關鍵字

沙門氏菌;彎曲杆菌;垂直傳播;增殖火雞;孵化的蛋

主要受眾

研究人員,羊群監事,獸醫。

總結

沙門氏菌和彎曲杆菌經常關注的病原體與家禽產品。生產管理幹預增殖羊群和他們的後代有可能減少這些細菌的傳播。然而,這些生物通過直接垂直傳播的證據肥沃的土雞蛋的後代並沒有被證實。本研究的目的是確定彎曲杆菌或沙門氏菌傳播通過人工接種後雞蛋和後代的火雞增殖母雞與精液包含標記的菌株接種雞,母雞比未經變質處理的控製。收集雞蛋蛋殼和蛋黃檢查標記菌株的存在沙門氏菌和彎曲杆菌。蛋兩組的母雞也為孵化,孵化。在天的孵化,孵化的數量和未孵化的蛋被記錄。拭子從孵化器托盤包含蛋殼和糞便殘留,和紙墊在兩組雛雞糞便排泄物,從接種和控製母雞,也進行了分析。生殖係統(RT)段,包括卵巢和卵泡,和上層的束地峽(從漏鬥管),分析了母雞從增殖羊群的65周。精子和睾丸從湯姆斯也進行了分析。沒有證據表明得到的垂直傳播標記菌株通過人工授精。然而,沙門氏菌和彎曲杆菌被發現在RT湯姆斯的母雞和精液,指示一個潛在的傳播途徑這些食源性病原體的後代。

描述的問題

沙門氏菌和彎曲杆菌全球細菌性胃腸炎的主要原因,經常都是家禽的腸道共生的殖民者。他們從鳥類生殖係統也被隔離,因此,可能的汙染源孵化雞蛋和隨後傳播到後代[1 - 5]。此外,沙門氏菌和彎曲杆菌種蟲害在精液可能會導致可能的傳輸通過受精母雞的生殖係統(4、6、7)。盡管雞蛋的殼膜內外提供抵禦細菌滲透,快速的滲透沙門氏菌通過孔隙或裂縫殼蛋已經證明[8]。衛生孵化雞蛋不會提供任何保護胚胎發育過程中如果細菌有蛋殼膜和滲透進內部內容[12]。此外,雞蛋孵化溫度可以提高的乘法沙門氏菌。雖然沙門氏菌沒有找到在高頻雞蛋蛋黃自然汙染雞蛋,蛋黃的營養環境有利於細菌生長[9]。的垂直傳播彎曲杆菌通過卵巢或輸卵管,雞蛋,仍然是有爭議的。盡管垂直傳播被認為是一個潛在的汙染源的後代一些作者(4、13、14),據報道被他人的傳播彎曲杆菌通過雞蛋是一種罕見的和不可能事件[15 - 17]。然而,這些研究主要是用雞和有一個缺乏信息關於這些病原體的傳播機製在土耳其孵化雞蛋。目前的研究是一個研究項目的一部分,土耳其育種群從65天的孵化周監控生活的傳播途徑和評價沙門氏菌和彎曲杆菌[18]。目前的研究進行增殖火雞的生殖周期期間,周32到65。本研究的目的是評估潛在的垂直傳播的病原體雞蛋和後代,並評估的任何不利影響這些細菌在蛋生育和孵化率的存在。

材料和方法

人工授精和雞蛋的分析

萘啶耐酸應變沙門氏菌血清型腸炎(美國腸炎)和一個gentamicin-resistant應變彎曲杆菌杆菌[19]被用來接種80增殖母雞在39周通過精液人工授精。鳥處理和管理過程都是通過NC州立大學製度動物保健和使用委員會。這些接種雞(IH)口頭填喂法相同的標記菌株在研究的開始,在第十天,第12周所描述的克雷斯波,et al . [18]。0.5毫升每個細菌培養的整除,美國腸炎(約。10⁸cfu /毫升)c .杆菌(約。10⁷cfu /毫升)被加入2毫升的精液池從幾個接種湯姆斯(它)。這是口頭與標記菌株接種開始這項研究的美國沙門氏菌感染和c .空腸[18]。控製群20母雞,位於相同的土耳其房子的對麵,也是受精使用徵精液從控製湯姆斯(CT)與明尼蘇達州稀釋土耳其種植者協會(MTGA)精液extender含有慶大黴素[20],添加相同的比率為1:2 (v / v)為接種精液。受精前IH包含標記菌株與精液沙門氏菌和彎曲杆菌,兩組的母雞受精(35周)的兩倍。IH的共有四次人工授精使用精液包含標記菌株,在39周,40歲,42和43。受精進行授精苯乙烯管的長度10.3厘米和0.208厘米的內部直徑[21],充滿了大約0.035毫升的精液。使用細菌開始受精前,六個未洗的雞蛋從IH CH和20未洗的雞蛋進行了分析。雞蛋每天收集,由筆數量和保存在一個冷卻器(12.8℃),直到分析。分析了雞蛋從CH組六個雞蛋(未洗的)。五套未洗的雞蛋從IH進行了分析。每組20雞蛋的大小除了一套10由於不可用的雞蛋(表1)。此外,三套洗雞蛋IH的測試。其中一個組有20個雞蛋和兩組16個雞蛋由於不可用雞蛋(表1)。共24個雞蛋從IH CH - 142雞蛋進行了分析(90未洗的雞蛋和52個雞蛋收集後消毒後季銨產品製造商的劑量指令[22])(表1)。

