摘要

蜱和蜱傳疾病對牲畜和野生動物造成嚴重的皮膚損傷，損害動物健康，並對加工和旅遊業產生副產品。在坦桑尼亞，用傳統的殺蟎劑處理蜱蟲在環境和經濟上都是負擔不起的。本研究評估了一種新型昆蟲病原真菌的有效性米曲黴(TZ/P/2018/000035)對3種蜱(蜱蟎:伊蟎科)的抑製作用;扇頭蜱屬appendiculatus，Hyalomma anatolicum和科學家吉瑪噴施1 × 10的劑量0.2 mL/tick⁶， 1 × 10⁷， 1 × 10⁸分生孢子/ mL答:oryzae對照(水和0.5% triton x-100)在35.5°C和85% RH的條件下，在阿魯沙納爾遜曼德拉非洲科學和技術研究所的實驗室條件下，在20.5°C和70% RH重複。結果表明，在1 × 10⁸分生孢子的/毫升,答:oryzae分別在6.25±0.75 d、7.55±0.59 d和11.9±0.65 d內造成高死亡率，分別為88.2%、72.5%和67.9%h . anatolicumr . appendiculatus對照組在飼養22.50±1.2、24.6±0.9和28±2.9 d後死亡率最高，分別為12.5%、11.0%和6.5%r . appendiculatus，h . anatolicum和答:芽分別在20.5℃和70% RH下。結果還表明，在1 × 10⁸分生孢子的/毫升答:oryzae產卵率降低答:芽平均產卵94.8±10.74隻/隻，對照組產卵354.15±42.65隻/隻。每隻雌性平均產蛋166.20±7.5個h . anatolicum處理答:oryzae1.0 × 10⁸與對照組相比，低溫下平均產蛋416.25±21.71個/隻。這項研究表明答:oryzae可在農業領域應用，保護動物免受蜱害，從而提高坦桑尼亞加工業動物產品的質量。

關鍵字

動物衛生;米曲黴;昆蟲病原真菌;皮革和皮膚損傷;蜱蟲疾病;坦桑尼亞

介紹

蜱類的發生和多樣性及其相關困境影響著非洲的畜牧業、野生動物和相關產業[1-3]。據報道，硬蜱是牛、山羊和綿羊的主要寄生蟲，在包括坦桑尼亞在內的非洲造成了巨大的經濟損失[4-6]。東非最常見和最嚴重的蜱蟲是麻眼蜱，扇頭蜱屬appendiculatus和Hyalomma anatolicum影響家養動物和野生動物[7,8]。它們通過直接寄生和傳播蜱傳疾病(tbd)影響動物健康，導致動物產品質量低下，包括牛奶、肉、皮和毛皮，因為病變阻礙了動物產品在工業上的利用[7,9-12]。硬蜱對皮膚的影響是明顯的，因為它們直接通過吸血刺穿皮膚，使皮膚受傷，使皮革不適合非洲的製革工業[12-14]。製革業剝奪和丟棄的皮革降低了皮革製品的製造能力和出口，影響了國家經濟[15-17]。蜱蟲對大型哺乳動物的影響不止於此，對小型反芻動物和包括鴕鳥在內的鳥類也會造成嚴重的皮膚損傷和損失[13,18- 21]。然而，據報道，在包括坦桑尼亞在內的非洲，糟糕的動物飼養和放牧方式，如自由放養的土地放牧，加劇了這一問題[22- 24]。硬的滴答聲，尤其是答:芽和r . appendiculatus是造成非洲皮膚和獸皮受損的主要原因[25,26]，而邊緣狐猴也會侵害鳥類皮膚。蜱蟲對動物和鳥類的總體影響導致獸皮和獸皮的降級，並最終被加工行業拒絕使用[16,15]。例如，據報道，在索馬裏和埃塞俄比亞，蜱蟲和蜱傳疾病(ttbd)對製革業產生了嚴重影響，導致皮革工業停滯不前[27-29]。

