摘要

背景:在環境有限的國家，自體免疫疾病鮮有報道。我們的目的是調查布基納法索自身免疫疾病的負擔、免疫和臨床診斷。

方法:我們前瞻性地招募了2012年至2014年間在布基納法索Bobo Dioulasso的SOURO SANOU大學醫院疑似自身免疫性疾病的患者進行隊列研究。人口學特征、臨床表現、血清自身抗體測定和血漿病毒和細菌狀態(HBV、HCV、HIV和登革熱血清型1、2、3和4，結核分枝杆菌和萊姆病)。所有血漿樣品在- 80°C下保存，分析時不立即製作。

結果:在三年的研究期間，共65例懷疑自身免疫性疾病的患者被診斷。在條件有限的國家(布基納法索)，轉診診斷在17/65名患者(26.2%)中是正確的。自身免疫性疾病發生率為17/73950(0.023%)。其中4/73950(0.005%)為係統性紅斑狼瘡(SLE)， 5/73950(0.007%)為類風濕關節炎(RA)， 2/73950(0.003%)為CREST和多發性肌炎，2/73950(0.003%)為CREST, 1/73950(0.001%)為Gougerot Sjögren 's綜合征(SSG)， 2/73950(0.003%)為Hashimoto甲狀腺炎，1/73950(0.003%)為結節病。確診自身免疫性疾病的中位年齡分別為51歲(28 -75歲)，男女比例為0.06(1/16)。血漿病毒狀態(HBV、HCV、CMV和HIV、萊姆病、登革熱血清型1、2、3和4)為陰性。結核分枝杆菌為3.07%)。免疫抑製劑對自身免疫性疾病的治療在2/17的患者中無效。

結論:17/65例(26.2%)轉診診斷正確。在有限設置的國家(布基納法索)，發病率為17/73950(0.023%)。自身免疫性疾病與感染之間無顯著相關關係;自身免疫性疾病與衛生假說之間也無顯著相關性。

關鍵字

自身免疫;疾病;自身抗體

縮寫

安娜:核抗體;CENP-B:著絲粒蛋白B;dsDNA:雙鏈DNA;ELISA:酶聯免疫吸附法;IFI:間接免疫熒光法;Jo-1: Histidyl-t-RNA合成酶;援助:自身免疫性疾病;RNP70 A,C:小核核糖核蛋白複合體;70 kDa, A, C多肽Scl-70: DNA拓撲異構酶I;係統性紅斑狼瘡; SmD: Smith’s antigen (a family of RNA-binding proteins); SSA/Ro: Sjögren’s Syndrome A antigen/small ribonucleoprotein particle (Ro 52 and 60 kDa); SSB/La: Sjögren’s Syndrome B antigen/Lupus antigen, La ribonucleoprotein domain family, member 3 ; U1RNP: U1 nuclear ribonucleoprotein (mixture of recombinant RNP70, A, C); RA: Rheumatoid Arthritis; HT: Hashimoto Thyroiditis

簡介

自身免疫性疾病是一種具有不同自然病史和廣泛臨床症狀的慢性致殘疾病的異質家族。這些疾病都有潛在的免疫反應缺陷，導致身體攻擊自己的器官和組織。大多數這些疾病對婦女的影響格外嚴重;然而，所有種族、民族和社會經濟群體的人都受到影響[1,2]。某些疾病，包括係統性紅斑狼瘡和硬皮病，在非裔美國人中更常見，而其他疾病，如1型糖尿病和多發性硬化症，在白種人中更常見。所有年齡的人都受影響，從童年到成年後期發病。雖然許多個體自身免疫性疾病是罕見的，但總的來說，它們被認為影響著大約5%到8%的美國人口——1400萬到2200萬人[3-8]。由於自身免疫疾病的慢性(以幾十年為單位)和使人衰弱的並發症，它們需要高昂的醫療和社會經濟成本。此外，由於自身免疫疾病影響婦女的生育高峰，對家庭和社會的影響可能很大。雖然沒有關於自身免疫疾病的發病率、流行率以及醫療和經濟影響的綜合國家數據，也沒有關於大多數個體自身免疫疾病的數據，但現有的統計數據表明，這些疾病的影響是重大的。 Some of the available data for specific diseases are highlighted below. The purpose of our study is to establish immunology and clinical strategies for enhancing autoimmune diseases diagnosis in the limited setting country (BURKINA FASO) were incidence, prevalence, morbidity, and mortality of autoimmune diseases remains undiscovered.

