分析Techniques-Sci Forschen

全文

研究文章
中子活化分析和電感耦合等離子體原子發射光譜法研究女性甲狀腺化學元素含量隨年齡的變化

弗拉基米爾•Zaichick1 *索非亞Zaichick2

1俄羅斯奧布寧斯克醫學放射研究中心放射性核素診斷部
 2美國芝加哥西北大學範伯格醫學院Gabriela Caraveo Piso博士實驗室

*通訊作者:俄羅斯奧布寧斯克醫學放射研究中心放射性核素診斷部Vladimir Zaichick電話:+ 60289 (48439);電子郵件:vezai@obninsk.com;vzaichick@gmail.com

摘要

甲狀腺功能障礙的患病率，包括甲狀腺腫和癌症，在老年人中高於年輕人。甲狀腺實質中特定化學元素含量的過量或缺乏在甲狀腺的體外和癌變中起著重要作用。研究了33例女性(平均年齡54.5歲，範圍3.5-87歲)正常甲狀腺中20種元素(Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn)質量分數隨年齡的變化。測量使用了非破壞性和破壞性方法的組合:儀器中子激活分析和電感耦合等離子體原子發射光譜法，分別。組織樣本被分成兩部分。一個用於形態研究，另一個用於化學元素分析。本研究發現，在女性正常甲狀腺中，Al、Br、Ca、Cu、Fe、P、S、Zn的質量分數在一生中有顯著增加，Cl的質量分數在一生中有顯著降低。研究結果表明，對於老年女性來說，甲狀腺實質化學元素如Al、Br、Ca、Cu、Fe和Zn的水平升高會導致甲狀腺腫和致癌，這些元素會增加甲狀腺內氧化應激。

關鍵字

甲狀腺;老化;化學元素內容;氧化應激;中子活化分析;電感耦合等離子體原子發射光譜法

縮寫

ROS-Reactive氧物種;ChE-Chemical元素;CRM / SRM-Certified /標準參考資料;短壽命放射性核素inaa - slr儀器中子活化高分辨光譜分析icp - aes -電感耦合等離子體原子發射光譜法國際原子能機構。


簡介

包括甲狀腺在內的內分泌器官在衰老過程中會發生重要的功能變化，與年輕人群相比，老年人甲狀腺功能障礙的患病率更高[1,2]。眾所周知，年齡增大會影響腺瘤性甲狀腺腫和甲狀腺癌[3]的形成。甲狀腺結節的發病率在老年人中增加，在65歲時達到近50%的頻率。甲狀腺癌的患病率和侵襲性均隨年齡增長而增加。女性患甲狀腺結節和癌症的幾率是男性的2-5倍[2-5]。

衰老是一個複雜的過程，涉及單細胞、器官和整個生物體的生化和形態學變化。關於衰老如何在分子水平上發生，最普遍接受的解釋之一是氧化應激假說[6]。活性氧(ROS)被廣泛認為不僅是衰老的原因，而且是包括致癌在內的一些病理條件的原因。衰老被認為是一種隨著時間的推移身體功能的損害，由DNA、蛋白質和脂質中的分子損傷累積引起，其特征還包括細胞內氧化應激的增加，這是由於細胞內清除ROS的[7]的逐漸減少。誘導癌症的細胞大分子氧化損傷也可以通過ROS的過度產生和缺陷的抗氧化和/或DNA修複機製[8]引起。ROS的過量產生與炎症、輻射和其他一些因素有關，包括血液和某些組織中某些化學元素(ChE)的過載，或其他具有抗氧化特性的化學元素的缺乏[9-15]。研究表明，不同部位ChE組成的不平衡可能導致不同類型的病理。許多ChE的適當水平的重要性是無可爭辯的，因為它們在特定濃度範圍內的有益作用，而另一方麵，它們在過高或過低濃度[12]時也會引起毒性作用。

在我們之前的研究[16-24]中，與人體非甲狀腺軟組織中I和一些其他ChE的含量相比，在完整的人體甲狀腺中觀察到它們的高質量組分。然而，關於成人甲狀腺，特別是老年女性甲狀腺中ChE質量組分的年齡依賴性的一些問題仍然沒有得到解答。闡明這種情況的一個有價值的方法是比較青年人(對照組)與老年人和老年甲狀腺患者的ChE質量分數。另一種方法是計算年齡和甲狀腺中ChE含量之間的相關性。在成年和老年女性的甲狀腺中發現ChE含量的過量或不足，可能提示它們在老年人甲狀腺功能障礙較高流行率中的作用。

關於正常老年甲狀腺中ChE質量分數的可靠數據顯然極其有限。關於人甲狀腺中化學元素含量的研究很多，使用了各種化學技術和儀器方法[25-45]。然而，這些數據大多基於對加工過的組織的測量，而且在許多研究中，組織樣本在分析前都經過清洗。在其他情況下，甲狀腺樣本用溶劑(蒸餾水、乙醇等)處理，然後在高溫下幹燥數小時。有證據表明，由於這種處理，一定數量的ChE會丟失[46-48]。此外，以前的研究中隻有少數使用認證/標準參考物質(CRM/SRM)進行質量控製來測定ChE質量分數。在以往發表的論文中，沒有關於年齡對正常人甲狀腺ChE含量的影響的數據。

因此，非破壞性技術如儀器中子活化分析短壽命放射性核素高分辨率光譜(INAA-SLR)結合隨後的破壞性電感耦合等離子體原子發射光譜(ICP-AES)為甲狀腺實質樣品中多元素的測定提供了一種很好的方法。這種方法的組合提供了一種可能性，通過比較兩種方法對某些元素獲得的結果來確保數據質量。

這項研究有三個目的。本研究的主要目的是使用INAA-SLR和ICP-AES確定從兒童到老年女性受試者正常甲狀腺中ChE質量分數的可靠值。第二個目的是比較年齡2組(41 ~ 87歲的成人和老年人)甲狀腺中ChE質量分數與年齡1組(3.5 ~ 40歲)甲狀腺中ChE質量分數的關係，最終目的是發現年齡與ChE含量之間的相關性。