母雞群	Pre-insemination與細菌	Post-insemination與細菌					總沙門氏菌——積極的蛋殼(%)
	組1	組1	組2	集3	組4	集合5	Post-insemination
控製(未洗的)	6	6	6	6 (2)*	0	6	2/24 (8)
受精(去皮)	20.	20.	20 (2)*	20 (3)*	10	20.	5/90 (6)
受精(洗)	0	0	0	16	20.	16	0/52 (0)

表1:卵子受精之前和之後分析包含標記菌株IH的精液沙門氏菌和彎曲杆菌。
*括號中的值顯示數量的雞蛋(蛋殼)陽性標記沙門氏菌。

Musgrove殼粉碎方法描述,et al。[23]是用於細菌恢複從蛋殼和蛋黃[23]。雞蛋破裂邊緣的無菌燒杯,蛋黃蛋清被丟棄,彙集在一個無菌燒杯。蛋殼的內部是用20毫升的磷酸鹽溶液清洗(PBS)消除殘餘蛋白[24]。蛋殼膜和堅持了一分鍾使用無菌玻璃棒在無菌50毫升離心管包含20毫升的PBS。樣品被分成兩個使10毫升進行調查的病原體。緩衝2%蛋白腖水(BPW)[25]添加預濃縮的沙門氏菌和博爾頓2 x肉湯(BB)(補充和湖的馬血)的選擇性富集[25]彎曲杆菌。碎殼和膜也分布在兩個使。彙集蛋黃最初與PBS稀釋(1:1 v / v),在兩個使均質和分裂。BPW樣本在37℃培養24小時,和BB樣本在42℃培養24 - 48 h microaerobic條件下(5%啊₂,10%的公司₂,85% N),使用zip包充滿氣體的混合物[26]。亮綠磺胺類瓊脂板(BGS)[27]補充200 ppm的萘啶酸[24]被用於恢複沙門氏菌和修改頭孢呱酮木炭脫氧膽酸鹽瓊脂(mCCDA)[25]板塊200 ppm的選擇性檢測慶大黴素彎曲杆菌。盤子在37℃耗氧孵化24 h和42℃48 h microaerobic條件下,分別。假定的標誌沙門氏菌殖民地被血清學證實沙門氏菌保利O [28]。

艙口肥沃的雞蛋

共有867個雞蛋、675年從IH群和192 CH群(組1),設置在兩個不同的Jamesway孵化器[29]為37.5℃,濕度約50%。八天後,第二個艙口鑲有450顆雞蛋,351年從IH - 99 CH(組2)。雞蛋進行轉移在24天,他們仍然在孵卵器,直到孵化28天。為孵化組,兩種不同Jamesway孵卵器也使用,都設定在36.9℃,濕度約72%。孵化器托盤包含蛋殼殘留物和糞便在艙口,擦洗墊和糞便排泄物也收集分析沙門氏菌和彎曲杆菌。蛋未孵化,人死的日子,估計基於胚胎發展的程度。裂縫、腐朽和不育雞蛋也刪除和記錄。

分析精子和睾丸的湯姆斯和母雞生殖係統

兩組的精液收集湯姆斯在32周(采樣兩種不同天)和33周。混合精液從8 CT,五、六,分別收集了腹部按摩和分析細菌的存在。三個樣本分析CT和六個樣品。枚舉的樣品每組(CT)是在一次執行。枚舉,0.1毫升的精液加上0.9毫升的緩衝蛋白腖水(BPW)和均質、連續mCCDA上鍍(0.1毫升)稀釋。檢出限是100 cfu /毫升。為彎曲杆菌檢測,0.1毫升整除的精液直接傳播鍍到mCCDA和孵化48 h在42℃microaerobic條件。另一個0.1毫升加入6毫升的BB(補充劑和湖馬血)進行濃縮。孵化後microaerobic條件42℃48 h,樣本mCCDA上飛跑。為沙門氏菌檢測,1毫升的精液被添加進6毫升BPW濃縮。BPW樣本是在37℃培養24小時後跟一個選擇性富集步驟中,有0.5毫升之前豐富的解決方案添加到連四硫酸鹽(TT)肉湯基礎和0.1毫升到Rappaport-Vassiliadis (RV)湯[30]。管渦和孵化在42℃後24 h。孵化一個鉑環量從每個管的英國地質調查局瓊脂上飛跑。假定沙門氏菌殖民地被刺傷,條紋三糖鐵瓊脂和賴氨酸鐵瓊脂偏。偏在37℃培養24小時。隔離為典型沙門氏菌反應是飛跑到營養瓊脂(NA)淨化板[31],和血清學證實了沙門氏菌保利O[28]和保利H抗血清[25]。此外,飛跑到英國地質調查局補充了證實沙門氏菌分離株與200 ppm的萘啶酸標記菌株的確認。

