炎病毒(HCV)感染與一係列肝外表現相關。非霍奇金淋巴瘤(NHL)的發展是最嚴重的並發症之一，其奇數比(OR)從2到4不等[1,2]。這些淋巴瘤多發於脾髒或淋巴結外。HCV感染更具體地與邊緣區淋巴瘤(MZL)和彌漫性大b細胞淋巴瘤(DLBCL)相關，這通常是由轉化的MZL[3]引起的。II型混合cryoglobulinémie (MC)的存在，即具有類風濕因子(RF)活性的單克隆免疫球蛋白(Ig) IgM，是HCV患者[4]中NHL發展的主要危險因素。

由於無症狀病程長、病毒抗原(Ag)水平高、抗HCV體液反應高，HCV感染是具有高血循環免疫複合物的慢性感染的原型。當它們以免疫複合物[5]的形式出現時，IgG具有免疫原性。這些免疫複合物刺激具有RF活性的膜Ig的B細胞，即分泌針對IgG的Fc部分的抗體。有趣的是，De Re等人發現hcv相關NHL的很大一部分可變基因區與典型RF序列[6]同源。值得注意的是，在hcv相關NHL中發現的這些限製性BCR基因片段與原發性Sjögren綜合征(pSS)相關NHL[7]表達的基因片段非常相似。合並pSS和慢性HCV感染的淋巴瘤還有其他顯著的特征，MZL的優勢，粘膜定位的高頻率，與MC的聯係，以及淋巴瘤定位在慢性抗原刺激活躍的靶器官[8]。

我們的團隊最近證明了基因變異TNFAIP3 / A20，參與控製NF-kB激活，促進pSS患者[9]中MALT淋巴瘤的發生。這強調了在慢性抗原刺激的情況下，自身免疫B細胞激活檢查點的功能障礙可能促使自身免疫B細胞發生惡性轉化。鑒於pSS和HCV患者的淋巴瘤發生之間的相似性，我們旨在評估A20基因變異在HCV相關淋巴瘤中的作用。

方法

研究設計和參與者

從2個隊列中選擇HCV和淋巴瘤患者。首先，從淋巴c研究中選擇了69例患者，這是一項觀察性多中心研究，包括B-NHL和活動性HCV感染的成年患者，排除了那些合並感染HIV[10]的患者。收集細胞學和組織學樣本進行集中複查和分子分析。這一人群進一步補充了18例先前在HCV和冷球蛋白相關血管炎[11]的GWAS中進行基因分型的患者。

對照組有HCV感染但無淋巴瘤的患者從3個隊列中選擇:46名患者來自巴黎la Pitié-Salpêtrière醫院內科，28名患者來自維勒瑞夫Paul Brousse醫院肝病科，97名患者來自上述HCV和冷球蛋白相關血管炎[11]患者GWAS。

所有病例和對照組均為白種人。所有患者都給予了知情同意。已獲得Paris Necker倫理委員會(n°05-06-08)對在clinicalTrials.gov注冊的淋巴- c研究的批準(識別號NCT01545544)。

血液樣本和血清學分析

免疫學分析包括血清Ig水平和RF。低溫球蛋白測定在每個中心進行。MC陽性定義為冷球蛋白水平大於0.05 g/L。進行細胞學和表型檢查，以排除循環淋巴瘤細胞超過5%的患者，專注於研究種係DNA。

基因分型和全外顯子測序

對TNFAIP3基因區外顯子3內的rs2230926單核苷酸多態性(SNP)進行了基因分型。基因分型采用應用生物係統公司(Foster City, CA, USA;試驗沒有。26882391-1)使用競爭性等位基因特異性PCR係統(LGC Genomics)，如前所述[9]。使用Sanger方法對種係DNA上的9個外顯子TNFAIP3基因進行測序，如前所述[9]。上述GWAS中包含的hcv相關冷球蛋白的患者已經進行了rs2230926基因分型，如前所述[11]。

統計分析

連續數據描述為中位數[範圍]，分類變量為數字(%)。病例相關性(即HCV患者與vs．無淋巴瘤)，淋巴瘤組織學類型與免疫狀態的比較采用Fischer確切檢驗。p值<0.05被認為是顯著的。