所有研究都得到了醫學放射研究中心倫理委員會的批準。

材料和方法
樣品

人類甲狀腺樣本從33名年齡在3.5歲至87歲的女性(歐洲-高加索)隨機選擇的屍檢標本中獲得。所有死者都是奧布寧斯克公民，在奧布寧斯克市醫院法醫部接受了常規屍檢。年齡分為兩組，第一組為3.5-40歲(30.9±3.1歲，M±SEM, n=11)，第二組為41-87歲(66.3±2.7歲，M±SEM, n=22)。選擇這些組是為了反映兒童、青少年、青年和成年初期(第1組)以及成年第二階段和老年階段(第2組)的甲狀腺組織狀況。對每個受試者的現有臨床數據進行回顧。所有受試者都沒有陰陽人、內分泌紊亂或其他可能影響甲狀腺正常發育的慢性疾病的病史。所有受試者均未接受任何已知會影響甲狀腺ChE含量的藥物或補充劑。這些研究對象中大多數突然死亡的典型原因包括創傷或自殺以及急性疾病(心功能不全、中風、肺動脈栓塞和酒精中毒)。

樣品製備

用鈦手術刀[49]將甲狀腺右葉分為兩部分。一個組織部分由解剖病理學家檢查，而另一個用於ChE含量測定。組織學檢查用於控製年齡標準符合性以及無任何微腺瘤病和潛在癌症。

將用於ChE分析的樣品稱量後，轉移到溫度為-20℃的環境中保存，直到運送到奧布寧斯克醫學放射研究中心的那一天，所有樣品在那裏進行凍幹和均質[50-52]。

每個樣品的重量約為100 mg，用INAA-SLR測量ChE。INAA-SLR的樣品分別密封在聚乙烯薄膜中，用丙酮和精餾酒精洗手。密封的樣品被放置在標記的聚乙烯安瓿中。以酚醛樹脂製備的生物合成標準(BSS)為標準[53]。除BSS外，還使用了市售純化合物的等分。

經過NAA-SLR調查後，甲狀腺樣品從聚乙烯安瓿中取出，用於ICP-AES。樣品在高壓滅菌器中分解。對於這1.5毫升的濃縮HNO3.(硝酸65%，最大(max) 0.0000005 %汞;GR, ISO，默克，達姆施塔特，德國)和0.3 mL H2O2(純分析用)加入每個甲狀腺樣品，放入單室高壓釜(anconat2, Ltd, Moscow, Russia)， 160-200°C加熱3小時。高壓滅菌後冷卻至室溫，分解樣品的溶液用去離子水(最多20ml)稀釋，轉移到塑料量瓶中。同時，在不含組織樣品(隻含HNO)的高壓釜中進行相同的過程3.+ H2O2+去離子水)，所得溶液作為對照樣品。

認證的參考資料

為了進行質量控製，對來自國際原子能機構(IAEA)的認證參考物質(CRM) IAEA H-4動物肌肉的十個子樣品，以及來自波蘭核化學與技術研究所(cent, Warszawa, cent, tl -1)的五個子樣品INCTSBF-4大豆麵粉、INCT- tl -1茶葉和INCT- mph -2混合波蘭草藥與所調查的甲狀腺組織樣品同時進行分析。所有的CRM樣本與甲狀腺組織樣本處理方法相同。該質量保證計劃的詳細結果已在早期的出版物中發表[54-56]。

儀器和方法

采用WWR-C研究用核反應堆的氣動兔子係統安裝的水平通道，用INAA-SLR法測定了Br、Ca、K、Mg、Mn、Na的質量分數。通道內中子通量為1.7 × 1013 n cm－2年代－1．將含有甲狀腺樣品、生物合成標準品[53]、實驗室自製標準品和CRM的安瓿放入聚乙烯兔中，然後分別照射180秒。銅箔被用來評估中子通量。每個樣品分別在照射後1分鍾和120分鍾進行兩次測量。第一次和第二次測量的持續時間分別為10和20分鍾。伽馬能譜儀包括100厘米3.鍺(鋰)檢測器和基於計算機的在線多通道分析儀係統。該光譜儀在60 Co 1332 keV線上提供了1.9 keV的分辨率。

使用ICAP-61(美國Thermo Jarrell Ash)光譜儀，用ICP-AES測定樣品等分的Al, B, Ba, Ca, Cu, Fe, K, Li, Mg, Mn, Na, P, S, Si, Sr, V，和Zn的質量分數。水溶液中ChE含量的測定采用定量方法，使用每種元素0.5 mg/L和10 mg/L的校準溶液(美國高純度標準)。用分光計軟件(ThermoSPEC, 4.1版本)計算探針中的ChE含量。

使用了NAA-SLR和ICP-AES方法的詳細信息和其他分析細節在我們之前的出版物中有介紹[54-58]。

計算機程序和統計

采用INAA模式優化專用計算機程序[59]。所有甲狀腺樣品一式兩份，最終計算采用ChE含量平均值。使用Microsoft Office Excel對ChE含量進行統計彙總，包括算術平均值、標準差、平均值的標準誤差、最小值和最大值、中位數、0.025和0.975水平的百分位數。兩個年齡組間結果的差異采用參數學生t檢驗和非參數Wilcoxon-Mann-Whitney u檢驗進行評估。為了構建“年齡與ChE質量分數”圖表(包括隨年齡的趨勢線)和估計年齡與ChE質量分數之間的Pearson相關係數，也使用了Microsoft Office Excel程序。為了識別ChE含量的年齡依賴性趨勢，我們應用了指數、線性、多項式、對數和冪函數的近似方法。R2參數對應值的最大值反映了精度，近似用於函數的選擇。

結果

我們用NAA-SLR法和ICP-AES法測定正常女性甲狀腺中Ca、K、Mg、Mn、Na質量分數(Mg /kg，幹質量基礎)的結果比較見表1。

表2給出了正常女性甲狀腺中Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn質量分數的某些統計參數(算術平均值、標準差、平均值標準誤差、最小值和最大值、中位數、0.025和0.975水平的百分位數)。

我們的結果與已發表的人類甲狀腺中Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V和Zn含量的數據進行了比較，見表3。

為了估計年齡對ChE含量的影響，我們對上述兩個年齡組進行了檢驗(表4)。此外，我們計算了年齡與ChE質量分數之間的Pearson相關係數(表5)。圖1顯示了所有甲狀腺樣本中Al、B、Ba、Ca、I、K、Li、Mn和P質量分數的單個數據集，以及隨年齡變化的趨勢線。由於這些元素含量的年齡相關性最好用多項式函數來描述，所以這種近似反映在圖1中。