材料和方法

道德的聲明

本研究中分析的樣本來自於到醫院就診的患者。本研究納入的自身免疫性疾病患者接受了有效的免疫抑製劑單獨治療或與其他藥物聯合治療。這項研究得到了布基納法索瓦加杜古國家衛生研究倫理委員會的批準。參與本研究的患者均給予書麵知情同意。

患者和方法

我們前瞻性地招募了2012年1月至2014年11月期間在SOURO SANOU大學醫院和另一家位於布基納法索Bobo Dioulasso私人診所有醫學和免疫學診斷為自身免疫性疾病的患者進行隊列研究。人口學特征、臨床表現、血清自身抗體譜和血漿病毒和細菌狀態(HIV/HBV/HBC/CMV/登革熱血清型1、2、3和4 /結核分枝杆菌/萊姆病)。

在我們的研究中，自身免疫性疾病的診斷結合了自身抗體血液檢測——射線、臨床表現和測量營養功能和炎症的血液檢測。此外，在不采用IFI法的情況下，采用診斷標準對每例自身免疫性疾病進行確診;患者血清自身抗體譜是臨床診斷的重要前提。事實上，ANA陽性結果和抗雙鏈原生DNA (antidsDNA)或抗sm抗體的存在構成了係統性紅斑狼瘡(SLE) 11個診斷標準中的2個[2,9-11];高滴度ANA陽性或存在抗ro /SSA或抗la /SSB抗體是Sjögren 's綜合征[10]的診斷標準;抗- Jo-1抗體的存在是診斷皮膚多肌炎的標準[12,13];抗熵蛋白或抗拓撲異構酶I (antiScl70)抗體的存在是將皮膚係統性硬化亞型分為局限性或彌漫性[9]的標準。

實驗室試驗

多重免疫點法:我們使用以下免疫斑點試劑盒(生物醫學診斷，法國)診斷自身免疫疾病

• ENA-DOT 7箱同時檢測7種抗體特異性的定性酶免疫分析法(EIA):針對可提取核抗原(SS-A, SS-B, Sm, Sm/RNP和Scl70)，以及針對2種附加抗原(著絲粒和Jo-1)。
• ANCA-MBG-DOT工具包同時檢測針對髓過氧化物酶(MPO)和絲氨酸蛋白酶(PR 3)的抗中性粒細胞細胞質抗體(ANCA)的定性酶免疫分析(EIA)。使用基於IV型純化抗原的抗腎小球基底膜(GBM)抗體。
• 階段-DOT4工具包質性酶免疫分析法(EIA)可同時檢測4種針對細胞質器官的自身抗體特異性(抗線粒體、抗jo1、抗核糖體和抗-LK1)
• DNA-DOT工具包一種定性酶免疫分析法(EIA)，用於檢測針對(DNA原生)的抗DNA抗體。
• 抗原被包覆在檢測條帶上不同的膜上;
• 首先，在含有稀釋的患者樣品的反應管中培養檢測條帶。如果該樣本包含至少一種抗體，這些抗體將識別並結合相應的抗原。孵育後，第一步洗滌去除所有未結合的蛋白質。
• 堿性磷酸酶標記的蛋白A偶聯物與捕獲的抗體結合。多餘的未結合的共軛物通過第二次洗滌步驟除去。
• 結合結合物與磷酸酶(BCIP/NBT)的不溶底物可見。這將產生一個藍色的圓圈，證實在測試的樣本中存在自身抗體。
• Anti-CCP抗體的測定采用兩步免疫分析法和自動樣品預處理，用於半定量測定人血清中特異於環瓜氨酸肽的Ig G類自身抗體，采用嵌合發光微粒免疫分析(CMIA)技術，其靈活的分析協議稱為chimiflex。結果< 5 U/ml的樣品定義為陰性。Ig G和Ig M RF采用chimiluminescent microparticle immunoassay (CMIA)技術，其靈活的檢測方案稱為chimiflex。結果< 20 UI/ml的樣品定義為陰性。

HIV、HBV和HCV篩查:Chimiluminescent microparticle immunoassay (CMIA)技術ci4100^®)用於篩查HIV、HBV和HCV。

巨細胞病毒和萊姆病篩查:酶聯熒光分析(ELFA)技術(MiniVidas^®)用於篩查巨細胞病毒和萊姆病。登革熱血清型1,2,3,4,5和結核分枝杆菌采用免疫層析技術(Hexagon D^®和六邊形結核病^®°)。

統計分析

數據分析采用Wilcoxon檢驗比較比率。我們使用費舍爾(t)檢驗的百分比。非參數檢驗(Kruskal Wallis和Mann-Witney)用於未驗證分布正態性。當p<0.05時，認為結果有統計學意義。使用STATA™進行分析。