蜱蟲的管理一直完全基於化學品，通過將動物噴灑和浸泡在有機磷和有機氯等化學品中，據報道這些化學品產生了抗藥性，並對動物和環境產生了負麵影響[30-32]。為了有效地防治蜱蟲病，研究人員正在尋找新的殺蟎化合物。然而，據報道，使用植物藥和生物防治等替代方法可以改善動物皮膚的質量[18,31]。Kalala W等人的一項研究報告了沒藥swynnertoni在坦桑尼亞控製蜱蟲。其他研究報告了昆蟲病原真菌的影響，如球孢白僵菌，金龜子綠僵菌，水蛭菌和Lecanicillium lecanii對蜱蟲[35-40]答:oryzae據報道對駱駝蜱蟲卵[41]有效。然而，沒有一項研究報道米曲黴對三種致命蜱蟲的殺蟎活性，即;科學家吉瑪扇頭蜱屬appendiculatus和Hyalomma anatolicum(Korch, 1844)正是在這種情況下，新的隔離答:oryzae在坦桑尼亞對其對三種蜱蟲的功效進行了篩選。

材料與方法

蜱蟲的收集和鑒定

在阿魯沙地區Oldoinyo was村采集蜱蟲，經熱帶農藥研究所鑒定，其中蜱蟲3種，分別為蜱蟲和蜱蟲科學家吉瑪最大的雌蜱扇頭蜱屬appendiculatus和Hyalomma marginatum被確定。真菌分離;米曲黴(TZ/P/2018/000035)先前隔離用於管理Tuta absoluta是由Plant Biodefender Limited, Moshi-Tanzania

的製備答:oryzae濃度

基於[42]方法製備並選擇了工作濃度。將分離真菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)上進行傳代培養，以確定其生存能力。完全成熟5天後，將孢子輕輕從培養基中剝離，將孢子懸浮在每培養皿含有0.1% Triton X-100的10 mL無菌蒸餾水中，製成培養基懸浮液。在燒瓶中混合懸浮液後，用neubauer (Manfield, germany)血壓計測量原液的濃度，該血壓計為1.1 × 10⁹分生孢子/mL進一步稀釋至工作濃度為1.0 × 10⁶分生孢子/ mL, 1.0 × 10⁷分生孢子數/mL;0 × 10⁸分生孢子數/mL加入無菌蒸餾水。

的殺蟎活性答:oryzae對成年蜱蟲

蜱20隻，雌(10)隻，雄(10)隻，平均體重(2.62±0)。60 g)答:芽，(1.5±0.27g)r . appendiculatus(0.9±0.25g)h . anatolicum用0.5 ml含1 × 10⁷1 × 10⁸分生孢子的/毫升答:oryzae對照(含水和0.5% triton X-100)。將處理過的蜱置於塑料飯盒(21厘米× 12厘米× 7厘米)內，內襯濕紙巾。處理後的蜱蟲每天用塑料注射器喂一次新鮮血液。每隔48小時記錄一次蜱蟲死亡率，取死蜱置於潮濕培養皿中孵育，觀察真菌生長情況。這個實驗重複了四次。對雌蜱進行生物測定，記錄處理後的死亡率，觀察處理對雌蜱產卵的影響，直至死亡。

的影響答:oryzae在產卵

生物農藥的殺卵效果采用[41]法，稍作修改，以1 × 10的劑量暴露於完全充盈的雌蜱⁶， 1 × 10⁷分生孢子/mL, 1 × 10⁸對蜱噴灑懸浮液0.5 mL作為對照。產卵抑製率由每天產卵數除以被處理的雌蜱的數量得到平均產卵量。記錄蜱產蛋前後的體重，建立體重與產卵率的關係。

數據及統計分析

生物農藥對三種蜱蟲的有效性數據以成蟲死亡率、成蟲存活時間和產卵率的形式呈現，采用SAS 9.1版的Proc GLM程序(SAS Institute, Cary, NC, USA)進行分析，並檢驗方差的正態性和齊性。死亡率轉換為log-10，以獲得方差相等的正態分布數據集。成蟲存活率和產卵率采用方差分析(ANOVA)，成蟲死亡率采用Kruskal Wallis。成蟲死亡率的平均差異采用Bonferroni法，成蟲存活率和產卵率的平均差異采用Tukey 's Honest Significant difference (HSD)法，在5%的顯著性水平上。