圖1:正常女性甲狀腺個體Ag、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、P、S、Zn質量分數數據集及其趨勢線

討論
結果的精密度和準確性

Al, B, Ba, Br, Ca, Cl, Cu, Fe, I, K, Li, Mg, Mn, Na, P, S, Si, Sr, V, Zn質量分數與CRM IAEA H-4動物肌肉，INCT-SBF-4豆粉，INCT-TL-1茶葉和INCT-MPH-2混合拋光草藥的認證值很一致[54-56]，以及Ca, K, Mg, Mn，用NAA-SLR和ICP-AES方法測定的正常女性甲狀腺中的Na質量分數(表1)證明了本研究結果的精度和準確性，如表2-5和圖1所示。

元素 NAA-SLR米1 icp - aes米2 ∆,%
Ca 1662±198 1598±245 3.9
K 5395±726 5815±776 -7.8
毫克 212±24 247±35 -16.5
錳 1.50±0.22 1.14±0.24 24.0
Na 6421±320 6645±290 -3.5

表1:na - slr法和ICP-AES法測定正常女性甲狀腺中化學元素質量分數(mg/kg，以幹質量為基礎)平均值(M±SEM)的比較
M-算術平均，em -平均標準誤差，∆=[(M1米2) /米1) * 100%。

性別 元素 毫克ydF4y2Ba SD 掃描電鏡 最小值 馬克斯 中位數 P 0.025 P 0.975



雌性n = 33		 艾爾 7.43 4.49 1.24 2.50 17.2 5.50 2.77 16.6
B 0.418 0.257 0.074 0.200 1.00 0.315 0.200 0.890
英航 1.42 1.38 0.38 0.048 5.00 0.770 0.121 4.34
Br 22.4 16.2 3.23 5.00 66.9 16.3 5.00 59.2
Ca 1630 1071 219 461 4256 1132 539 3902
Cl 3317 1480 290 1200 6000 3375 1388 5906
銅 3.40 1.41 0.35 0.500 5.90 3.35 1.10 5.79
菲 225 98 20. 52.0 435 199 64.0 391
我 1956 1199 219 114 5061 1562 309 4662
K 5605 3272 732 1914 13700 5058 2360 13230
李 0.0153 0.0078 0.0024 0.0015 0.0251 0.0152 0.0030 0.0250
毫克 230 105 26 66.0 426 216 73.5 403
錳 1.32 0.84 0.22 0.550 4.04 1.10 0.603 3.28
Na 6533 1744 324 3686 10450 6739 4088 9924
P 3860 2175 603 496 7368 3422 585 7337
年代 6579 2662 738 644 9921 7097 1238 9868
如果 75.7 58.1 16.1 6.90 176 47.6 9.90 175
老 3.30 2.77 0.69 0.200 10.9 2.85 0.369 9.18
V 0.970 0.056 0.016 0.0200 0.250 0.100 0.0260 0.211
鋅 83.2 41.2 8.1 6.1 166 84.9 6.16 156

表2:正常女性甲狀腺中Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn質量分數(Mg /kg，幹質量基礎)的統計參數
m -算術平均值，sd -標準差，SEM -平均值的標準誤差，最小值，最大值，P 0.025百分位與0.025水平，P 0.975百分位與0.975水平。

元素 公布的數據(參考) 這項工作
均數中位數(n)＊ 均值M或M±SD的最小值，(n)** 均值M或M±SD的最大值，(n)** M±SD
艾爾 33.6 (12) 0.33 (-) [25] 420 (25) [26] 7.43±4.49
某人 0.151 (2) 0.084 (3) [27] 0.46 (3) [27] 0.418±0.257
英航 0.67 (7) 0.0084 (83) [28] ≤5.0 (16)[29] 1.42±1.38
Br 18.1 (11) 5.12 (44) [30] 284±44 (14)[31] 22.4±16.2
Ca 1600 (17) 840±240 (10)[32] 3800±320 (29)[32] 1630±1071
Cl 6800 (5) 804±80 (4)[33] 8000 (-) [34] 3317±1480
銅 6.1 (57) 1.42 (120) [35] 220±22 (10)[33] 3.40±1.41
菲 252 (21) 56 (120) [35] 2444±700 (14)[31] 225±98
我 1888 (95) 159±8 (23)[36] 5772±2708 (50)[37] 1956±1199
K 4400 (17) 46.4±4.8 (4)[33] 6090 (17) [29] 5605±3272
李 6.3 (2) 0.092 (-) [38] 12.6 (180) [39] 0.0153±0.0078
毫克 390 (16) 3.5 (-) [25] 840±400 (14)[40] 230±105
錳 1.82 (36) 0.44±11 (12)[41] 69.2±7.2 (4)[33] 1.32±0.84
Na 8000 (9) 438 (-) [42] 10000±5000 (11)[40] 6533±1744
P 3200 (10) 16 (7) [43] 7520 (60) [30] 3860±2175
年代 11000 (3) 4000 (-) [34] 11800 (44) [30] 6579±2662
如果 16.0 (3) 0.97 (-) [25] 143±6 (40)[44] 75.7±58.1
老 0.73 (9) 0.55±0.26 (21)[27] 46.8±4.8(4)[33] 3.30±2.77
V 0.042 (6) 0.012 (2) [45] 18±2 (4)[33] 0.970±0.056
鋅 118 (51) 32 (120) [35] 820±204 (14)[31] 83.2±41.2

表3:根據文獻數據與我們的結果(Mg /kg，幹質量基礎)進行比較，得出正常人甲狀腺中平均值Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn含量的中值、最小值和最大值。
m算術平均值，sd -標準差，(n)*-所有引用數，(n)**-樣本數。

