生物分析技術

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研究文章
牛和人血清白蛋白與新型抗癌候選藥物結合的紫外可見、熒光和分子對接研究

Aireen Romu1、2安吉李1凱倫陳1Vijaya Korlipara2Enju王1 *

1美國紐約牙買加聖約翰大學化學係
 2 美國紐約牙買加聖約翰大學製藥、健康和科學係

*通訊作者:王恩珠，聖約翰大學化學係，牙買加，紐約，美國電話:(718) 990 - 5225;電子郵件:wange@stjohns.edu

摘要

本研究利用紫外-可見吸收、熒光光譜和分子對接技術研究了兩種新合成的抗腫瘤藥物(AR2和AR3, WZ4002的類似物)與苯胺嘧啶支架核心部分與牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用。紫外可見光譜學揭示了兩種化合物與白蛋白的相互作用。這兩種化合物的同步和規則熒光光譜顯示，當BSA/ hsa -藥物配合物形成時，均表現出靜態猝滅過程。對這些化合物在280 nm處的吸收進行校正後，計算得到的結合常數中等大。計算的熱力學參數(ΔH， ΔS和ΔG)揭示了這兩種化合物和BSA/HSA熒光位點(位於位點I子域IIA)之間的相互作用力是通過範德華(疏水)和氫結合力實現的，這在分子對接研究中也觀察到了。

關鍵字

紫外可見;熒光光譜;分子對接;BSA和HAS結合;anilinopyrimidine;EGFR-TKIs


簡介

血清白蛋白(SA)，如牛(BSA)和人(HSA)是最豐富的血漿蛋白，是許多內源性(脂肪酸、氨基酸和離子等)和外源性(藥物)物質的轉運體和載體[1,2]。白蛋白與多種藥物的結合能力會影響藥物的給藥速度、療效和藥物結構特性的改變，這是一個公認的發現，是製藥工業非常感興趣的課題[3,4]。藥物蛋白結合研究可以為了解藥物的藥效學和藥代動力學，以及蛋白質的結構和功能提供重要信息[5-7]。藥物蛋白，特別是藥物與SA的結合性質和大小影響藥物的藥理行為和ADMET(吸附、分布、代謝、消除和毒性)。藥物- sa複合物的強結合親和力降低了遊離藥物濃度，降低了毒性，增加了疏水藥物在血漿中的溶解度，並調節其向細胞的傳遞。然而，較弱的結合會縮短藥物的預期壽命，導致其在靶組織中的分布不佳[8,9]。因此，在體外藥物與SA相互作用的結合研究非常重要，為設計更好的藥物藥理活性和療效[9]提供了見解。

SA因其獨特的微環境(表麵有7個疏水溝槽)和多種藥物分子的通用受體，被廣泛用作蛋白質表麵結合和藥物結合機製研究的模型蛋白[10,11]。由於BSA和HSA具有76%相似的結構序列同源性(分別為583和585個氨基酸殘基)[12]，它們被廣泛地放在一起研究蛋白質-蛋白質或蛋白質-藥物相互作用。它們都是一個單鏈球狀蛋白，包含三個結構同源結構域I、II和III，每個結構域內還有兩個子結構域(a和B)。在白蛋白的子結構域的疏水腔中發現了兩個特定的藥物結合位點，稱為白蛋白的I(位於IIA子結構域)和II(位於IIIA子結構域)[13-15]。蛋白質熒光來自氨基酸殘基，如存在於這些位點的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，或來自結合藥物分子本身的熒光。在BSA中，兩個主要的熒光位點是位於IB子結構域表麵的Trp 134和位於IIA子結構域疏水袋內的Trp 212。HSA中負責其內在熒光的氨基酸是位於IIA子結構域的trp214(最主要)，以及位於不同子結構域的幾個酪氨酸殘基[14-16]。

熒光光譜具有較高的靈敏度、選擇性和對熒光基團局部化學環境的敏感性，是研究藥物與血清白蛋白相互作用的常用分析技術[17,18]。溶液中的溶劑和配體通過動態和靜態猝滅[17]可以誘導蛋白質構象變化，降低發射。通過熒光猝滅測量，可以獲得藥白蛋白結合的信息。根據化合物的化學性質，如大小、極性、電荷和紫外/可見吸收能力、熒光猝滅能力、結合強度(具有結合常數)、可達性(結合位點的數量)和對兩個色氨酸位點的結合力有顯著差異[18-20]。