結果

的時間效應答:oryzae關於蜱的種類

低溫(20.5°C和70% RH)和高溫(35.5°C和85% RH)條件下，處理對蜱存活天數的影響差異顯著(p=<0.0001)，且濃度均較高答:oryzae與對照組相比。答:oryzae處理後的蜱存活時間較短，存活時間縮短至6.25±0.75天h . anatolicum比在答:芽存活時間為11.9±0.65 dh . anatolicum和答:芽對照組存活時間分別為31.95±2.17天和41.35±1.66天(表1)。但處理對蜱類的影響不顯著(p=0.30)答:芽與尾尾圓尾螺相比存活時間更長h . anatolicum在寒冷和溫暖的條件下(表1)。

實驗條件			蜱蟲的物種
治療	溫度和相對濕度(%)	濃度(分生孢子/毫升)	科學家吉瑪	Hyalomma anatolicum	扇頭蜱屬appendiculutus
控製	20.5°C + 70	0.0	41.35±1.6a	31.95±2.17a	27.75±1.4a
	35.5°C + 85	0.0	28±2.9ab	24.6±0.9ab	22.50±1.2a
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 106	16±0.8b	11.0±0.5b	13.07±0.5b
	35.5°C + 85	1.0 × 106	12.9±1.4bc	9.5±0.3b	12.6±0.3b
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 107	12.3±1.5℃	9.05±0.4b	12.0±0.3b
	35.5°C + 85	1.0 × 107	12.6±0.5℃	8.3±0.6b	11.6±0.4b
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 108	11.1±0.9℃	7.9±0.3b	7.7±0.4℃
	35.5°C + 85	1.0 × 108	11.9±0.6c	7.5±0.5b	6.25±0.75℃
假定值			< 0.0001	< 0.0001	< 0.0001

表1:的影響答:oryzae暴露於處理條件後三種蜱的存活時間。不同字母表示差異顯著，相似字母表示處理間無差異(p<0.005)。

的影響答:oryzae充血雌蜱產卵率的研究

由於物種繁殖力的差異，以不同物種為單位評價了處理對雌蜱充血死亡率的影響。處理對充血雌蟲產卵率的影響r . appendiculatus溫、冷條件下產卵率差異顯著(p=<0.0001)，溫條件下產卵率較高。

答:芽處理答:oryzae1.0 × 10⁸低溫條件下，分生孢子/ml產蛋量為94.8±10.74個，而對照組產蛋量為354.15±42.65個/隻，平均為166.20±7.5個/隻h . anatolicum處理答:oryzae1.0 × 10⁸與對照組相比，低溫條件下產蛋數平均為416.25±21.71個/隻(表2)h . anatolicum在溫暖和寒冷條件下，產卵率差異顯著(p=<0.0001)答:oryzae在所有濃度下，處理過的蜱比對照組產卵少(表2)。

實驗條件			蜱蟲的物種
治療	溫度和相對濕度(%)	濃度(分生孢子/毫升)	科學家吉瑪	Hyalomma anatolicuma	扇頭蜱屬appendiculutus
控製	20.5°C + 70	0.0	354.15±42.6a	416.25±21.71a	322.95±44.25a
	35.5°C + 85	0.0	377.5±33.7a	428.55±11.90a	355.95±51.11a
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 106	306.9±1.40b	367.25±11.50b	301.25±15.20b
	35.5°C + 85	1.0 × 106	375±13.75b	359.50±9.39b	310.6±12.0 b
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 107	218.2±1.51bc	322.25±8.00bc	227.9±22.2c
	35.5°C + 85	1.0 × 107	公元前276.6±19.7	公元前212.31±7.28	254.6±21.96℃
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 108	94.8±10.74℃	166.20±7.52℃	105.7±13.67d
	35.5°C + 85	1.0 × 108	138.8±12.5bc	公元前198.5±6.20	110.16±11.46d
假定值			< 0.0001	< 0.0001	< 0.0001

