摘要

本研究研究了外係大鼠感染流感病毒後實驗性流感感染對動物肺組織和血清蛋白酶活性變化的影響。這些材料同時研究了這種蛋白酶抑製劑的活性。

關鍵字

流感病毒;Trypsin-like蛋白酶;的蛋白酶抑製劑

簡介

病毒和細胞的相互作用是一個整體，代表著兩種相反原則的一套內在關係。這種相互作用的最終結果在遺傳上由病毒所有者和病毒發起者共同決定，並取決於病毒繁殖過程和有機體的保護力的調節。這些過程之間的平衡決定了相互作用的結果:所有者的破壞，它的絕對恢複或形成慢性形式的感染汙染[1-6]。

眾所周知，在流感病毒的複製過程中，合成了血凝素的前體，在大亞基和小亞基上分裂是病毒獲得感染活性所必需的。分裂是由細胞胰蛋白酶樣蛋白酶進行的[7-11]。在流感感染期間，特定的細胞蛋白酶發生變化，證明病毒蛋白與細胞成分的協同作用。最有可能的是，蛋白酶水平的動態變化與病毒的繁殖及其被相同的蛋白酶水解的激活有關。然而，對這一現象的研究太少;隻有雞胚感染流感病毒和仙台[12]後，蛋白酶活性在感染早期下調，在感染後期升高的報道。

本工作的目的是研究實驗性流感感染在感染流感病毒A的小白鼠和雞胚中對蛋白酶動態和抑製活性的影響。

材料和方法

在研究中，使用了適應於小白鼠肺組織的流感病毒А/РR/8/34 (Н1N1)(該病毒來自俄羅斯醫學科學院伊凡諾夫斯基病毒學研究所博物館菌株實驗室)。病毒感染滴度為7 lg EID₅₀/0.2 ml，選用體重7-9和16-17g的白色離係小鼠。動物在稀釋10的乙醚麻醉下，經鼻內注射體積為0.05 ml的А/РR/8/34^－2相當於20 LD₅₀傳染性病毒劑量。該劑量在感染後6天內可使動物100%死亡。處死動物，每組5隻，感染後15、30分鍾、1.6 h取肺取血，1 ~ 6 d取血取血。將肺在冷磷酸鹽緩衝液рН 7.5中衝洗兩次，並在砂漿中攪拌，懸浮在緩衝液中(每1個肺1毫升)，在芝加哥高強度超聲處理設備(美國)的7模式下用超聲均質，在攪拌器RC5c上以10000轉/分離心，«科爾帕梅爾»製造，轉子SS-34, 1小時，在+4°С。用上清和血清測定活性:感染性、蛋白酶和抑製性蛋白酶。胰酶樣蛋白酶的活性測定采用K.M.Veremeenko經s.v.v vovchuk[14]修飾的方法[13]。對肺勻漿和血清中蛋白酶抑製劑活性的鑒定采用了以前由a.p.l evetsky描述的酪蛋白法[15]。通過感染9 ~ 10天雞胚測定感染小鼠肺部病毒滴度，並在lg EID中表達₅₀/0.2 ml，標準方法進行血凝反應。

接收到的數據使用Microsoft進行處理^®Excel軟件。

結果與討論

在未感染動物的肺和血清中，胰蛋白酶樣蛋白酶及其抑製劑的水平在觀察期間(6天)未發生評估變化，且處於平衡狀態(圖1)。

圖1:感染流感病毒А/PR/8/34的小白鼠在6天內肺和血清蛋白酶活性的變化動態(以6- 9g和16-17隻小白鼠為例)

在流感病毒А/PR/8/34 (Н1N1)株的小鼠鼻內感染過程中，從感染後15分鍾到6小時開始，肺部和血清中的蛋白酶活性下降，相反，一種抑製劑的活性上升，特別是在肺部(圖1)。感染後6小時內的血凝和感染活性尚未確定。

在隨後的時間裏，蛋白酶活性增加了3^{理查德·道金斯}天數達到了參考水平。在此期間，血凝和感染活性急劇增加。侵染後48 h，侵染和血凝活性達到最大值(圖2)。侵染後96 h，侵染和血凝活性急劇下降，侵染動物開始死亡。被感染的動物還活著^th侵染後的第二天，蛋白酶活性重複增加5-6倍^th天變得可見，因此感染和血凝活性都不斷增加。由6^th一天，對照組的流感病毒動物死亡。

圖2:雞胚尿囊液感染流感病毒А/PR/8/34的白小鼠肺部勻漿的感染和血凝活性

因此，感染小鼠肺部感染病毒的積累與2^nd天侵擾。同時，增大了病毒滴度的5^th在受感染動物的肺組織和血清中，白晝也與蛋白酶活性的上升相吻合。

尋找引起蛋白酶活性降低的原因^聖在感染後的第一天，我們測定了抑製蛋白酶活性的肺組織和血清的小白鼠。

從圖3可以看出，在未感染的動物中，血清蛋白酶活性和蛋白酶抑製活性處於穩定水平。在肺組織中，蛋白酶抑製活性發現的數量非常少。

圖3:感染流感病毒А/PR/8/34的小鼠肺中胰蛋白酶樣蛋白酶抑製劑的活性

在感染動物的肺組織和血清中，感染後的蛋白酶抑製活性在6 h急劇升高，2 h下降^nd一天下來，又逐漸上升到5點^th的一天。

因此，有可能通過蛋白酶抑製活性的增強來解釋感染後最初幾個小時蛋白酶活性的降低(在感染小鼠的肺組織中可以明顯觀察到)，它上升了2-3^{理查德·道金斯}由於抑製活性降低，感染汙染發展的天數。但同時增加的蛋白酶和抑製活性由5^th感染後的第一天有證據表明其他原因的蛋白酶激活在這一時期發展為感染。

引用的數據表明，在未感染流感病毒的動物血清中，蛋白酶活性和蛋白酶抑製活性的平衡在流感病毒感染時被打破。有可能在感染過程中確定三個階段，這三個階段以不同程度的病毒繁殖、蛋白酶活性水平和蛋白酶抑製活性水平為特征。

最關鍵的變化發生在感染後的最初幾個小時。感染後6 h，感染動物肺蛋白酶和血清蛋白酶含量下降，蛋白酶抑製活性增強。因此，可以假設蛋白水解活性的降低與蛋白酶抑製劑各自的積累有關。顯然，流感病毒感染的細胞在肺組織和血清中誘導抑製劑的出現。

結論

在感染病毒積累最多的時期(感染後2天)，蛋白水解活性下降，但這種下降伴隨著抑製劑活性的降低。可能，其中一個原因是使用細胞胰蛋白酶樣蛋白酶來激活受感染小鼠肺部的蛋白水解病毒，並在受感染動物的有機體中深入沉積。蛋白酶活性重複降低5-6天是由其他因素引起的，顯然是由菌群覆蓋引起的。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Divocha VA(2016)實驗性流感感染汙染小鼠機體病變第一階段抑製劑和蛋白酶的動態。Autoimmun感染2(3):doi http://dx.doi.org/10.16966/2470-1025.118

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出版的曆史:

收到日期:2016年5月25日

接受日期:2016年6月20日

發表日期:2016年6月24日