元素 女性的甲狀腺組織 比
AG1 3.5-40年n=11 AG2 41-87年n=22 t p£ 紫外線測試頁 銀2,AG1
艾爾 5.95±0.97 9.80±2.67 0.234 > 0.05 1.65
B 0.361±0.070 0.533±0.177 0.419 > 0.05 1.48
英航 0.819±0.278 2.37±0.75 0.106 > 0.05 2.89
Br 13.3±2.5 26.8±4.3 0.0118 ≤10．0 2.02
Ca 945±91 2042±301 0.0029 ≤10．0 2.16
Cl 4109±544 2965±318 0.0947 50.0≤ 0.72
銅 2.94±0.45 4.17±0.47 0.0804 ≤50.0 1.42
菲 174±25 264±25 0.018 ≤10．0 1.52
我 1876±346 2002±288 0.782 > 0.05 1.07
K 5545±1145 5654±995 0.944 > 0.05 1.02
李 0.0131±0.0033 0.0178±0.0033 0.342 > 0.05 1.36
毫克 234±41 225±35 0.881 > 0.05 0.96
錳 1.21±0.14 1.45±0.45 0.622 > 0.05 1．2
Na 6217±549 6675±405 0.51 > 0.05 1.07
P 3427±842 4552±812 0.358 > 0.05 1.33
年代 6049±1114 7426±697 0.318 > 0.05 1.23
如果 57.3±20.5 105±22 0.147 > 0.05 1.83
老 3.62±1.04 2.77±0.68 0.507 > 0.05 0.77
V 0.104±0.023 0.086±0.017 0.541 > 0.05 0.83
鋅 56.8±10.6 102.6±9.0 0.0033 ≤10．0 1.81

表4:兩個年齡組(AG)正常女性甲狀腺中Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、Zn質量分數(Mg /kg，幹質量基礎)平均值(M±SEM)的差異
m -算術平均值，em -平均標準誤差，t檢驗，學生t檢驗，u檢驗- Wilcoxon-Mann-Whitney u檢驗，統計顯著值加粗。

元素r 0.46鋁 B 0.26 英航0.45 Br 0.18 Ca 0.38 Cl -0.43 0.50銅 鐵0.26 我0.08 0.01 K
元素r 李0.45 -0.11毫克 0.16 Mn Na 0.2 0.61 P 0.68年代 如果0.48 Sr 0.22 V 0.31 鋅0.66攝氏度

表5:女性正常甲狀腺的年齡(年)與化學元素質量分數(mg/kg，幹質量基礎)之間的相關性(r相關係數)。
有統計學意義值:ap≤0.05,bp≤0.01,cp≤0.001。

與已發表數據的比較

Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn質量分數的平均值如表3所示，與其他研究報告的人類甲狀腺(包括從不同非甲狀腺疾病死亡的人獲得的樣本)的平均值的中位數很吻合[25-45]。李的平均值比之前報道的數據中位數低兩個數量級。此外，它超出了以前報告的平均數的範圍。得到的V的平均值比以前報告的數據的中位數高一個數量級，但它在以前報告的平均值範圍內。許多ChE質量分數的值並沒有被引用文獻的作者以幹質量為基礎表示。因此，我們使用已發表的成人甲狀腺幹質量基礎含水量75%和灰分4.16%的數據計算這些值[60,61]。

年齡對化學元素含量的影響

比較兩個年齡組的女性甲狀腺中Br、Ca、Cu、Fe、Zn質量分數與年齡有統計學意義的增加(表4)。在平均年齡為66.3歲的第二組女性甲狀腺中Br、Ca、Cu、Fe、Zn質量分數的平均值分別為102%、116%、42%、52%、81%，高於第一組(平均年齡30.9歲)。Ca、Cu、Zn的質量分數隨年齡增加有統計學意義(表5)，Al、P、S含量隨年齡增加而Cl含量隨年齡增加有統計學意義(表5、圖1)。而Al、P、S含量隨年齡增加而Cl含量減少有統計學意義(表5、圖1)。

因此，在正常女性甲狀腺中觀察到ChE含量的陽性(隨年齡增加)和陰性(隨年齡減少)變化。Al、Br、Ca、Cu、Fe、P、S、Zn在壽命期內不斷積累(圖1)。Al、Br、Ca、Cu、Fe、P、S、Zn含量在前五六十年間增長較快，之後這些元素質量分數的變化較為有限。相比之下，Cl質量分數在3.5歲到87歲之間呈漸進的緩慢下降(圖1)。根據作者目前可獲得的信息，未見女性甲狀腺中Al、B、Ba、Br、Ca、Cl、Cu、Fe、I、K、Li、Mg、Mn、Na、P、S、Si、Sr、V、Zn質量分數隨年齡變化的發表數據。

化學元素在甲狀腺惡性轉化中的作用

鋁:微量元素Al沒有被描述為必需元素，因為它沒有直接的生化功能。就我們目前所知，鋁過量無疑會對人體健康產生負麵影響，包括甲狀腺功能[62]。

溴:溴是生物圈中已知的微量元素中含量最多、分布最廣的一種。無機溴是溴的離子形式，具有治療和毒性作用。增加溴的攝入量可能會幹擾碘在全身水平的代謝。在甲狀腺中，溴的生物學行為與碘的生物學行為相似[63]。因此，至少可以假設老年女性甲狀腺中過量溴化物水平的致甲狀腺腫效應。

鈣:除了溴水平升高之外，甲狀腺組織中與年齡相關的鈣質量組分的增加和過量可能會對腺體產生有害影響。這樣的猜測是有充分理由的。人體許多器官的鈣含量隨著年齡的增長而增加[64-72]。除了骨骼，這種自然現象可能是所有器官和軟組織的常見現象，它與血管鈣化有關。許多綜述和大量論文對Ca在前列腺、乳腺、肺等器官惡性轉化中的作用提出了關注[64-74]。

鈣離子鈣2 +是細胞增殖和細胞死亡的關鍵[66]。胞質鈣的變化2 +觸發腫瘤發生的關鍵事件，如細胞運動、增殖和凋亡[68]。細胞生長速度的增加與細胞內鈣池含量的增加有關[64,65]。此外，胞質遊離鈣含量增加2 +代表一種無處不在的信號機製，它控製著多種細胞過程，不僅包括增殖，還包括細胞代謝和基因轉錄[67]。事實上，老年女性甲狀腺組織中鈣含量的增加反映了細胞內鈣池的增加。因此，隨著年齡的增長，組織和器官中Ca含量的增加是許多良惡性腫瘤病因學的一個關鍵特征，包括甲狀腺腫大和癌症。