表2:的影響答:oryzae處理條件下三種蜱的產卵率。不同字母表示差異顯著，相似字母表示處理間無差異(p<0.005)。

的影響答:oryzae關於雌性充血蜱的死亡率

由於種群發病率的差異，以不同物種為單位評價了處理對雌蜱充血死亡率的影響。在溫暖和寒冷條件下，處理對肥大雌鼠死亡率的影響分別顯著(p=<0.0001)答:oryzae1.0 × 10⁸與1.0 × 16分生孢子/ml和1.0 × 10分生孢子/ml較低劑量相比，分生孢子/ml在數天內死亡⁷分生孢子數/ml和對照(表3)h . anatolicum在溫暖和寒冷條件下(p=<0.0001)，處理對充血雌蟲的存活率也有顯著影響(p=<0.0001)，而在1.0 × 10條件下，處理對充血雌蟲的存活率也有顯著影響(p=<0.0001)⁸分生孢子/ml的誘導率分別為88.2%、72.5%和67.9%r . appendiculatus，h . anatolicum和答:芽分別在3至6天內與對照組相比，在溫暖條件下死亡率達到12.5%(表3)。

實驗條件			蜱蟲的物種
治療	溫度和相對濕度(%)	濃度(分生孢子/毫升)	科學家吉瑪	Hyalomma anatolicum	扇頭蜱屬appendiculutus
控製	20.5°C + 70	0.0	4.5%	10.5%	8.2%
	35.5°C + 85	0.0	6.0%	11.0%	12.5%
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 106	36.2%乙	41.0%乙	40.7%乙
	35.5°C + 85	1.0 × 106	39.9%乙	51.5%乙	53.2%乙
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 107	公元前48.5%	公元前57.0%	公元前58.5%
	35.5°C + 85	1.0 × 107	公元前53.6%	公元前57.3%	公元前64.6%
答:oryzae	20.5°C + 70	1.0 × 108	57.4% c	62.5% c	68.7% c
	35.5°C + 85	1.0 × 108	公元前67.9%	72.5%乙	公元前88.2%

表3:的影響答:oryzae不同處理條件下三種蜱蟲的死亡率。不同字母表示差異顯著，相似字母表示處理間無差異(p<0.005)。

毒性的答:oryzae在蜱蟲

從死蜱處理答:oryzae將死蜱置於30°C培養的潮濕培養皿中觀察並重新分離。3 ~ 10 d後，經米孢單胞菌處理的蜱體表皮上出現菌絲體並形成孢子覆蓋，表明蜱體對蜱的致病性。然而，在對照板中，沒有觀察到真菌孢子從死蜱中萌發(圖1)。

圖1:稻瘟病菌處理蜱(A和B)與對照(C)真菌孢子在蜱表皮上繁殖的比較答:芽(一),r . appendiculatus和h . anatolicum(B)而在A. gemma, R. appendiculatus和h . anatolicum(C)死亡後10天的對照組。

討論

動物是很好的食物來源，通過旅遊獲得收入，而副產品，特別是皮革和皮，是皮革加工業必不可少的原材料[43,44]。在製革工業中，動物皮革和皮膚上的蜱傷和潮紅導致了巨大的經濟損失和原材料的拒收。在坦桑尼亞，蜱蟲很厲害答:芽是常見於牛和野生動物引起的高發病率的立克次體，而r . appendiculatus發生於幾種寄生於附屬物和耳朵的寄主中[45,46]。盡管化學殺蟎劑的使用在坦桑尼亞很普遍，但在經濟上和環境上都很昂貴。本研究揭示了新分離菌株的開發潛力答:oryzae為了控製蜱蟲。本研究揭示了anatolicum和r . appendiculatus的人對真菌米曲黴更敏感答:芽產卵數量更多，存活時間更長。但在高濃度1.0 × 10⁸冷熱條件下分生孢子/ mL答:oryzae對三種蜱蟲有很高的活性，而r . appendiculatus更容易受到h . anatolicum和答:芽[47]。在所有處理條件下，gemma都不容易受到感染，這可能是由於在大多數東非國家，高食物儲藏量使其比其他蜱長時間更結實、更活躍，並且對殺蟎劑有抵抗力。