本項目的目標是研究兩種抗癌候選藥物(AR2和AR3)與苯胺嘧啶支架核心部分的結合親和力，該部分含有親電基團，被合成為表皮生長因子受體(EGFR)抑製劑(圖1)。嘧啶部分是一類重要的含n雜環分子，廣泛用作藥物製劑的關鍵構建單元，特別是作為抗癌藥物[21,22]。AR2和AR3帶有NO2或者N3.作為替代組，來自WZ4002(第三代EGFR-TKIs)，這是一種不可逆抑製劑，設計用於治療T790M突變[23]的非小細胞肺癌患者。與吉非替尼和伊馬替尼相比，AR2和AR3對不同細胞係(PC9, PC9- gr, H460, Ba/f3WT和Ba/f3T315I)進行了細胞毒性試驗研究。與吉非替尼相比，AR2和AR3對PC9-GR和H460細胞係表現出類似或更好的效力。與伊馬替尼相比，它們對Ba/F3 T3151也表現出更好的效力。與WZ4002相比，它們具有類似或更低的IC50對PC9-GR、H460、Ba/F3 WT和Ba/F3T3151細胞株[23]的影響。因此，研究這兩種化合物與SA的相互作用具有生物學意義。利用紫外-可見光譜、熒光光譜和分子模型研究了生理條件下血清白蛋白對這些化合物在血漿中的載體作用。

圖1:抗癌候選藥物的結構。

實驗
材料

商用牛血清白蛋白(BSA，純度98.0%)和人血清白蛋白(HSA，純度98.0%)采購自美國Sigma-Aldrich公司，並在4.0℃冰箱中保存。原液:2.1 × 103在甲醇和1.00 × 10中製備了M的AR2和AR35在0.10 M磷酸鹽緩衝液(PBS, pH 7.2)中製備M BSA/HAS。將牛血清白蛋白/牛血清白蛋白原液置於4.0℃的黑暗環境中，進行熒光和紫外-可見吸收試驗。所有其他試劑均為分析級，並在未進一步淨化的情況下直接購買使用。用雙蒸餾水和去離子水製備所有水溶液。

化合物AR2和AR3是按照我們以前的報告[19]中描述的程序合成的。

方法

紫外可見吸收測量:吸收光譜記錄在Thermo Insight紫外可見分光光度計220上，使用1.0 cm石英電池。AR2/ AR3溶液在(1.76 ~ 35)× 10濃度範圍內的紫外-可見吸收光譜6M, BSA/ HSA為(5-10)× 106M和不同濃度比的BSA-AR化合物混合物在pH 7.2磷酸鹽緩衝液中298 K記錄在250 ~ 400 nm範圍內。

熒光測量:所有的熒光規則光譜和同步光譜都是在配備恒溫浴的Perkin Elmer LS50B分光光度計上使用1.0 cm石英試管獲得的。熒光測量在三種溫度(293,298,303 K)下進行，溫度範圍為290-500 nm。在熒光光譜測量中，100 μ L = 1.00 × 105將M BSA/HSA溶液加入到2900µL的緩衝溶液中。人工連續添加原液滴定BSA/ HSA溶液，AR2/AR3濃度變化範圍為0 ~ 20 μ M。激發和發射狹縫寬度均設置為10 nm。激發波長為280nm，整個實驗過程中通過循環水保持樣品溫度。