氯:Cl是一種普遍存在的細胞外電解質，對多種代謝途徑必不可少。Cl以氯化物的形式存在於人體內。它主要以氯化鈉的形式存在於細胞外液中。因此，通常在正常情況下，人體組織和體液中Na和Cl的含量是有相關性的(表6)。為什麼正常女性甲狀腺中的Cl含量會隨著年齡的增長而下降，以及它是如何作用於甲狀腺的還有待充分了解。

銅:銅和鐵、鋅一樣，也是人體中普遍存在的元素，在不同水平上發揮多種作用。各種銅酶(如胺氧化酶、銅藍蛋白、細胞色素-c氧化酶、多巴胺-單加氧酶、胞外超氧化物歧化酶、賴氨酸氧化酶、肽酰甘氨酸酰胺化單加氧酶、Cu/Z超氧化物歧化酶和酪氨酸酶)調節銅缺乏或過量的影響。銅過量會產生嚴重的負麵影響。銅會產生氧自由基，許多研究者假設過量的銅可能通過氧化途徑引起細胞損傷，導致脂質過氧化、硫醇氧化增強，最終導致DNA損傷[75-77]。因此，隨著年齡的增長，甲狀腺實質中銅超載的增加可能與氧化應激、腺體功能下降和甲狀腺腫大或癌症風險增加有關。

鐵:鐵是人體必需元素，但有益的鐵濃度窗口很窄。最近的許多研究都強調了鐵過量的不利影響。在遺傳性疾病(如血色素沉著病和地中海貧血)中，鐵過量補充(特別是在慢性腎衰竭的情況下)，或絕經後婦女因月經停止而導致血清鐵水平升高都可能是有害的。甲狀腺組織中與年齡相關的鐵質量分數的增加和過量可能導致對腺體的有害影響。有充分的理由進行這樣的猜測，因為許多評論和大量的論文提出了對鐵的毒性和腫瘤的關注。事實上，鐵過量可能與氧化應激、甲狀腺功能下降和甲狀腺腫大或癌症風險增加有關[78]。

磷:P在細胞信號轉導和人體能量交換中的多種生物作用中都是必需的。大約80%-90%的磷以羥基磷灰石的形式存在於牙齒和骨骼中。血清無機磷升高被懷疑會通過血管鈣化、心肌纖維化和左心室肥厚的發展增加慢性腎髒疾病、心血管疾病的風險[79]。在男性和絕經前女性中，血清磷水平隨著年齡的增長而逐漸下降。在男性中，在21-85歲的整個年齡範圍內，這種下降仍在繼續。相反，在女性中，絕經後血清磷水平迅速上升。老年婦女血清磷水平的升高與血清甲狀旁腺激素水平、每日膳食磷攝入量和估計的腎小球濾過率的變化無關[80]。磷酸鈣是主動脈壁沉積物的主要成分之一[81]。因此，老年女性甲狀腺實質中P水平高可能與血管鈣化密切相關。P水平升高如何影響甲狀腺功能及其在甲狀腺腫大和致癌中的作用有待進一步研究。

硫:S主要來自蛋白質，但通常存在於蛋白質中的20種氨基酸中隻有2種含有硫——蛋氨酸和半胱氨酸。其中一種氨基酸，蛋氨酸，我們的身體不能合成，因此必須從飲食中補充。蛋白質含有3%到6%的硫氨基酸。硫氨基酸通過影響細胞氧化還原狀態和解毒有毒化合物、自由基和活性氧的能力，對細胞係統的維護和完整性做出了重要貢獻[82]。ROS是在正常的細胞活動中產生的，在一些病理生理條件下可能過量存在，如炎症。因此，探索硫代謝的基本方麵，如含硫氨基酸的抗氧化作用，可能有助於闡明女性甲狀腺中S含量隨年齡增長而增加的機製[83]。因此，我們可以認為，老年女性甲狀腺中S水平的升高反映了60歲及以上女性甲狀腺實質中ROS濃度的增加。

鋅:Zn在300多種蛋白質和100多種dnbinding蛋白中都有活性，包括腫瘤抑製蛋白p53，這是一種Znbinding轉錄因子，在各種形式的細胞應激下作為細胞生長和生存的關鍵調節因子。P53在一半的人類腫瘤中發生突變，其活性受到金屬和氧化還原機製的嚴格調控。

一方麵，鋅離子是超氧化物歧化酶的輔助因子，超氧化物歧化酶通過保護細胞抵抗自由基和ROS形成的物質，防止腫瘤的發生和發展。鋅的作用是作為膜穩定劑，參與抗氧化保護和氧化應激抑製。因此，老年女性甲狀腺中鋅水平升高可能反映了60歲及以上女性甲狀腺實質炎症增加。

另一方麵，細胞內鋅濃度過高可能會損害細胞的正常代謝[84]。到目前為止，已經獲得了大量有關細胞內鋅對DNA聚合組織、複製和病變的直接和間接作用及其在細胞分裂中的重要作用的數據[85-87]。此外，已知Zn是ca依賴性凋亡內切酶的抑製劑，它參與DNA核間體碎裂。因此，細胞凋亡減少[88]。鋅的其他作用也被描述了。它們包括其作為一種有效的抗凋亡劑的作用[89-92]。這些結果表明，女性甲狀腺中與年齡相關的鋅含量過載可能是甲狀腺腫和癌的病因之一。

因此，如果我們將40歲以下女性甲狀腺中ChE質量分數水平作為所有年齡段的標準，那麼我們就必須得出結論:40歲以後的甲狀腺中Al、Br、Ca、Cu、Fe、P、S和Zn的含量顯著高於正常水平。甲狀腺實質中Al、Br、Ca、Cu、Fe、Zn等元素含量的升高可能對腺體產生有害影響。

結論

我們的數據表明，在女性正常甲狀腺中，Al、Br、Ca、Cu、Fe、P、S和Zn的質量分數在統計學上顯著增加，Cl的質量分數在一生中下降。老年女性甲狀腺中至少Al、Br、Ca、Cu、Fe、Zn等元素水平的升高會增加甲狀腺內氧化應激，從而增加甲狀腺腫和惡性轉化的風險。甲狀腺腫和甲狀腺癌是多病因、多因素的複雜疾病。要完全了解甲狀腺實質中某些化學元素含量不足在甲狀腺腫和癌病因學中的作用，需要對它們不同的作用機製有一個全局的認識，而以目前的知識水平來看，這是不可能的。然而，從我們的研究結果來看，老年女性甲狀腺中Al、Br、Ca、Cu、Fe和Zn水平升高很可能導致甲狀腺腫和致癌。