鳥類定期安樂死,屍體表麵噴灑70%乙醇之前打開腹腔。指導方針批準的機構使用和動物保健委員會的協議在北卡羅萊納州立大學緊隨其後。睾丸是無菌移除在33周和38和分析細菌的存在。睾丸是用橡膠錘重和浸漬和BB(添加了補充和湖的馬血)或BPW被添加的三倍重量比體積每個樣品的濃縮彎曲杆菌和沙門氏菌,分別。額外的步驟進行精液分析描述的一樣。增殖母雞的生殖係統收集65周和卵泡和呼吸道的上段(漏鬥地峽和萬能)進行了分析。每個樣本被一分為二的分析每個病原體。樣本處理作為睾丸的描述。

後代的監控

496天的孵化,雛雞接種雞(IP)和126年雛雞從控製母雞(CP),分別放置在24日和7筆。筆是位於兩端的長出來的房子。每周兩組糞便樣本進行了分析,以確定細菌的存在。彙集糞便排泄物從不同的筆從每組雛雞直接飛跑到mCCDA檢測彎曲杆菌。孵化條件前麵是一樣的。為沙門氏菌識別、糞便被稀釋在BPW(1:10)和後續步驟如前一節所述。

在星期1和5、20雛雞被安樂死。器官(脾、肝和膽囊)和胃腸道被進行分析。由於體積小的雛雞,器官和胃腸道彙集為一個複合的內髒,和作為一個樣本。樣本處理為睾丸所描述的一樣。飼料、木屑和擬步甲幼蟲在後代的房子也收集分析(表2)。

取樣日期	樣本(數量)	沙門氏菌	彎曲杆菌
Feb13(第一周)	飼料(25克)、木屑(25克),擬步甲幼蟲(25 - 30)	沒有檢測到	沒有檢測到
Mar13(星期5)	擬步甲幼蟲IP (25 - 30)	沒有檢測到	沒有檢測到
Mar13(星期5)	擬步甲幼蟲CP (25 - 30)	積極的	沒有檢測到

表2:向量和其他環境樣品分析。
知識產權:雛雞接種雞;從控製母雞CP:雛雞。

彎曲杆菌和沙門氏菌保存

彎曲杆菌殖民地文化在MuellerHinton瓊脂(尼古拉斯)[25]淨化、營養瓊脂用於沙門氏菌。隔離在-80℃保存cryovials包含腦心浸液肉湯(BHI) 20%的甘油。

彎曲杆菌和沙門氏菌子類型化

種彎曲杆菌隔離是由多路複用使用引物聚合酶鏈反應(PCR)放大了c .空腸具體的大有希望的人基因(hipF 5 ' ATG ATG GCT TCT TCG手槍AG-3”和hipR 5“GCT有條件現金援助ATG CTT ACA GC-3行動”),和c .杆菌ceuE基因(ceuF 5 ' atg AAA AAA TCT TTA GTT TTT GCA-3”和ceuR 5的手槍TTT ATT ATT TGT AGC AGC三大”)(尺碼)。沙門氏菌隔離被聰明的血清型,複合PCR和毛細管電泳分析[35]。彎曲杆菌隔離分析pulsed-field凝膠電泳(但是脈衝場凝膠電泳的出現)DNA限製後SmaI [36]。遺傳相似度的基礎上,分析了但是脈衝場凝膠電泳的出現條帶模式使用BioNumerics [37]。骰子係數和減重對集團與算術平均法(UPGMA),優化和位置公差分別占1.5%和1.7%。

彎曲杆菌抗生素耐藥性決定

彎曲杆菌隔離電阻的測試的抗生素(四環素、鏈黴素、紅黴素、卡那黴素、萘啶酸、環丙沙星、慶大黴素)根據存在的特定數量的增長表明抗生素。抗生素和濃度測試包括卡那黴素(25µg /毫升)、萘啶酸(20µg /毫升)、環丙沙星(4µg /毫升)、慶大黴素(200µg /毫升),四個都得到費舍爾[24],和四環素(16µg /毫升),紅黴素(10µg /毫升)和鏈黴素(15µg /毫升)從σ[38]。所有隔離同時也發現在尼古拉斯,確保可行性。寫明ATCC 33560 c .空腸(美式文化集合;敏感,所有測試抗生素)是包含每一次質量控製壓力。

統計分析

雙麵的確切概率法被用來測試蛋治療之間的獨立性。費雪的測試是使用人民幣11執行軟件[39]。在孵化實驗數據集進行了分析使用的漠視,SAS程序[40]。意義的數據被設定為P≤0.05在所有情況下。