同步光譜在270-350 nm處Δλ=15 nm和Δλ=60 nm，激發和發射狹縫設置為10 nm。

分子建模:所有對接in-silico在Mac Pro 6核Intel Xenon X5處理器和Macintosh操作係統(OS X El Capitan)上使用Schrodinger 20175-1 (schrexploringllc, New York, NY, 20175)軟件進行研究實驗。使用默認參數進行苯胺嘧啶化合物的配體製備(LigPrep, schrredeinger, LLC, New York, NY, 2017)，同源建模(除了使用模板作為PDB: 4F5S和1E7H)， AR2和AR3以及同源模型的蛋白質製備基本上按照已報道的協議進行[24,25]。蛋白質製備向導工具(schrexplorerdinger Suite 2017- 1蛋白質製備向導;Epik, schrerous dinger, LLC，紐約，紐約，2016;Impact, schrrescuendinger, LLC，紐約，紐約，2016;Prime, schrredeinger, LLC, New York, NY, 2017.)用於細化牛血清白蛋白(BSA) (PDB: 4F5S)和人血清白蛋白(HSA) (PDB: 1E7H)的結構。以牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)氨基酸殘基Tyr 149和Trp 214為質心進行網格製備。對接(Glide, schrenergedininger, LLC, New York, NY, 2017)采用采用默認參數的標準精度(SP)方法進行。基於Ramachandran圖和所生成模型殘基Cα原子的均方根偏差(RMSD)與實驗結構進行同源模型驗證。Ramachandran圖分析顯示，在有利區域有94%的殘留，在允許區域有4%的殘留，在禁止區域有1.2%的殘留(所有甘氨酸和Ala82)。 The RMSD was found to be 0.061 Å, suggesting good alignment. The grid was generated by selecting residues at 4 Å from bound inhibitors in homology modeled proteins (template PDBs: 4F5S and 1E7H). The default protocol was used to perform induced-fit docking except the number of poses was reduced to 10. The surface representation of the bound ligand is generated by using the “create binding site surfaces” tool in Maestro with default parameters and a residue-type color scheme.

結果與討論
紫外可見光譜

紫外可見光譜研究提供了對結構變化和蛋白質-底物複合物形成的深入了解。在BSA和HSA存在和不存在的情況下，對兩種嘧啶類似物進行了紫外-可見光譜分析。BSA和HSA在250nm到300nm的UV範圍內吸收，λ最大值在280nm左右。AR2和AR3在270 nm處有一個較寬的吸收峰的芳香環。在280 nm處，牛血清白蛋白和AR化合物的吸收光譜有重疊。圖2為7.0 × 10的吸收光譜6M BSA伴AR3。在AR2和AR3中，單個嘧啶化合物的吸光度略低於相同濃度下每個嘧啶化合物吸光度的牛血清白蛋白的添加劑。AR化合物濃度越高，吸收光譜曲線3和曲線4的差異越小。HSA的紫外-可見吸收光譜變化與兩種AR化合物相似。這些結果表明，BSA/HSA與嘧啶類化合物之間存在相互作用，對兩種化合物的電子能級有輕微的改變。但是，苯氧環上的-N取代3.或-不2沒有顯示出顯著差異。

圖2:吸收光譜為(1)7.0 × 106M bsa， (2) 4.3 × 105M ar3， (3) 7.0 × 106M) BSA和4.3 × 105M AR3和(4)(1)和(2)的添加劑，pH值均為7.2。

熒光猝滅研究

熒光團周圍的微環境由三種氨基酸殘基組成:酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。當這三種氨基酸由於結合位點上蛋白質的任何結構或構象變化而發生改變時，可以觀察到熒光的變化。為了了解蛋白-配體複合體在腔內形成的結合相互作用機製，我們對候選藥物(AR2和AR3)在BSA和HSA中進行了熒光實驗。收集兩種蛋白質的熒光數據並進行評估。由於相似性，僅以添加不同濃度化合物AR3的pH值為7.2時的BSA熒光光譜為例，如圖3所示。在280 nm激發時，牛血清白蛋白和牛血清白蛋白在345 nm處均有較強的熒光發射峰。當AR2/AR3的濃度逐漸增加到1.5 × 10時，蛋白在345 nm處的熒光強度下降5M.沒有觀察到發射峰的移動。這些結果表明，隨著AR化合物的加入，熒光位點發生了微環境變化。

圖3:熒光光譜為3.3 × 107M BSA在pH 7.2和298 K時存在AR3和不存在AR3。AR3濃度從上到下依次為:0、1.7、3.5、5.2、7.0、8.7、10.4、12和14 (× 106米)。

同步熒光光譜技術用於研究蛋白質的構象變化。如果將激發波長和發射波長之間的Δλ分別設置為15 nm和60 nm，同步熒光光譜分別提供了酪氨酸或色氨酸殘基的特征信息[26,27]。從圖4ab可以看出，它們的發射強度隨著AR3濃度的增加而降低，色氨酸的熒光強度要比酪氨酸強得多，但AR3的猝滅程度差不多。從圖4a (Δλ=15 nm)和4b (Δλ=60 nm)可以看出，酪氨酸和色氨酸殘基的發射波長都沒有變化。