結果與討論

本研究分析了87例HCV和NHL患者的有效DNA。組織學亞群為29例DLBCL, 37例MZL(包括8例脾MZL)， 5例套細胞淋巴瘤，8例濾泡性淋巴瘤，2例慢性淋巴樣白血病和1例慢性ebv相關淋巴增生。RF和MC分別在48/87(55.2%)和43/66(65.1)患者中出現。將這些患者與171例無NHL的HCV患者進行比較(表1)。在對照組中，分別有127/171例(74.3%)和118/143例(82.5%)患者出現RF和MC。這種高頻率的射頻和MC的控製是由於選擇的控製。作為第一個探索性方法，29例HCV感染和淋巴瘤患者進行了種係DNA TNFAIP3全外顯子測序。4例(13.8%)存在外顯子rs2230926G錯義風險變異，導致外顯子3的氨基酸被Cys取代。沒有其他患者在編碼外顯子中出現TNFAIP3變體。因此，我們決定隻關注其他58名淋巴瘤患者和171名對照組的rs2230926變體。總的來說，在7/87(8%)的NHL患者和19/171(11.1%)的非NHL患者中，HCV相關的NHL與rs2230926G變異之間沒有關聯(p=0.51)(圖1，上麵板)。 The same result was observed when comparing NHL patients to another large cohort of HCV patients without cryoglobulinemia (Laurent Abel; data not shown). Conversely to pSS patients, we did not find any association between the presence of this variant and histological subtypes; notably its frequency did not differ significantly between MZL and other subtypes (3/37 and 4/50 respectively, p=1). However, we found that, among NHL patients, the presence of the rs2230926G allele was restricted to RF+ patients (7/48 (14.6%) than in RF- patients (0/39 (0%), p=0.015) (Figure 1, lower panel right). Interestingly, there was no association between rs2230926G and RF in the control group with HCV infection but without NHL (rs2230926G in 13/127 (10.2%) RF+ patients compared to 6/44 (13.6%) RF- patients, p=0.58) (Figure 1, lower panel left), suggesting that the risk variant is not involved in RF activity emergence.

	非淋巴瘤患者 n = 171	淋巴瘤患者n= 87例
人口統計學特征男n (%)	72 (42.1)	39 (44.8)
免疫學
年齡，年份，中位數[(範圍)]	57 (25 - 92)	61 [24 - 87]
類風濕因子陽性n (%)	127 (74.3)	48 (55.2)
淋巴瘤組織學n (%)
DLBCL	NA	29 (33.3)
MZL	NA	8 (9.2)
SMZL	NA	8 (9.2)
FL	NA	8 (9.2)
毫升	NA	5 (5.7)
慢性淋巴細胞白血病	NA	2 (2.3)
PTLD	NA	1 (1.1)
NS	NA	5 (5.7)

表1:HCV患者的特征。彌漫大B細胞淋巴瘤;HCV:丙型肝炎病毒;MZL:邊緣區淋巴瘤，SMZL:脾邊緣區淋巴瘤，FL:濾泡性淋巴瘤，ML:膜性淋巴瘤，CLL:慢性淋巴樣白血病，PTLD:移植後淋巴增生性疾病，NS:未說明

圖1:rs2230926G等位基因在HCV患者中的頻率根據NHL狀態(上圖)，NHL患者RF狀態(下圖，右)或NHL-患者(下圖，左)。HCV:丙型肝炎病毒，NHL:非霍奇金淋巴瘤，RF-:類風濕因子陰性患者，RF+:類風濕因子陽性患者

總之，我們發現在hcv相關淋巴瘤患者中，TNFAIP3的錯義外顯子rs2230926 SNP與RF存在關聯。風險等位基因已被證明與NF-kB通路激活的控製能力輕微下降有關[9,12]。與我們在pSS中觀察到的相反，在HCV感染的情況下，NF-kB激活控製的降低似乎不會誘導淋巴瘤，因為在NHL的發生和A20的外顯子變異之間沒有發現關聯。相反，我們的研究結果強調了A20損傷可能參與了從免疫複合物(IC)(抗HCVIgG/HCV-Ag)對RF+ B細胞的慢性刺激到NHL的多步驟過程。由於大量igg免疫複合物[5]的長期刺激，表達rf的克隆比非rf克隆更容易轉化為惡性淋巴瘤。有趣的是，最近有研究表明RF克隆在炎症的pSS唾液腺中很罕見，但更容易轉化為惡性淋巴瘤[13]。為了避免持續刺激的RF+ B細胞的淋巴瘤逃逸，對NF-kB通路激活的完美控製可能是必要的，而這一控製的輕微功能障礙可能足以驅動淋巴瘤的發生。這也許可以解釋為什麼A20的種係變異可能在RF+ B細胞中產生特定的後果。

為什麼種係多態性在RF+和RF-患者中可能有不同的結果，其原因仍有待確定。一種假設是，在這兩種情況下導致淋巴增生的致病過程不同，微環境的壓力可能不相同。RF陽性HCV相關NHL，多為MZL，依賴於含有HCV抗原的免疫複合物的慢性刺激。增加NF-kB激活這些受刺激的B細胞可能有利於淋巴瘤逃逸。相反，RF陰性HCV相關NHL，多為DLBCL，可由其他機製誘導，包括HCV直接感染B細胞，可促進淋巴瘤轉化。在後一種情況下，我們可以推測SNP可以通過增加浸潤的淋巴細胞和/或巨噬細胞中NF-kB的活化，促進更有效的抗腫瘤和/或抗病毒反應，從而防止淋巴瘤的發展。有趣的是，最近有研究表明，在T CD8浸潤的黑色素瘤中，通過rs2230926G觀察到的A20的損傷可以改善對腫瘤生長[14]的控製。