結果與討論

人工授精和雞蛋的分析

沙門氏菌和彎曲杆菌沒有檢測到第一組卵受精的精子使用接種前分析。母雞受精的卵細胞分析包含標記菌株的精液沙門氏菌(美國腸炎NAL)和彎曲杆菌(c .杆菌門將),是積極的美國腸炎在五個部分(6%)的90未洗的蛋殼分析;反過來,美國腸炎最終沒有找到洗雞蛋蛋殼的CH,中(表1)。美國腸炎(通過精液標記菌株接種到IH)部分被隔離在兩個(8%)的24蛋殼分析(表1),標記的隔離沙門氏菌壓力在控製雞蛋可能是因為交叉汙染雞蛋收集或處理因為CH和IH被放置在相同的土耳其的房子,盡管在不同的地區。雞蛋每天收集和放置在塑料架在一個冷卻器,將雞蛋從CH和IH。雞蛋被從農場運送至實驗室進行分析。先前發表的研究結果表明,橫向傳播通過齧齒動物或昆蟲是可能的[19]。彎曲杆菌測試沒有檢測到任何的雞蛋,蛋殼或蛋黃。雞蛋在一個冷卻器在12.8℃可能產生負麵影響彎曲杆菌生存在蛋殼,導致無法檢測的文化[16]。此外,美國腸炎蛋黃的部分沒有檢測到任何分析。

基於雙邊確切概率法,沒有明顯差異(P≤0.05)之間的雞蛋從IH或CH。分析了少量的雞蛋是一個研究的局限,導致低統計力量。因此,考慮到傳播的低頻沙門氏菌通過雞蛋沙門氏菌陽性的母雞(9、12),雞蛋和蛋的數量在將來的研究中應該增加測試內容。此外,這一事實沙門氏菌沒有檢測到任何洗雞蛋,表明積極影響清洗和消毒的雞蛋在減少的潛力沙門氏菌通過蛋殼。

孵化實驗

雞蛋從CH孵化72.5%從第一艙口(n = 190)、和75%在第二個艙口(n = 98)。雞蛋從IH孵化率為78.1%第一組(n = 675), 80.7%,第二組(n = 351)(表3)。在生育被發現顯著差異治療(控製、接種)(p = 0.0023),高生育率IH的雞蛋中,但不是在試驗(組1、組2)(表3)。雞蛋用於實驗的數量低於通常使用在商業環境下,可能影響結果。此外,每個群母雞使用不同數量的雞蛋可能會有效果。這種限製應該在未來解決實驗中,通過設置更多的雞蛋更好地代表商業條件,以及類似的雞蛋從兩組雞的數量(CH, IH)。孵化率率明顯不同治療方法(控製/接種)(p = 0.0056)和IH的卵孵化率較高。然而,孵化率差異群體可能是由於溫度和濕度的微小差異的孵化器。兩組之間沒有顯著差異IH的雞蛋。沙門氏菌和彎曲杆菌沒有檢測到孵化器棉簽蛋殼殘留物和糞便,或在紙上墊在天的孵化與糞便排泄物分析兩組(CH和IH)。

集	家長群	總蛋	不育的雞蛋(%)	雛雞孵化	%孵化 (總雞蛋/肥沃的雞蛋)	死亡率的第一個7 天的孵化	%內部脈衝(26天)	%外部脈衝 (27天)
1	控製	190年	19日(10%)	124年	65.3/72.5一個	0.09	1.58	9.47
1	接種過的	675年	40 (5.9)	496年	73.5/78.1b	0.08	0.89	8.74
2	控製	98年	14 (14.3)	63年	64.3/75.0一個	0.07	0	12.24
2	接種過的	351年	24 (6.8)	264年	75.2/80.7b	0.09	0	5.41

表3:孵化實驗。雛雞孵化,早期死亡率和pip值。
沒有一個共同的上標字母a - b值明顯不同(P < 0.05),分析了雙麵的確切概率法。

精液、睾丸和母雞生殖係統

兩個物種的彎曲杆菌,c .空腸和c .杆菌精液被確定,但沒有隔離的口頭最初標記菌株接種到湯姆斯(c .空腸TSKQ)或母雞(c .杆菌門將)[18]。所有樣品分析(CT = 3;= 6),是積極的彎曲杆菌。因為樣本直接飛跑到mCCDA,也豐富,多個殖民地每個樣本進行了分析。總共有八個隔離恢複CT,和11個隔離。從19隔離測試,11 (58%)C.jejuni耐四環素、5 (26%)c杆菌抗卡那黴素,和其餘三個(16%)被pan-sensitivec .空腸。

隔離的分布如圖1所示。四個彎曲杆菌隔離從CT (50%), 7 (64%)c .空腸對四環素耐藥。三個(38%)的隔離從CT和兩個(18%)c .杆菌抗卡那黴素。最後,一個從CT(13%)隔離和兩個從pan-sensitive。(18%c .空腸(圖1)。兩個精液樣本表示的枚舉彎曲杆菌6.0×10的水平²cfu /毫升和9.0×10²分別在CT cfu /毫升。兩個kanamycin-resistantc .杆菌和tetracycline-resistantc .空腸以前在糞便樣本中發現兩組湯姆斯(CT,);然而,pan-sensitivec .空腸不是在糞便中發現湯姆斯。此外,美國Agona被確認的精液樣本CT。美國Agona也從糞便樣本分離,空腸和盲腸的湯姆斯在同一項目[18]。然而,無論是彎曲杆菌也不沙門氏菌在睾丸中發現。這個,加上缺乏一種無菌采精技術建議的可能性,精液通過接觸受汙染的泄殖腔。