圖4:同步熒光光譜為3.3 × 107M BSA在沒有和存在AR3時(a)∆λ=15 nm和(b)∆λ= 60 nm，在298 K和pH 7.2下。AR3濃度從上到下依次為:0、3.5、7.0、12、14 (× 106米)。

熒光猝滅是多種分子相互作用(激發態反應、能量轉移、基態絡合物形成、分子重排和碰撞猝滅)降低蛋白質-配體絡合物[28]的熒光強度的結果。為了研究猝滅機理(動態或靜態猝滅)，利用Stern-Volmer方程對熒光測量結果進行分析:

\[\壓裂{{{F_0}}} {F} = 1 + {K_ {sv}} \離開[眼下\]= 1 + {k_q} {t_0} \ [Q \左右 ]\,\,\,\,\,\,\ 左右(1 \)\]

F0(不含猝滅劑)和F(有猝滅劑)為藥物分子的熒光強度。k問猝滅器速率是常數τ嗎0為不存在猝滅劑時熒光分子發射激發態的平均壽命，[Q]為猝滅劑濃度。Ksv是Stern-Volmer動態淬火常數。k問可以從Ksv在生物分子中當τ0已知:k問= Ksv/τ0．

由於AR2和AR3在280 nm處有吸收作用，因此對熒光進行了修正[26,27,29]，公式如下:

\[Fcor = F{e^{A/2}}\，\，\，\， (2)\]

其中，F為在淬滅器相應濃度下測得的熒光強度;A為淬火器在280nm處的吸光度，A小於0.3。將式(1)修改為:

\[\壓裂{{{F_0}}} {{{f{和}}}}= 1 + {K_ {sv}} \離開[眼下\]= 1 + {k_q} {t_0} \ [Q \左右 ]\,\,\,\,\,\,\,\,( 3) \]

兩種淬火機製都與溫度有關，溫度越高，擴散速度越快，碰撞量越大，導致動態淬火常數值增大;然而，靜態猝滅(較低的恒定值)則會產生相反的效果，因為在較高的溫度下，弱結合蛋白-藥物複合物會發生失穩。在3種不同溫度(293,298和303 K)下，評價和分析兩種化合物(AR2和AR3)對兩種血清白蛋白的熒光猝滅作用，AR化合物的濃度保持在2 × 10以下5M以保證其吸光度低於0.3。結果被繪製出來，圖5顯示了一個使用AR3的例子。Stern-Volmer曲線與F呈線性關係0/ F天哪對比兩種化合物AR2和AR3與BSA和HSA的濃度。從這些圖K中sv和K問計算出的數值列於表1。K問(淬火過程的速率常數)比最大散射淬火常數(2 × 10)大100倍10米－1年代－1)的生物分子[30]表明兩種血清白蛋白中的化合物都存在靜態猝滅機製。計算出的KsvBSA和HAS中AR2值隨溫度升高沒有明顯的變化趨勢。但是，KsvAR3到BSA/HAS的猝滅值隨溫度的升高而增大。這表明這兩種化合物對兩種白蛋白都表現出動態和靜態猝滅機製[31,32]。

圖5:BSA的Stern-Volmer圖(3.3 × 107M, pH 7.2)，在()293 K， () 298 K和()303 K的AR3存在下，校正的熒光發射強度在345 nm。

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電腦及相關知識 T (K) Ksv(104米－1） K問(1012米－1年代－1） Ksv(104米－1） K問(1012米－1年代－1）
AR2 293 8.29 8.29 6.37 6.37
298 8.8 8.8 7.06 7.06
303 7.68 7.68 6.62 6.62
AR3 293 7.49 7.49 6.94 6.94
298 8.79 8.79 8.67 8.67
303 11.9 11.9 8.66 8.66

表1:AR化合物在三種不同溫度下對牛血清白蛋白和牛血清白蛋白猝滅的Stern-Volmer圖參數。

結合常數和結合位點數目的研究

為了進一步闡明相互作用的靜態淬火機製，利用修正的SternVolmer方程確定了不同溫度下的關聯常數(Ka)和結合位點數(n):

\ [\ log \離開[{\壓裂{{{F_0} - {f{和}}}}{{{f{和}}}}}\右]= \ log {K_a} + n \ log問 \,\,\,\,\,\,\,( 4) \]