確認

我們非常感謝於博士。奧布寧斯克市醫院法醫部主任Choporov，因其提供甲狀腺樣本。我們也感謝Karandaschev V博士、Nosenko S博士和俄羅斯Chernogolovka微電子技術和高純度材料研究所Moskvina I在ICP-AES分析方麵的幫助。


參考文獻

  1. 葛興A(2015)甲狀腺與衰老過程。甲狀腺Res 8: A8。［Ref。］
  2. Mitrou P, Raptis SA, Dimitriadis G(2011)老年人的甲狀腺疾病。matuitas 70: 5 - 9。［Ref。］
  3. Kwong N, Medici M, Angell TE, Liu X, Marqusee E，等(2015)患者年齡對甲狀腺結節形成、多結節性及甲狀腺癌風險的影響。中華內分泌雜誌100:4434-4440。［Ref。］
  4. Mazzaferri EL(1993)孤立甲狀腺結節的處理。中華醫學雜誌28:553-559。［Ref。］
  5. Smailyte G, Miseikyte-Kaubriene E, Kurtinaitis J(2006) 1978-2003年立陶宛甲狀腺癌發病率增加。BMC癌症11:284。［Ref。］
  6. Olinski R, Siomek A, Rozalski R, Gackowski D, Foksinski M，等。(2007)衰老和年齡相關疾病中DNA的氧化損傷和抗氧化狀態。生物化學學報，Pol 54: 11-26。［Ref。］
  7. Minelli A, Bellezza I, Conte C, Culig Z(2009)氧化應激相關的衰老:前列腺癌的作用?生物化學生物物理學報1795:83-91。［Ref。］
  8. 高誌明，王曉明，王曉明(2010)氧化應激與氧化損傷在腫瘤發生中的作用。毒毒病理學38:96-109。［Ref。］
  9. Järup L(2003)重金屬汙染的危害。醫學公牛68:167-182。［Ref。］
  10. Zaichick V, Zaichick S(1999)鋅在前列腺癌發生中的作用。在:Anke M, et al.(編)Mengen und Spurenelemente, 19 Arbeitstagung。Friedrich-Schiller-Universitat,耶拿,104 - 115。［Ref。］
  11. Zaichick V (2004) INAA和EDXRF在正常人前列腺中鋅含量和分布的年齡動態評估中的應用。放射核化學26:229-234。［Ref。］
  12. Zaichick V(2006)醫學元素學作為一門新的科學學科。放射核化學雜誌269:303-309。［Ref。］
  13. Toyokuni S(2008)氧化應激致癌的分子機製:從流行病學到氧化基因組學。IUBMB壽命60:441-447。［Ref。］
  14. Gupte A, Mumper RJ(2009)作為癌症治療靶點的癌細胞中的銅和氧化應激升高。癌症治療Rev 35: 32-46。［Ref。］
  15. 李金鼎，吳明明，呂麗麗，楊玉桐，鄭淑雲(2009)人前列腺癌和良性前列腺增生組織中鎘濃度和金屬硫蛋白表達。《台灣醫學雜誌》第108期:554-559。［Ref。］
  16. Zaichick VY, Tsyb AF, Vtyurin BM(1995)微量元素與甲狀腺癌。分析師120:817 - 821。［Ref。］
  17. Zaichick VY, Choporov YY(1996)用儀器中子活化分析法測定人甲狀腺內碘的自然水平。放射核化學，207:153-161。［Ref。］
  18. Zaichick V, Zaichick S(1997)正常人甲狀腺內碘。科學總環境206:39-56。［Ref。］
  19. Zaichick V(1998)碘過量與甲狀腺癌。J微量元素試驗醫學11:508-509。
  20. Zaichick V (1998)在活的有機體內而且在體外能量彌散x射線熒光在臨床調查中的應用:經驗與未來。中華醫學檢驗雜誌11:509-510。
  21. Zaichick V, Iljina T(1998)飲食中補充碘對大鼠甲狀腺131I成胚作用的影響。18.見:Anke M, et al.(編)Die Bedentung der Mengen and spurenement element。Arbeitstangung。Friedrich-Schiller-Universitat,耶拿,294 - 306。
  22. Zaichick VY, Zaichick SV(1999)甲狀腺穿刺活檢標本中碘的能量色散x射線熒光。微量微量探針技術17:219-232。［Ref。］
  23. Zaichick V(1999)健康與非甲狀腺疾病中的人甲狀腺內碘。在:Abdulla M, et al. (eds)微量元素研究的新方麵。史密斯-戈登和西村，倫敦和東京，114-119。
  24. Zaichick V(2000)的相關性和潛力在活的有機體內intrathyroidal碘測定。在:Yasumura S，等人(編)在活的有機體內身體成分的研究。安。中國科學院學報904:630-632。
  25. Kortev AI, Dontsov GI, Lyascheva AP(1972)人類病理學中的生物元素。中烏拉爾出版社，斯維爾德洛夫斯克，俄羅斯。
  26. Kamenev VF(1963)成年人甲狀腺中的微量元素含量。適用於:農業和醫藥中的微量元素。UlanUde,俄羅斯,12日至16日。
  27. 蒂普頓IH，庫克MJ(1963)人體組織中的微量元素。第二部分。來自美國的成人受試者。衛生物理9:103-145。［Ref。］
  28. Reytblat MA, Kropacheyv AM (1967) Perm Prikam e居民正常甲狀腺中的一些微量元素。Perm醫學研究所學報78:157-164。
  29. Forssen A(1972)人體中的無機元素。一、Ba、Br、Ca、Cd、Cs、Cu、K、Mn、Ni、Sn、Sr、Y、Zn在人體中的存在情況。神經醫學與生物學雜誌50:99-162。［Ref。］
  30. 朱紅，王楠，張燕，吳強，陳銳，等(2010)中國成年男性器官組織中元素含量。衛生物理98:61-73。［Ref。］
  31. Salimi J, Moosavi K, Vatankhah S, Yaghoobi A(2004)腫瘤和非腫瘤人甲狀腺組織中重微量元素的研究:質子誘導x射線發射的研究。伊朗放射雜誌，第1期:211-216。［Ref。］