結果

患者和基線特征

在研究期間訪問的次數為73950例，包括17例自身免疫疾病。17/65例患者轉診診斷正確(26.2%)。發病率為17/73950(0.023%)。

表1顯示了研究隊列中自身免疫性疾病患者的人口學和臨床特征。比較性別對自身免疫性疾病的影響，女性比男性更容易發生自身免疫性疾病(p=0.004)。分析自身免疫性疾病與種族或民族和家庭年收入之間的相關性，未觀察到民族和家庭年收入的差異(p=0.7)。

表1:研究隊列中患者的人口學和臨床特征(n = 65)

抗HBV或HCV(乙型或丙型肝炎病毒)，艾滋病毒，巨細胞病毒，包柔氏螺旋體burgdorferi在SSG、SLE、PR等自身免疫性疾病患者的血清或唾液中均未發現相關性(p=0.3)。

自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白譜

表2顯示了研究隊列中自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白概況。分析蛋白質的不同組分，發現低白蛋白血症與自身免疫性疾病相關(p=0.02)。因此，高丙種球蛋白血症與SLE相關，低丙種球蛋白血症與橋本甲狀腺炎相關。

表2:自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白譜
拿拿淋:不適用

自身免疫性疾病患者血清中的自身抗體譜

表3顯示了研究隊列中自身免疫性疾病患者血清中的自身抗體譜。比較自身免疫性疾病類型的比例，我們的隊列中無顯著統計學差異(p=0.07)。

表3:自身免疫性疾病患者血清中的自身抗體譜

在布基納法索，性別與自身免疫疾病之間的關係

在我們的研究中，受影響的成員中女性占多數。總體而言，94.12%(16/17)的受影響個體為女性，5.88%(1/17)的受影響個體為男性。免疫點技術的表現和診斷的敏感性和特異性分別為100%和57%。

正確使用和解釋血清學檢測診斷自身免疫性疾病對臨床醫生來說是一個挑戰，原因有二:第一，大多數自身免疫性疾病實驗室檢測的敏感性和特異性明顯低於100%;第二，使用不同的技術檢測自身抗體，如間接免疫熒光或多重免疫點試驗，會給出不同的結果。

自身免疫性疾病的比例與患者的社會經濟狀況

表4顯示了我們研究中自身免疫性疾病與患者社會經濟地位的比例。比較妊娠對自身免疫疾病發生的影響，發現多次妊娠的婦女比初產婦受影響更大(p=0.002)。

表4:自身免疫性疾病發病率與患者的社會經濟狀況

婦女的年齡和自身免疫疾病

圖1顯示了女性的年齡和自身免疫疾病。

圖1:婦女的年齡和自身免疫疾病

根據自身免疫性疾病的不同年齡比例，SLE和SSG分別以32.5歲和35歲的年輕女性多見(Khi 2=5.30)。老年婦女多發生CREST(68歲)、RA(60.4歲)、HT(50歲)、CREST和多發性肌炎(46.5歲)(Khi 2 = 3.72)。

討論

自身免疫性疾病發生率

在本研究中，自身免疫疾病的發生率很低(0.023%)，除1例患者外均為女性。在條件有限的國家(布基納法索)，轉診診斷在17/65名患者(26.2%)中是正確的。數據分析證實自身免疫性疾病的發生率較低。有0.005%的患者合並係統性紅斑狼瘡(SLE)， 0.007%合並類風濕關節炎(RA)， 0.003%合並CREST和多發性肌炎，0.003%合並CREST, 0.001%合並Gougerot Sjögren 's綜合征(SSG)， 0.003%合並橋本甲狀腺炎，0.001%合並結節病。自身免疫性疾病在美國和歐洲人群中的患病率為4-10%[8,14-18]。考慮到美國和歐洲自身免疫性疾病的患病率為4-10%，如上所述，發現的0.023%的自身免疫性疾病是非常低的，這可能隻是說明還有許多其他的自身免疫性疾病患者沒有被診斷出來。我們報告SLE和SSG分別多發於32.5歲和35歲的年輕女性。老年婦女多有CREST(68歲)、RA(60.4歲)、HT(50歲)、CREST和多發性肌炎(46.5歲)。在自身免疫性疾病中發現的這種性別不平等往往是由於激素因素[3-8,19,20];女性的抗體產生和淋巴細胞的存在高於男性[2]。 Indeed, in the mouse model of MS, experimental autoimmune encephalomyelitis in mice, disease severity is increased by castration in male mice diffuse and decreased by testosterone implantation in females diffuse [4].