圖1:的百分比彎曲杆菌物種和抗生素耐藥性資料分離精液樣本。T -四環素;K-kanamycin;P-pansensitive。頻率計算基於總積極隔離每組(CT = 8,它= 11)。CT-Control湯姆斯;IT-Inoculated湯姆斯。

生殖係統的分析樣本飼養員母雞了美國腸炎萘啶耐酸(標記菌株)和pan-sensitivec .空腸上段的生殖係統(漏鬥地峽和萬能)。然而,無論是的細菌檢測卵巢和卵泡。從每個小組分析了20隻母雞,pansensitivec .空腸中檢測出的上段生殖係統在兩個IH和CH沙門氏菌是孤立的三上段嬰幼兒血管瘤,但不是在CH發現。所有三個嗎沙門氏菌隔離是標記菌株(美國腸炎部分^R)。

後代的監控

飼料和木屑分析都是陰性細菌(表2)。在第1周(2013年2月),美國沙門氏菌感染(萘啶酸敏感)隔絕在CP糞便樣本,但是它沒有檢測到IP直到10周(2013年4月)(表4)。此外,美國沙門氏菌感染(萘啶酸敏感)與擬步甲幼蟲(Tenebrionidae家庭)收集鋼筆外CP在第5周(2013年3月)(表2)。盡管存在的沙門氏菌在環境和向量的存在潛在的水平傳播,沙門氏菌沒有檢測到IP直到10周。

	從控製雛雞群(CP)		從接種雛雞群(IP)
周	沙門氏菌1	彎曲杆菌2	沙門氏菌1	彎曲杆菌2
1	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
2	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
3	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
5	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
6	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
7	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
8	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
9	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
10	ND3	- - - - - -	+	- - - - - -
11	+	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -
12	+	- - - - - -	- - - - - -	+
13	ND	+	ND	+
15	- - - - - -	+	- - - - - -	+

表4:沙門氏菌和彎曲杆菌糞便樣本中發現兩組雛雞(後代)(CP和IP)。
¹沙門氏菌檢測不共享相同的抗生素耐藥性形象研究中使用的標記菌株接種飼養員的父母。
²彎曲杆菌檢測不共享相同的抗生素耐藥性形象研究中使用的標記菌株接種飼養員的父母。
³ND -不確定。

彎曲杆菌才發現第12周(2013年4月最後一周)的IP,和13周(2013年5月的第一周)在CP(表4)。彎曲杆菌隔離是pan-sensitivec .空腸。這些發現表明,一個更快速的傳播彎曲杆菌,類似的模式也觀察到在飼養員的父母監控這些雛雞(數據沒有顯示)。在以前的研究報道,羊群白天殖民7周3 100% [41-43]。殖民的c .空腸在星期3到4被認為是與母體抗體的消失有關彎曲杆菌在肉仔雞[44]。然而,變化在殖民時代,甚至缺乏殖民在土耳其的羊群也被報道(42歲,45歲,46)。

在監控的糞便樣本增殖的父母,天然菌株彎曲杆菌被發現在4周(4月的第二周)[18]。在這兩種情況下,其他群出現在房子前的位置雛雞(父育種者和後代)。父飼養者的房子是空的大約三個月前他們的位置。家的後代,是放在日艙口是空約4.5個月前雛雞的位置。清潔和衛生在參眾兩院是相似的;除了在後代的房子之前沒有噴灑消毒劑將雛雞。另一個區別可能是時間和溫度。父母飼養者被安置在眾議院在2012年下半年3(3月20日),而後代被放置在2013年2月(2月5日)。育種者和後代,天然菌株彎曲杆菌4月份第一次被檢測到。環境條件如溫度、濕度和垃圾水分沒有測量項目。這些參數可能會影響環境的傳播彎曲杆菌和沙門氏菌在後續研究中,應該考慮。之前報道的飼養員父母[18],沙門氏菌早期發現在CP(第1周),但直到9周後,才在IP發現暗示傳播的速度較慢。另一方麵,彎曲杆菌後來發現在糞便樣本(一周12和13)。它第一次被發現在第12周的IP,然後在接下來的抽樣檢測對照組(CP)在13周,展示在房子更快的傳播能力。

在第八天,隻有一個10髒器CP是積極的複合材料沙門氏菌然而,(表5)。沙門氏菌不確定在IP。彎曲杆菌沒有檢測到內髒的團體(CP、IP)。在36天,六10 CP內髒複合材料是積極的沙門氏菌,顯示鳥類的數量增加殖民在同一地區的房子,即使他們在不同的筆。所有樣本IP都是消極的(表5)。彎曲杆菌沒有檢測到任何組。所有的沙門氏菌隔離被認為是美國沙門氏菌感染(萘啶酸敏感)多重PCR和毛細管電泳分析[35]。與彎曲杆菌的標記沙門氏菌菌株接種通過精液在糞便樣本不是孤立或雛雞腸道樣本。然而,相對較少的鳥類用於這項研究可能影響檢測很少發生的事件的能力。