  32. Boulyga SF, Zhuk IV, Lomonosova EM, Kievetz MK, Denschlag Ho等(1997)白俄羅斯居民甲狀腺中微量元素的中子活化分析0——方法。放射核化學222:11-14。［Ref。］
  33. Reddy SB, Charles MJ, Kumar MR, Reddy BS, Anjaneyulu Ch，等(2002)甲狀腺腺瘤和甲狀腺癌的微量元素分析。核儀器方法物理研究B 196: 333-339。［Ref。］
  34. Woodard HQ, White DR(1986)身體組織的組成。英國無線電708:1209-1218。［Ref。］
  35. Ataullachanov IA(1969)女性內分泌腺中錳、鈷、銅、鋅和鐵含量的年齡變化。Endokrinol (Mosk) 15:98 -102。［Ref。］
  36. Neimark II, Timoschnikov VM(1978)居住在甲狀腺腫地方病中心的人甲狀腺癌的發展。內分泌學雜誌24:28-32。
  37. Zabala J, Carrion N, Murillo M, Quintana M, Chirinos J，等。(2009)加拉加斯人群正常甲狀腺內碘的測定。微量元素醫學生物學雜誌23:9-14。［Ref。］
  38. Zakutinskiy DI, ParfeynovUyD, Selivanova LN(1962)放射性同位素毒理學手冊。國立醫學文獻出版社，莫斯科。
  39. Remis AM(1962)巴爾卡裏亞的地方性甲狀腺腫和微量元素。見:第五屆北高加索外科醫生大會的會議記錄。羅斯托夫,276 - 278。
  40. Soman SD, Joseph KT, Raut SJ, Mulay CD, Parameshwaran M，等(1970)人體組織中主要元素和微量元素含量的研究。衛生物理19:641-656。［Ref。］
  41. Teraoka H(1981)日本正常男性和金屬工人體內24種元素的分布。Arch environment Health 36: 155-165。［Ref。］
  42. Boulyga SF, Becker JS, Malenchenko AF, Dietze H-J (2000) ICP-MS在小樣本病理性甲狀腺組織多元素分析中的應用。微化學學報134:215-222。［Ref。］
  43. Novikov GV, Vlasova ZA(1970)某些生物體的功能與人類飲食和實驗動物飼料中的碘含量有關。見:微量元素的生物作用及其在農業和醫藥中的應用，第2卷。Nauka、列寧格勒,6 - 7。
  44. Bredichin LM, Soroka VP(1969)治療甲狀腺腫大患者的微量元素代謝。Vrachebnoe Delo 51: 81-84。
  45. Byrne AR, Kosta L(1978)食物和人體體液和組織中的釩。科學總環境10:17-30。［Ref。］
  46. Zaichick V(1997年)在臨床醫學、職業和環境衛生領域為INAA進行生物材料的采樣、樣品儲存和製備。beplay最新下载采用核和同位素技術協調與健康有關的環境測量。國際原子能機構,維也納,123 - 133。
  47. Zaichick V(2004)生物樣品中化學元素在幹灰化過程中的損失。醫學中的微量元素5:17-22。
  48. Zaichick V, Zaichick S (2000) INAA應用於鹵素(Br和I)在凍幹生物材料長期儲存中的穩定性。放射核化學學報(英文版)［Ref。］
  49. Zaichick V, Zaichick S(1996)采樣過程中生物醫學樣本汙染的工具效應。肛門化學51:1322-1327。［Ref。］
  50. Zaichick V, TsislyakYu V(1978)一種簡單的生物樣品凍幹裝置。迪洛實驗室2:109-110。
  51. Zaichick V, TsislyakYu V(1981)生物樣品濃度的改性吸附和低溫凍幹機。實驗室Delo 2:10 0 - 101。
  52. Zaichick V, Zaichick S(1997)生物材料凍幹過程中化學元素損失的研究。放射核化學雜誌，218:249-253。［Ref。］
  53. Zaichick V(1995)合成參考材料在醫學放射研究中心的應用。肛門化學雜誌32:219-223。［Ref。］
  54. Zaichick V, Nosenko S, Moskvina I(2012)用電感耦合等離子體原子發射光譜法研究了年齡對成年男性完整前列腺中12種化學元素含量的影響。生物微量元素Res 147: 49-58。［Ref。］
  55. Zaichick V, Zaichick S (2013) NAA-SLR和ICP-AES在兒童和年輕成人前列腺19種化學元素質量分數評估中的應用。生物微量元素Res 156: 357-366。［Ref。］
  56. Zaichick V, Zaichick S(2014)中子活化-電感耦合等離子體原子發射光譜法測定成人和老年人前列腺中的微量元素。生物化學雜誌1:16-33。
  57. Zaichick S, Zaichick V (2011) INAA在正常人前列腺中Br、Ca、Cl、K、Mg、Mn和Na含量年齡動態評估中的應用。放射核化學雜誌28:197-202。［Ref。］
  58. Zaichick V, Zaichick S(2013)通過中子活化分析研究了年齡對兒童和青壯年前列腺中Br、Ca、Cl、K、Mg、Mn和Na質量分數的影響。應用Radiat Isot 82: 145-151。［Ref。］
  59. Korelo AM, Zaichick V(1993)優化醫療和環境樣品的多元素INAA的軟件。見:環境保護中的激活分析。聯合核研究所，俄羅斯杜布納，326-332。
  60. 張麗娟，張麗娟，張麗娟(2002)日本人正常人體器官中多元素含量的測定。Biol Trace Elem Res 90: 57-70。［Ref。］
  61. 施羅德HA，蒂普頓IH，納鬆AP(1972)人體內微量金屬:鍶和鋇。中國當代雜誌25:491-517。［Ref。］
  62. Krewski D, Yokel RA, Nieboer E, Borchelt D, Cohen J，等(2007)鋁、氧化鋁和氫氧化鋁的人體健康風險評估。J毒理學環境健康B危評Rev 10: 1-269。［Ref。］
  63. Pavelka S(2016)放射測定一些外來生物製劑的甲狀腺毒性作用。Rad應用1:155-158。［Ref。］
  64. Legrand G, Humez S, Slomianny C, Dewailly E, Abeele VF等(2001)Ca2 +池和細胞生長。肌內質鈣的證據2 +-ATPases 2B參與人類前列腺癌細胞生長控製。生物化學雜誌276:47608-47614。［Ref。］