其他研究也揭示了昆蟲病原真菌控製幾種蜱蟲的潛力[38,48]。昆蟲病原真菌的殺蟎活性包括Scopulariopsis brevicaulis在Hyalomma anatolicum和科學家spp也有報道[48-50]。這項研究表明答:oryzae在所有蜱種中，隨著濃度的升高，傳染性均增強，但毒力較對照更強。其作用方式是通過角質層真菌滲透和感染Aspegillus其他真菌SPP與宿主蜱發生共生關係，並產生致病作用[51]。

其他研究報道了異色分枝杆菌和單獨使用反對致命的h . anatolicum在實驗室b[52]。然而，更多的研究表明，昆蟲病原真菌與其他化合物的組合增加了對昆蟲的毒力，其中單獨使用殺蟎劑的殺蟎活性增強。在目前的研究中，蜱的產卵率很低答:oryzae與產卵量高的對照相比，這可能是由於昆蟲病原真菌[51]引起的不育效應所致。盡管答:芽重量最大的:重量大於的r . appendiculatus和h . anatolicum在溫暖的實驗室條件下，由於高繁殖率，透明蠅產卵量高，其他研究也發現了類似的情況。經真菌處理的扁虱產卵率明顯低於對照，可能是由於真菌的毒力作用所致答:oryzae會在產卵前導致死亡盡管答:芽重量比h . anatolicum和尾尾沙螽，其繁殖力在用答:oryzae表明真菌的致病機製延長和抑製了蜱的產卵，最終導致其體重過重而死亡。答:oryzae對所有種類的蜱蟲均表現出不同濃度的死亡率，但對蜱蟲死亡答:芽被延遲了h . anatolicum和r . appendiculatus這可能是因為它們有堅硬的外骨骼，可以緩慢地吸收孢子。在大多數治療中，蜱的附屬物比其他部位表現出最高和早期的毒力答:oryzae首先攻擊昆蟲的附屬物(角質層)，以減緩運動，然後導致死亡。盡管長時間暴露於處理後的死亡率得到控製，但沒有從孵化的死蜱中重新分離到真菌菌絲體，表明與真菌處理的蜱不同，死亡是自然發生的。這表明，真菌生物農藥是自然防治外寄生蟲病蟲害的最佳方法，在牧區噴灑真菌生物農藥，可在農場或牧場同時防治植物和動物病蟲害。

結論

答:oryzae有效地控製了三種威脅坦桑尼亞畜牧業和皮革工業的蜱蟲。因此，本研究建議進一步開展田間試驗，在放牧環境中直接噴灑米曲黴在動物或土壤上，可能有助於管理蜱蟲和蚊子，控製健康動物的皮膚損傷，防止病媒骨病(VTBDs)的發生，從而提高坦桑尼亞製革業的皮革和皮膚質量。

宣言

作者聲明不存在競爭利益。

資金

本研究由德國學術促進會(DAAD)資助，資助號:57221138。

確認

作者感謝DAAD/RUFORUM地區/國家獎學金資助本研究。熱帶農藥研究所(TPRI)也因在蜱蟲鑒定方麵提供的幫助而受到表彰，Meshack Mollel先生和訪問地區的其他養牛人都因在Longido、Monduli和Arusha地區收集蜱蟲、獸皮和獸皮期間提供的幫助而受到表彰。

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條信息

文章類型:研究文章

引用:張建軍，張建軍，張建軍，等(2020)蜱類對一種昆蟲病原真菌的敏感性研究。動物科學研究4(2):dx.doi.org/10.16966/2576-6457.139

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出版的曆史:

收到日期:2020年5月8日

接受日期:2020年5月27日

發表日期:2020年6月6日