	父母控製羊群		接種家長群
雛雞的年齡	彎曲杆菌	沙門氏菌	彎曲杆菌	沙門氏菌
8天	0/10	1/101	0/10	0/10
36天	0/10	6/101	0/10	0/10

表5:彎曲杆菌和沙門氏菌從內髒分離複合材料的雛雞在8天36。(積極的樣本數量/鳥類數量分析)。

的比較彎曲杆菌從後代糞便分離,母雞生殖係統,湯姆斯的精液

但是脈衝場凝膠電泳的出現確定多個pan-sensitive執行c .空腸隔離是代表相同的壓力。三個pan-sensitivec .空腸上段的隔離飼養母雞的生殖係統,pan-sensitivec .空腸隔離從雛雞,糞便樣本和兩個pan-sensitivec .空腸雄隔離從精液的CT和它的測試。但是脈衝場凝膠電泳的出現配置文件的兩個隔離IH生殖係統(IH6 RT和IH7 RT)是難區別的(圖2)。此外,在同一個樂隊模式c .空腸生殖係統的隔離CH (CH4 RT)和糞便樣本的CP (CP04)和IP (IP1 02)(圖2),另一組集群c .空腸pan-sensitive隔絕的糞便樣本CP03 (CP)和IP (IP05, IP06和IP1 01),顯示一個樂隊模式類似於生殖係統的一個觀察CH (CH4 RT)(圖2)。分離精液的增殖湯姆斯不同於其他pan-sensitive空腸c株隔絕增殖的母雞(CH和IH)和後代(CP和IP)(圖2)。一個假設觀察不同環境來源的可能性或不同時間的入口羊群。增殖雄位於整個研究中,同樣的房子和精液樣本收集32和33周。然而,母雞被轉移到一個不同的房子照明計劃在受精之前,他們仍在這所房子裏12周之前回到最初的增殖,接觸新環境,生殖係統的收集和分析65年在周執行。此外,後代最初放置在一個不同的長出來的房子,直到14周,然後搬到飼養員房子直到第16周。自彎曲杆菌糞便樣本中檢測到幾個月後老雛雞(分別在IP和CP一周12和13),這可能表明,殖民的第二代後代可能是由於水平,而不是垂直傳播。另一個觀察是彎曲杆菌生殖係統的隔離CH (CHC4 RT)和IH (IHC6 RT和IHC7 RT)有一個無特征的樂隊與隔離模式從盲腸CH (CHC4盲腸)和(IHC6盲腸),分別(圖3),這可能是可能由於逆行汙染從泄殖腔進入生殖道。此外,三種不同的樂隊模式(A, B和C)為這些pan-sensitive觀察c .空腸隔離(圖3),表明在這些多樣性c .空腸隔離,表明不同的環境的起源或次入口的羊群。

圖2:潘SmaI但是脈衝場凝膠電泳的出現的敏感c .空腸從生殖係統隔離(RT)的母雞,精液的toms (CT),和糞便樣本的兩組子代(CP和IP)。CH-control母雞;IH-inoculated母雞;RT-reproductive束;IT-inoculated湯姆斯;CT-control湯姆斯;從控製母雞CP-poults;IP-poults接種雞。字母和數字指示筆數和/或隔離數。火雞的年齡目前抽樣的括號。

圖3:SmaI但是脈衝場凝膠電泳的出現pan-sensitive的概要文件c .空腸隔離的上段生殖係統(RT)和盲腸的母雞。CH-control母雞;IH-inoculated母雞;RT-reproductive束。字母和數字指示筆數。A、B和C,表明不同的樂隊模式。

基於這項研究的結果,作者為未來項目提供見解,家禽可以幫助研究人員和家禽行業努力更好地理解的不確定性垂直傳播彎曲杆菌,減少或消除沙門氏菌來自土耳其的孵化雞蛋和增殖的羊群。限製在這個研究是小數量的樣品分析(雞蛋、生殖係統組織)。如果發生垂直傳播的頻率很低,大量的動物,組織等需要檢測病原體的後代。同樣,如果發生的頻率極低,它不可能永遠展示這等研究。如果是這種情況,更敏感的方法如qPCR或sequencing-based方法可以使用。

標記菌株用於研究的健康還會影響生殖組織的殖民的結果。在先前描述了監控的糞便和腸道樣本[18],天然菌株似乎比標記菌株,在羊群持續更長時間。一般來說,這將是重要的複製這些實驗試驗和比較結果。

結論和應用程序

• 的存在沙門氏菌和彎曲杆菌在精液人工授精的增殖蛋母雞沒有不利影響生育和孵化率的實驗。
• 基於這項研究的結果,清洗和消毒孵化雞蛋可能會降低的水平傳播沙門氏菌通過蛋殼。
• 人工授精與精液汙染的母雞沙門氏菌或彎曲杆菌不能證明垂直傳播的細菌雞蛋或雛雞。需要進一步的研究來調查這個潛在的傳播途徑。
• 更好的控製環境(天然)應該考慮的菌株。