  65. Munarov L(2002)鈣信號與酪氨酸激酶受體對細胞增殖的控製。中華醫學雜誌10:671-676。［Ref。］
  66. 王曉燕，王曉燕，王曉燕(2007)鈣信號與腫瘤細胞生長的關係。鈣信號與疾病。亞細胞生物化學45:405-427。［Ref。］
  67. 羅德力，郭士傑(2008)Ca2 +癌症信號檢查點:重構Ca2 +用於癌細胞增殖和存活。癌症8:361-375。［Ref。］
  68. 王曉明，王曉明(2009)2 +晚期前列腺癌細胞的內穩態。生物化學與生物物理學報(英文版)［Ref。］
  69. 楊輝，張強，何軍，陸偉(2010)肺癌中鈣信號的調控。中華胸外雜誌2:52-56。［Ref。］
  70. McAndrew D, Grice DM, Peters AA, Davis FM, Stewart T，等(2011)orai1介導的鈣流入在哺乳和乳腺癌中的作用。Mol Cancer Ther 10: 448-460。［Ref。］
  71. Zaichick V, Zaichick S (2014) INAA在成人和老年人前列腺化學元素質量分數評估中的應用。應用輻射計90:62-73。［Ref。］
  72. Zaichick V, Zaichick S, Davydov G(2015)中子活化分析研究增生性和非增生性前列腺中化學元素含量的差異。生物微量元素Res 164: 25-35。［Ref。］
  73. Zaichick V, Zaichick S(2016)成人非增生性前列腺中Br、Ca、Cl、K、Mg、Mn、Na濃度和組織學分布的年齡相關變化。EJBMSR 4: 31-48。［Ref。］
  74. Zaichick V, Zaichick S, Rossmann M(2016)細胞內鈣過量是前列腺癌病因學的主要因素之一。目的:分子科學3:635-647。［Ref。］
  75. Li Y, Trush MA(1993)對苯二酚被銅氧化導致的DNA損傷:Cu(II)/Cu(I)氧化還原循環和活性氧生成的作用。致癌14:1303 - 1311。［Ref。］
  76. Becker TW, G. Krieger, Witte I(1996)脂肪族和芳香醛與銅結合誘導的DNA單鏈和雙鏈斷裂(II). Free radires . 24: 325-332。［Ref。］
  77. Glass GA, Stark AA(1997)銅和銅藍蛋白促進穀胱甘肽- γ氨酰轉肽酶依賴性脂質過氧化:對鐵的需求和抗氧化劑和抗氧化酶的作用。環境分子突變原29:73-80。［Ref。］
  78. Toyokuni S(2009)鐵在致癌中的作用:癌症作為一種鐵毒性疾病。癌症科學100:9-16。［Ref。］
  79. Foley RN, Collins AJ, Herzog CA, Ishani A, Kalra PA(2009)青年人血清磷水平與冠狀動脈粥樣硬化相關。中華醫學會細胞免疫學雜誌20:397-404。［Ref。］
  80. Zhang D, Maalouf NM, Adams-Huet B, Moe OW, Sakhaee K(2014)性別和絕經後雌激素使用對血清磷水平的影響:2003-2006年全國健康和營養檢查調查(NHANES)的橫斷麵研究。中華腎髒雜誌63:198-205。［Ref。］
  81. Kowalska J, Gajda M, Kwiatek WM, Franczyk-Zarów M, Kostogrys RB，等(2012)同步輻射FTIR微光譜法檢測apoE/ ldlr雙敲除小鼠動脈粥樣硬化斑塊的化學成分。物理學報121:555-560。［Ref。］
  82. Townsend DM, Tew KD, Tapiero H(2004)含硫氨基酸與人類疾病。生物與醫學雜誌58:47-55。［Ref。］
  83. Atmaca G(2004)含硫氨基酸的抗氧化作用。延世醫學雜誌45:776-788。［Ref。］
  84. Bozym RA, Chimienti F, Giblin LJ, Gross GW, Korichneva I, et al.(2010)狹窄濃度範圍外的遊離鋅離子對多種細胞具有毒性在體外．實驗生物醫學(梅伍德)235:741-750。［Ref。］
  85. 微量元素在癌症中的作用。巨蟹座版35:3481-3487。［Ref。］
  86. Matusik RJ, Kreis C, Mc Nicol P, Sweetland R, Mullin C，等(1986)前列腺基因的調控:雄激素和鋅在基因表達中的作用。生物化學細胞生物學64:601-607。［Ref。］
  87. Blok LJ, Grossmann ME, Perry JE, Tindall DJ(1995)編碼鋅指轉錄因子的早期生長反應基因的特性，該基因可能參與細胞周期調控。摩爾內分泌素9:1610-1620。［Ref。］
  88. Zezerov EG(2001)前列腺癌發病的激素和分子生物學因素。Onkol 47: 174-181。［Ref。］
  89. 張楚強，何麗華，柴芳，Zalewski PD(2000)細胞鋅通量與細胞凋亡/基因導向細胞死亡的調節。J螺母130:1459S-1466S。［Ref。］
  90. Kontargiris E, Vadalouka A, Ragos V, Kalfakakou V(2012)鋅抑製羅呱卡因誘導的HaCa T細胞凋亡並維持NEP下調。生物微量元素Res 150: 460-466。［Ref。］
  91. 梁東，楊敏，郭波，曹軍，楊磊，等(2012)鋅對H2O2-誘導MC3T3-E1細胞凋亡通過MAPK和PI3K/AKT通路。生物微量元素Res 148: 420-429。［Ref。］
  92. 張旭，梁東，郭斌，楊玲，王玲，等。(2012)鋅抑製高糖誘導的腹膜間皮細胞凋亡。生物微量元素Res 150: 424-432。［Ref。］

在此下載臨時PDF

PDF

條信息

文章類型:研究文章

引用:Zaichick V, Zaichick S(2018)用中子激活分析和電感耦合等離子體原子發射光譜法研究女性甲狀腺化學元素含量隨年齡的變化。生物化學分析3(1):dx.doi.org/10.16966/2576-5833.114

版權:©2018 Zaichick V等人。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

  • 收到日期:2018年4月18日,

  • 接受日期:2018年8月21日,

  • 發表日期:2018年8月27日,