性腺激素的免疫調節作用，特別是睾酮，可能是女性自身免疫性疾病特異性關聯的基礎。

我們還報道了與RA、SSG、HT、CREST/多發性肌炎和妊娠呈正相關。這些結果在許多研究中都有報道[12,13,21-24]。研究表明，懷孕期間從胎兒細胞通過胎盤的轉移，以及分娩後它們在母親體內的持續存在，在某些情況下會幹擾免疫係統，這解釋了多胎婦女比單胎婦女更容易患自身免疫疾病。

在我們的研究中，我們發現衛生假說與自身免疫疾病沒有關聯。在我們的研究中，他們的年收入很低(< 5760美元)。調查人類自身免疫疾病風險與衛生程度關係的研究發現了許多關聯。

我們還檢查了與RA、SLE、CREST/多發性肌炎、HT和感染因子(HIV、HBV、HCV、萊姆病、登革熱血清型1、2、3和4)呈負相關，與結核分枝杆菌和RA病例呈正相關(3.07%)。

有可能是自身免疫性疾病和相關疾病結核分枝杆菌考慮到結核分枝杆菌和自身免疫性疾病之間的一些觀察到的相關性[1,2,9-13]，感染可能調節免疫反應和RA風險。評估與風濕性關節炎相關的風險是有意義的結核分枝杆菌以下人群的感染情況結核分枝杆菌頻率足夠高(如非洲熱帶);也許更重要的是，在任何按性別分層的人群中。

然而，我們的發現與在患者樣本中結合臨床體征直接識別自身抗體相一致。自身抗體的鑒定對有限環境國家自身免疫性疾病的診斷至關重要。臨床醫生可以使用這些結果作為對患者進行分類和/或評估其對特定療法的反應的指導，特別是在靶向生物療法開發的情況下[12,13,21]。

我們的技術提供了一種基於多重檢測的自身抗體定量新方法，這與早期的方法如線印跡法和傳統的一孔一測微量滴度ELISA彌散檢測[3,22,23]相比具有優勢。這些多重檢測使得使用單一平台和單一血清樣本同時檢測多種生物標誌物成為可能。在這項研究中，我們展示了對艾滋病患者中最常見的自身抗體檢測的不同水平的臨床敏感性。

骨密度測試^®允許從單個血清樣本中並行檢測7種抗原，具有高特異性(99.8%)。該方法節省了大量時間，避免了目前大多數臨床檢測實驗室用於AID樣品檢測的傳統的首次篩選和後確認算法。BMD隻需要20μL的樣品，並遵循與傳統ELISA檢測相同的步驟。連同低的設置成本和快速的樣品處理時間，BMD提供了一個負擔得起的替代目前可用的多路測試係統。這些節省成本的特性使預算有限的小型實驗室能夠使用這種技術，而不需要大量的資本支出和對實驗室技術員的培訓。與已建立的ELISA分析方法相比，BMD顯示出優異的分析靈敏度(100%)，但特異性(57%)較差[4,8,11]。此外，與直線免疫分析法相比，BMD在患者的臨床管理中具有定量優勢[25-28]。

結論

17/65例(26.2%)轉診診斷正確。在有限設置的國家(布基納法索)，發病率為17/73950(0.023%)。自身免疫疾病的發病率很低可能是由於一些未確診的患者。自身免疫性疾病與感染之間無顯著相關性;自身免疫性疾病與衛生假說之間也無顯著相關性。

致謝

我們感謝布基納法索Bobo Dioulasso大學醫院(大學醫院)的研究人員為患者提供的自身免疫疾病和臨床數據。

作者的貢獻

構思和設計實驗:Y Sourabié， Y Traoré， F Fumoux, M S Ouédraogo, C Sirima

分別進行實驗:Y Sourabié， Y Traoré， M S Ouédraogo

分析數據:Y Sourabié和Y Traoré

貢獻試劑/材料/分析工具:Y Sourabié， Y Traoré和F Fumoux，

撰寫論文:Y Sourabié， Y Traoré， F Fumoux, M S Ouédraogo，和C Sirima

利益衝突聲明

我們聲明我們之間沒有利益衝突。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:Sourabié Y, Bazié WW, I Sangaré， Sirima C, Ouédraogo MS，等(2016)有限環境國家(布基納法索)的自身免疫疾病:早期診斷特異性生物標誌物的流行病學、技術和診斷性能。Autoimmun感染2(2):doi http://dx.doi.org/10.16966/2470-1025.112

版權:©2016 Sourabié Y，等。這是一篇開放獲取的文章，根據創作共用署名許可協議(Creative Commons Attribution License)發布，該協議允許在任何媒體上不受限製地使用、分發和複製，前提是注明原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2015年10月29日

接受日期:2016年3月26日

發表日期:2016年3月29日