K一個n分別為結合常數和結合位點數。所有其他參數表示與先前的Stern-Volmer方程(方程1-3)相同。在不同溫度下，由對數圖(AR3見圖6)計算出的Ka和n值見表2。可以觀察到，隨著溫度的升高，K一個在BSA和HSA中AR3的值也增加，而在AR2中K一個值似乎隨著溫度的升高而略有下降。一個K一個10的值4－105順序表明每種AR化合物與BSA之間形成了中等強度的結合力。自K起，AR2與BSA和HSA的靜態結合力均占主導地位一個值隨溫度升高而降低。在HSA中，兩種藥物候選化合物都有K一個值略小於BSA。在不同溫度下，BSA和HSA中整個蛋白-藥物複合物的n值約為1，表明在兩種血清白蛋白中候選藥物分子的相互作用過程中僅存在一個結合位點。藥物化合物可能與位於IIA子結構域疏水袋附近或內部的色氨酸殘基結合[31,32]。

圖6:BSA-AR3係統在()293 K， () 298 K和()303 K的修正Stern-Volmer圖。

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電腦及相關知識 T (K) Ka × 104(M -1） n ΔG
(焦每摩爾)		 ΔH
(焦每摩爾)		 Δ年代
(J /摩爾)		 Ka × 104 (M-1) n ΔG
焦每摩爾		 ΔH
焦每摩爾		 Δ年代
J /摩爾
AR2 293 11.9 0.88 -28.5 4．1 109.2 9.11 0.85 -27.8 -4.1 79.5
298 9.39 0.98 -28.4 7.84 0.96 -27.9
303 7.33 1.02 -28.2 7.4 0.96 -28.2
AR3 293 5.97 1.09 -26.8 -51.2 -82.0 5.75 1.09 -26.7 -36.3 -32.4
298 8.3 1.02 -28.1 6.89 1.11 -27.6
303 16.8 0.88 -30.3 8.2 1.03 -28.5

表2:結合常數K，結合位點數n，不同溫度下BSA和HSA的熱力學參數。

熱力學參數和結合力

在藥物和生物大分子之間有四種力/相互作用(氫鍵、疏水、範德華和靜電)。這些力的每一種類型都可以由熱力學參數[焓變(ΔH)和熵變(ΔS)]的符號和大小來確定:疏水力(+ΔH和+ΔS)，氫鍵和範德華力(-ΔH和-ΔS)和靜電力(-ΔH和+ΔS)[32]。蛋白質-藥物相互作用的自發性可以從自由能變化的符號和大小得到(ΔG)。自發相互作用發生在-ΔG值處，而非自發相互作用發生在+ΔG值處。這三個熱力學參數可以用以下公式計算:

ΔG = -RTlnK (5)

\ [1 n \壓裂{{{K_2}}} {{{K_1}}} = \壓裂{{\δH}} {R}左\[{\壓裂{1}{{{T_1}}} - \壓裂{1}{{{T_2}}}} \ ]\,\,\,\,\,\,\,\,\,\,\,( 6) \]

∆G =Δ穀岩Δ年代(7)

各參數在不同溫度下的計算值見表2。因此，在BSA和HSA中觀察到這兩種化合物的ΔG值均為負值，表明自發結合的形成。AR2與BSA在結合位點通過疏水相互作用(ΔH和ΔS都是陽性)結合，而在HSA中通過靜電相互作用(-ΔH和+ΔS)結合。AR3在結合位點通過氫鍵和範德華力與血清白蛋白相互作用(-ΔH和-ΔS)。

分子建模

分子對接提供了對蛋白質-配體複合物結合位點口袋的洞察。它預測了生物分子和小分子之間的相互作用，表明結合位點區域的熱力學可行性。圖7展示了化合物AR2和AR3與HSA殘基和BSA殘基相互作用最有利的結合構象的對接位姿，以及相互作用的類型。根據表3所示的對接結果，兩個SA的子結構域IIA(位點I)是我們化合物最有利的結合位點。

圖7:AR2和AR3在同源性血清白蛋白跨膜結構域誘導擬合對接模型。(A)化合物AR2在BSA中的對接位。氨基酸殘基用細管表示，顏色表示為碳用淡橙色表示，氫用白色表示，氮用藍色表示，氧用紅色表示，氯用深綠色表示。蛋白質以褪色的紅橙色帶形式表示。分子的球棒模型配色與上麵相同，除了碳原子用綠色表示。黑色虛線代表蛋白質配體分子間氫鍵，淺藍色虛線代表蛋白質配體分子間π-π樁相互作用。(B)化合物AR3在BSA中的對接位姿。表示同a (C)化合物AR2在HSA中的對接位姿。表示方法與A中相同，紅色虛線表示蛋白質-配體分子間靜電相互作用。(D) AR3在HSA中的對接位姿。 Representation is the same as in C.