承認

本研究支持部分由北卡羅來納州農業基金會和美國家禽和蛋協會(USPEA)。特別感謝黛比支持克裏斯蒂娜珊頓,邁克·曼農場工作人員,實驗室成員援助和技術支持。升值也擴展到喬納森·弗萊和拉裏Hiott (USDA-ARS-RRC,雅典,GA)的血清型沙門氏菌隔離。

引用

1. Buhr RJ,考克斯NA,斯特恩新澤西,Musgrove MT,威爾遜傑,et al。(2002)的複蘇彎曲杆菌從段肉用雞增殖母雞的生殖係統。禽流感說46:919 - 924。(Ref。]
2. 考克斯NA,斯特恩新澤西,Hiett KL, Berang我(2002)的新來源的識別彎曲杆菌在家禽汙染:從增殖母雞肉仔雞傳播。禽流感說46:535 - 541。(Ref。]
3. 紐厄爾DG, Fearnley C(2003)的來源彎曲杆菌殖民的肉雞。:環境Microbiol 69: 4343 - 4351。(Ref。]
4. 科爾K,多諾霍,時候PJ,多諾霍DJ(2004)隔離和流行彎曲杆菌生殖道和精液的商業火雞。禽流感說48:625 - 630。(Ref。]
5. 考克斯NA,理查森LJ,布爾RJ Fedorka克雷PJ (2009)彎曲杆菌物種發生內部器官和組織的商業籠來亨雞蛋雞。幼禽Sci 88: 2449 - 2456。(Ref。]
6. 考克斯NA,斯特恩新澤西,威爾遜JL Musgrove MT,布爾RJ, et al .(2002)隔離彎曲杆菌從商業肉用雞增殖公雞精液樣品種蟲害。禽流感說46:717 - 720。(Ref。]
7. 多諾霍,時候PJ,科爾K, Loskutoff NM,多諾霍DJ(2004)檢測彎曲杆菌或沙門氏菌在土耳其精液和家禽精液填充劑的能力降低濃度。幼禽Sci 83: 1728 - 1733。(Ref。]
8. 普瑞法助教,Anantheswaran RC, VM, Knabev SJ(1995)的滲透沙門氏菌腸炎成雞蛋受到快速冷卻。J食品Prot 58: 473 - 477。(Ref。]
9. 恐嚇RK,霍爾特PS, Murase T(2005)的滲透沙門氏菌腸炎和沙門氏菌海德堡到蛋黃一個體外汙染模型。幼禽Sci 84: 621 - 625。(Ref。]
10. 威廉姆斯我迪拉德LH,霍爾(1968)的滲透模式沙門氏菌沙門氏菌感染通過雞蛋的外部結構。禽流感說12:445 - 466。(Ref。]
11. J·德·巴克Immerseel F範,Haesebrouck F, Ducatelle R(2004)殖民雞的生殖係統和蛋汙染沙門氏菌。J: Microbiol 97: 233 - 245。(Ref。]
12. 考克斯NA, Berrang我Cason JA (2000)沙門氏菌雞蛋殼的滲透和擴散肉用雞孵化雞蛋。幼禽Sci 79: 1571 - 1574。(Ref。]
13. Hiett KL、考克斯NA Buhr RJ,斯特恩新澤西(2002)基因型分析彎曲杆菌隔絕的生殖道不同的段肉用雞飼養員母雞。咕咕叫Microbiol 45: 400 - 404。(Ref。]
14. 考克斯NA,理查森LJ毛雷爾JJ, Berrang我,Fedorka克雷PJ, et al .(2012)水平和垂直傳播的證據彎曲杆菌通過從母雞到她的後代。J食品防75:1896 - 1902。(Ref。]
15. 夏克爾年代,李,索雷爾TC (1986)空腸彎曲杆菌在肉雞:垂直傳播的作用。96年J Hyg (Lond): 153 - 159。(Ref。]
16. 領域啊,張Kobalka P, Q(2003)檢測和生存彎曲杆菌在雞蛋裏。J: Microbiol 95: 1070 - 1079。(Ref。]
17. Callicott KA, Friethriksdottir V, Reiersen J R,洛曼Bisaillon JR, et al。(2006)的垂直傳播缺乏證據彎曲杆菌種蟲害的雞。:環境Microbiol 72: 5794 - 5798。(Ref。]
18. 克雷斯波醫學博士Kathariou年代,格蘭姆斯傑,考克斯NA,布爾RJ, et al .(2016)的傳播途徑沙門氏菌和彎曲杆菌在增殖火雞。J:幼禽Res 25日:591 - 609。(Ref。]
19. 考克斯NA,理查森LJ, Berrang我Fedorka克雷RJ,布爾RJ (2009)彎曲杆菌杆菌自然耐高濃度慶大黴素的家禽中標記菌株的研究。J食品防72:1288 - 1292。(Ref。]
20. 明尼蘇達州土耳其種植者協會,聖保羅,明尼蘇達州,美國。(Ref。]
21. 美國威斯康辛州大陸塑料Corp . Delavan。(Ref。]
22. π皮疹20^®保護國際Zepher灣,內華達州,美國。