總之，本研究將我們之前對pss相關MALT淋巴瘤的觀察擴展到另一個發生在慢性抗原刺激背景下的淋巴瘤例子。在這兩種情況下，特征是RF+ B細胞的慢性刺激，編碼遺傳變異TNFAIP3導致A20功能的小功能缺陷似乎有利於這些自身免疫B細胞的淋巴瘤逃逸，但對非自身免疫B細胞的淋巴瘤發生沒有積極影響。通過有效治療HCV感染抑製慢性抗原刺激似乎是這些HCV相關淋巴瘤的合理治療方法。

利益衝突

作者沒有利益衝突需要聲明

確認

我們感謝Laurent Abel(法國巴黎巴斯德研究所)為我們提供了大量HCV患者的基因分型數據。

資助及補助金 討論

ANRS HC13淋巴c研究由讚助機構ANRS(國家肝病毒研究機構)資助。NIH授權(R01DA013324至D.T.)。

參考文獻

1. Negri E, Little D, Boiocchi M, La Vecchia C, Franceschi S (2004) b細胞非霍奇金淋巴瘤與丙型肝炎病毒感染:係統綜述。國際癌症雜誌111:1-8。［Ref。］
2. Schollkopf C, Smedby KE, Hjalgrim H, Rostgaard K, Panum I，等(2008)丙型肝炎感染與惡性淋巴瘤的風險。癌症雜誌122:1885-1890。［Ref。］
3. Besson C, Canioni D, Lepage E, Pol S, Morel P，等(2006)lnh93和lnh98成人淋巴瘤項目中丙型肝炎病毒陽性患者彌漫性大b細胞淋巴瘤的特征和結局。中華臨床雜誌24:953-960。［Ref。］
4. Saadoun D, Landau DA, Calabrese LH, Cacoub PP(2007)丙型肝炎相關的混合冷球蛋白血症:自身免疫和淋巴增生之間的十字路口。風濕病學(牛津)46:1234-1242。［Ref。］
5. Leadbetter EA, Rifkin IR, Hohlbaum AM, Beaudette BC, Shlomchik MJ等(2002)染色質- igg複合物通過IgM和toll樣受體的雙重作用激活B細胞。自然416:603-607。［Ref。］
6. De Re V, De Vita S, Marzotto A, Rupolo M, Gloghini A等(2000)對丙型肝炎病毒相關非霍奇金淋巴瘤免疫球蛋白抗原受體的序列分析表明，惡性細胞來源於主要發生在II型冷球蛋白血症中的類風濕性因子產生細胞。血液96:3578-3584。［Ref。］
7. De Re V, De Vita S, Gasparotto D, Marzotto A, Carbone A, et al.(2002)幹燥綜合征中的唾液腺B細胞淋巴增殖性疾病表現出與丙型肝炎病毒相關的非霍奇金淋巴瘤相似的抗原受體基因片段的限製性使用。中華免疫學雜誌32:903-910。［Ref。］
8. 淋巴瘤合並幹燥綜合征和丙型肝炎病毒感染可能有一個共同的發病機製:類風濕因子B細胞的慢性刺激。Rheum雜誌60:1007-1010。［Ref。］
9. Nocturne G, Boudaoud S, Miceli-Richard C, Viengchareun S, Lazure T，等。(2013)淋巴瘤合並原發性幹燥綜合征TNFAIP3的種係和體細胞遺傳變異。血液122:4068-4076。［Ref。］
10. Michot JM, Canioni D, Driss H, Alric L, Cacoub P，等(2015)抗病毒治療與丙型肝炎病毒和b細胞非霍奇金淋巴瘤患者更好的生存相關，ANRS研究HC-13淋巴-C。中華血液學雜誌90:197-203。［Ref。］
11. Zignego AL, Wojcik GL, Cacoub P, Visentini M, Casato M，等(2014)丙型肝炎病毒與冷球蛋白相關血管炎的全基因組相關性研究。基因Immun 15: 500-505。［Ref。］
12. Musone SL, Taylor KE, Lu TT, Nititham J, Ferreira RC，等(2008)TNFAIP3區域的多重多態性與係統性紅斑狼瘡獨立相關。Nat Genet 40: 1062-1064。［Ref。］
13. Bende RJ, Slot LM, Hoogeboom R, Wormhoudt TA, Adeoye AO，等(2015)在幹燥綜合征患者唇唾液腺中，常在粘膜相關淋巴組織型淋巴瘤中表達的刻板類風濕因子是罕見的。風濕性關節炎67:1074-1083。［Ref。］
14. Giordano M, Roncagalli R, Bourdely P, Chasson L, Buferne M, et al.(2014)腫瘤壞死因子α誘導蛋白3 (TNFAIP3, A20)抑製CD8 T細胞的抗腫瘤活性。美國科學院學報111:11115-11120。［Ref。］

在此下載臨時PDF

條信息

文章類型:研究文章

引用:Nocturne G, Boudaoud S, Besson C, Davi F, Canioni D, et al. (2016) hcv相關淋巴瘤患者中TNFAIP3的誤義變體與類風濕因子的存在相關。中華血液病雜誌1(3):doi http://dx.doi.org/10.16966/2471-5026.111

版權:©2016夜曲G等。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2016年10月8日

接受日期:10月24日

發表日期:10月28日