AR2 AR3
結合位點 對接分數
(焦每摩爾)		 ΔGo
(焦每摩爾)		 對接分數
(焦每摩爾)		 ΔGo
(焦每摩爾)
BSA 網站我 -23.1 -28.4 -27.3 -27.9
網站二世 -12.9 -18.8
保險公司 網站我 -35.6 -28.1 -32.3 -27.6
網站二世 -19.2 -18.0

表3:298K時化合物與BSA和HSA結合的對接分數和吉布斯自由能。

在BSA中，兩種候選藥物都位於離Trp 212略遠的疏水口袋中，靠近兩個酪氨酸殘基Tyr 149和Tyr 156，周圍是其他氨基酸，如His 256、Glu 152、Ser 191、Thr 190、His 198和His 24。在結合位點區域識別的關鍵相互作用如下3.AR2和AR3的嘧啶環上的一個與其中一個-NH形成氫鍵2他的256組。在AR2和AR3的嘧啶環與Tyr 149的苯環之間觀察到π-π疊加作用。此外，對於AR3，在His 241的嘧啶環和咪唑環之間發現了第二次π-π樁位相互作用。

在HSA中，候選藥物位於trp214殘基附近的疏水口袋中，並被以下氨基酸殘基包圍:Lys 351, Leu 347, Lys 195, Leu 198, Phe 206, Ala 210和Arg 209。對接數據顯示了HSA結合位點區域的關鍵相互作用:AR2苯胺嘧啶環的-NH基團與Ala 210的羰基(C=O)形成h鍵相互作用。發現AR3的苯氧環與賴氨酸351之間存在π-陽離子相互作用。AR2上的硝基和AR3上的疊氮基與Arg 209側鏈形成靜電相互作用。

計算分子建模得到的理論結合能，並與自由能(ΔG)光譜值進行比較(表3)。結果具有可比性。該誤差在標準最小結合能誤差範圍內(~8.36 ~ 12.54 kJ/mol)5．

每個化合物的負ΔG值表明結合過程在結合位點的熱力學有利。此外，分子對接信息表明，氫鍵和疏水相互作用對這兩種化合物與BSA和HSA的結合起著主要作用。

結論

綜上所述，我們利用各種光譜技術(UV-Vis和熒光)以及分子對接法研究了AR2和AR3與血清白蛋白的結合作用。實驗和分子對接結果都表明，在BSA和HAS與每個AR化合物的結合位點上都存在一個熱力學上有利的結合過程(ΔG<0)。ΔG值越負，與蛋白質的結合常數越高。根據分子對接，AR化合物的首選結合位點在BSA和HSA的I位點。根據獲得的熒光數據發現，結合過程的機製是靜態猝滅而不是動態猝滅機製。從BSA和HSA與AR化合物結合位點的熱力學參數(ΔH和ΔS)結果中確定的兩種主要相互作用類型是氫鍵和疏水相互作用，這也與分子對接結果一致。這些在牛血清白蛋白和人血清白蛋白結合位點上的重要發現將在製藥工業中發揮重要作用。它將提供關鍵的見解，更好地理解藥物蛋白結合關係和新藥物的發現，特別是含氮雜環分子。

利益衝突

作者宣稱不存在利益衝突。

鳴謝

作者感謝聖約翰大學藥學與健康科學學院藥學係Uday K. Velagapudi博士和Tanaji T. Talele博士為分子對接項目提供訪問機會。這項研究得到了聖約翰大學的支持。《娛樂周刊》感謝聖約翰大學的寫作中心促成了手稿的完成。


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條信息

文章類型:研究文章

引用:羅木阿，李阿，陳凱，Korlipara V，王娥(2019)牛和人血清白蛋白與新型抗癌候選藥物結合的紫外可見、熒光和分子對接研究。生物化學分析4(1):dx.doi.org/10.16966/2576-5833.116

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出版的曆史:

  • 收到日期:2019年8月6日

  • 接受日期:2019年9月04日

  • 發表日期:2019年9月11日