23. Musgrove MT,瓊斯博士,Northcutt JK,哈裏森媽,考克斯NA, et al。(2005)的複蘇沙門氏菌從商業帶殼的雞蛋殼洗淨和殼牌粉碎方法。幼禽Sci 84: 1955 - 1958。(Ref。]
24. 費雪生物科技,澳大利亞。(Ref。]
25. Oxoid有限,漢普郡,英格蘭。(Ref。]
26. Airgas、杜倫、數控。
27. 美國密歇根州首府蘭辛Acumedia Neogen,。(Ref。]
28. BD和公司的火花。
29. Jamesway 52。Jamesway。孵化器公司。劍橋大學,加拿大安大略省。(Ref。]
30. 哈代診斷,美國加州聖瑪利亞。(Ref。]
31. 熱費希爾科學、Remel產品,Lenexa,堪薩斯州,美國。(Ref。]
32. Houng HS Sethabutr O, Nirdnoy W, Katz,彭日成LW(2001)發展ceuE-based多重聚合酶鏈反應(PCR)測定直接檢測和分化空腸彎曲杆菌和彎曲杆菌杆菌在泰國。成岩作用Microbiol感染說40:11-19。(Ref。]
33. 馬歇爾SM Melito PL,伍德沃德DL,約翰遜WM,羅傑斯FG, et al。(1999)快速idenntification彎曲杆菌,Arcobacter,幽門螺杆菌隔離的PCR-restriction 16 s rRNA基因片段長度多態性分析。中國Microbiol 37: 4158 - 4160。(Ref。]
34. 岡薩雷斯,格蘭特KA,理查森PT,公園科幻,柯林斯博士(1997年)的特定識別enteropathogens彎曲杆菌空腸和彎曲杆菌杆菌通過使用PCR測試基於ceuE基因編碼一個假定的毒性行列式。中國Microbiol 35: 759 - 763。(Ref。]
35. 領袖BT, Frye詹,胡錦濤J, Fedorka克雷PJ,博伊爾DS(2009)產量很高分子測定腸道沙門氏菌血清型利用多重PCR和毛細管電泳分析。中國Microbiol 47: 1290 - 1299。(Ref。]
36. 新英格蘭生物學實驗室公司。Ref。]
37. Bionumerics, 4.6版本,應用數學、Saint-Marten-Latem比利時。(Ref。]
38. 西格瑪化工有限公司,聖路易斯,密蘇裏州,美國。
39. 無條件轉移指令^®、版本11。SAS研究所Inc .)、美國北卡羅來納州卡裏。(Ref。]
40. SAS研究所。SAS / STAT用戶指南。Windows.2004 9.1版本。SAS本月。Inc .,卡裏,北卡羅萊納,美國。(Ref。]
41. 斯坦利·華萊士JS KN,瓊斯K(1998)由嗜熱火雞的殖民化彎曲杆菌。J: Microbiol 85: 224 - 230。(Ref。]
42. 史密斯K,雷蒙N,巴恩斯HJ,李公元前Siletzky R, et al。(2004)彎曲杆菌殖民的兄弟姐妹土耳其羊群在不同管理條件下飼養。J食品防67:1463 - 1468。(Ref。]
43. 雅各布斯Reitsma WF, van de吉森AW,大膽的海裏,穆德RW(1995)的流行病學彎曲杆菌在兩種蟲害荷蘭肉用雞農場。論文感染114:413 - 421。(Ref。]
44. 領域啊,張問,Meitzler JC,冷霧BS, Morishita泰,et al。(2001)患病率,抗原特異性和殺菌活性的家禽反彎曲杆菌母親的抗體。:環境Microbiol 67: 3951 - 3957。(Ref。]
45. 舍伍德JS, Thorsness JL Danzeisen GT, Doetkott C,羅格厘米(2008)基線彎曲杆菌患病率在新的土耳其生產設施在北達科他州。J食品防71:2295 - 2300。(Ref。]
46. C·賈科梅利M,資金,馬提尼M, Montesissa C, Piccirillo(2014)抗菌素耐藥性空腸彎曲杆菌和彎曲杆菌杆菌在意大利從家禽。活細胞藥物抵抗20:181 - 188。(Ref。]

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條信息

文章類型:研究文章

引用:克雷斯波MD,格蘭姆斯傑,Kathariou年代,考克斯NA,布爾RJ, et al .(2018)土耳其增殖Pathogens-Evaluation的垂直傳播沙門氏菌和彎曲杆菌在增殖火雞。J動畫Sci Res 2 (2): dx.doi.org/10.16966/2576 - 6457.112

版權:©2018克雷斯波醫學博士等。這是一個開放的文章下分布式知識共享歸屬許可條款,允許無限製的使用,分布和繁殖在任何媒介,被認為提供了原作者和來源。

出版的曆史:

收到日期:2018年3月26日

接受日期:2018年4月11日

發表日期:2018年4月18日,